【摘要】：背景及意義卵巢癌作為一種惡性程度極高的婦科腫瘤,預(yù)后不良,大多數(shù)患者就診時(shí)已為晚期,并且70%左右的卵巢癌患者會(huì)在兩年內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)。目前,卵巢癌的主要治療方法是以手術(shù)為基礎(chǔ),聯(lián)合輔助化療。隨著卵巢癌腹腔鏡手術(shù)及機(jī)器人輔助手術(shù)、輔助化療的改進(jìn),一定程度上改善了卵巢癌患者的圍手術(shù)期效果及預(yù)后,但由于化療藥物的毒副反應(yīng)及耐藥性的存在,多數(shù)卵巢癌患者經(jīng)過初始治療后會(huì)出現(xiàn)化療耐藥、腫瘤復(fù)發(fā)、廣泛轉(zhuǎn)移等,甚至導(dǎo)致患者死亡。晚期卵巢癌5年生存率小于30%。幾乎所有的患者都會(huì)產(chǎn)生原發(fā)性或獲得性的化療耐藥,而發(fā)生化療耐藥的卵巢癌患者的治療非常棘手,嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。因此,探索新的改善卵巢化療敏感性的治療方法,提高卵巢癌患者的無進(jìn)展期和總生存期,已刻不容緩。泛素特異性蛋白酶39(ubiquitin specific peptidase 39,USP39)基因位于人染色體2p11.2,調(diào)節(jié)紡錘體組裝檢查點(diǎn)和有絲分裂,參與mRNA剪切及剪切小體的組成,在細(xì)胞有絲分裂中維持紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)完整性,確保細(xì)胞成功有絲分裂,也參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。已有文獻(xiàn)報(bào)道,卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展與USP2、USP7、USP14等有密切關(guān)系。Liu S等發(fā)現(xiàn)USP39抑制乳腺癌細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移,影響乳腺癌患者預(yù)后。也有文獻(xiàn)報(bào)道,USP39與肝癌、甲狀腺髓樣癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、食管癌的增殖和凋亡有關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),USP39基因在卵巢癌組織中表達(dá)升高,體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),USP39可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移,并抑制細(xì)胞凋亡。USP39基因參與該過程可能是通過調(diào)控Aurora B基因的表達(dá),影響PI3K/AKT信號(hào)通路活性實(shí)現(xiàn)的。然而,USP39是否參與卵巢癌順鉑化療耐藥目前還無相關(guān)研究,卵巢癌順鉑化療耐藥細(xì)胞中USP39是否高表達(dá)、沉默USP39表達(dá)是否可改善卵巢癌化療耐藥等問題仍然不是很清楚。本研究旨在為改善卵巢癌患者順鉑化療耐藥提供一個(gè)新的思路。目的檢測(cè)USP39基因在順鉑耐藥細(xì)胞株OVCAR-3/DDP及其親本敏感細(xì)胞株OVCAR-3中的表達(dá)差異,USP39-siRNA轉(zhuǎn)染OVCAR-3/DDP細(xì)胞沉默USP39基因表達(dá),分析USP39基因沉默后卵巢癌細(xì)胞增殖及對(duì)順鉑化療敏感性的變化,為臨床上逆轉(zhuǎn)卵巢癌化療耐藥提供一個(gè)新的思路。方法1、應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和蛋白印跡方法檢測(cè)USP39 mRNA和蛋白在OVCAR-3/DDP及OVCAR-3細(xì)胞中的表達(dá)情況。2、USP39-siRNA轉(zhuǎn)染OVCAR-3/DDP細(xì)胞,反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和蛋白印跡方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中USP39基因的表達(dá)量。3、CCK-8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖情況及對(duì)順鉑化療耐藥性的變化。結(jié)果1、USP39在OVCAR-3/DDP細(xì)胞中mRNA的相對(duì)表達(dá)量是OVCAR-3細(xì)胞的(2.69±0.62)倍,蛋白表達(dá)量是OVCAR-3細(xì)胞的(2.21±0.53)倍,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示USP39在卵巢癌順鉑化療耐藥細(xì)胞株OVCAR-3/DDP中的表達(dá)顯著高于親本細(xì)胞株OVCAR-3中的表達(dá)。2、USP39-siRNA轉(zhuǎn)染OVCAR-3/DDP細(xì)胞后,以對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染組)OVCAR-3/DDP細(xì)胞內(nèi)USP39的mRNA和蛋白水平為100%,USP39在實(shí)驗(yàn)組(USP39-siRNA轉(zhuǎn)染組)OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA細(xì)胞中的mRNA表達(dá)水平為(19.28±2.92)%,蛋白表達(dá)水平為(18.25±2.81)%,與OVCAR-3/DDP細(xì)胞組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。USP39在空白組(USP39對(duì)照序列轉(zhuǎn)染組)OVCAR-3/DDP-USP39-NC細(xì)胞中的mRNA表達(dá)水平為(102.07±3.73)%,蛋白表達(dá)水平為(99.14±1.29)%,與OVCAR-3/DDP細(xì)胞組相比,無顯著差異(P0.05)。3、三組細(xì)胞分別和順鉑共同孵育24h、48h、72h后,與對(duì)照組OVCAR-3/DDP細(xì)胞及空白組OVCAR-3/DDP-USP39-NC細(xì)胞相比較,實(shí)驗(yàn)組OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA細(xì)胞增殖速度明顯降低、對(duì)順鉑的抑制率明顯升高;與不同濃度的順鉑共同孵育后,空白組OVCAR-3/DDP-USP39-NC細(xì)胞(IC50=(182.09±20.17)μmol/L)與對(duì)照組OVCAR-3/DDP細(xì)胞(IC50=(191.33±32.53)μmol/L)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與實(shí)驗(yàn)組OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA細(xì)胞組順鉑的IC50值為(47.24±3.17)μmol/L,,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、USP39基因在OVCAR-3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于OVCAR-3細(xì)胞。2、沉默USP39基因表達(dá)可抑制OVCAR-3/DDP細(xì)胞增殖能力及改善順鉑化療敏感性。3、USP39基因促進(jìn)卵巢癌順鉑化療耐藥產(chǎn)生,可作為卵巢癌順鉑化療耐藥新的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2259051