【摘要】：研究背景舌鱗癌是口腔鱗癌中發(fā)生率最高的惡性腫瘤,常在腫瘤早期即發(fā)生區(qū)域性頸淋巴轉(zhuǎn)移,嚴(yán)重影響患者的治療和預(yù)后。據(jù)統(tǒng)計(jì),無頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌患者的5年生存率大于50%,而有頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌患者的5年生存率則小于30%。目前臨床上對于舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不清晰,對其早期診斷及干預(yù)治療仍缺乏有效的手段。因此,深入了解舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制,尋找有效的早期診斷、干預(yù)舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移的新途徑,對于改善預(yù)后、提高患者的生存質(zhì)量具有重要意義。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長度大于200核苷酸,不具備蛋白編碼功能的RNA。越來越多的研究顯示lncRNA能夠在染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后等水平調(diào)控下游基因的表達(dá),進(jìn)而參與細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡等多種生物學(xué)過程并與腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。LncRNA是近幾年來發(fā)現(xiàn)的能夠參與多種病理生理過程并發(fā)揮重要作用的RNA,其在頭頸腫瘤中的研究剛剛起步,在舌鱗癌中的研究鮮有報(bào)道,其在舌鱗癌中的作用機(jī)制尚不清晰。并且尚未有學(xué)者研究與舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的lncRNA。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用基因芯片篩選并進(jìn)一步研究與舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的lncRNA,為舌鱗癌的診斷和治療提供新的方向。本研究分為以下三部分:第一部分舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)IncRNAs的篩選目的通過lncRNA表達(dá)譜芯片,探索可能與舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的lncRNA及其調(diào)控方式,為后續(xù)研究提供方向。方法1.基因芯片檢測舌鱗癌組織中l(wèi)ncRNA表達(dá)譜的差異;2.采用生物信息學(xué)分析探索lncRNA在舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移中的調(diào)控機(jī)制。結(jié)果1.通過lncRNA芯片檢測出在無頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌組織和頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌組織中表達(dá)量有顯著差異的lncRNA2210個(gè),其中表達(dá)上調(diào)者1188種,表達(dá)下調(diào)者1022種。篩選出了可能和舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的兩個(gè)lncRNA:NR_002819(MALAT1)(表達(dá)下調(diào))和 NR_002323(TUG1)(表達(dá)上調(diào));2.構(gòu)建可能影響舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子及其調(diào)控方式圖。結(jié)論多種lncRNA在無頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌組織和頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌組織的lncRNA表達(dá)譜中存在明顯差異,它們可能通過調(diào)控相關(guān)因子直接或間接參與調(diào)控舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移,尤其是肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(MALAT1)及牛磺酸上調(diào)基因1(TUG1)與舌鱗癌的關(guān)系值得進(jìn)一步研究。第二部分舌鱗癌組織中差異IncRNAs表達(dá)水平的驗(yàn)證目的進(jìn)一步驗(yàn)證MALAT1、TUGl在舌鱗癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)情況,選擇具有顯著差異的lncRNA進(jìn)行后期研究。方法利用Q-PCR實(shí)驗(yàn)對舌鱗癌組織和癌旁正常組織中MALAT1及TUG1的表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證并分析。結(jié)果1.在轉(zhuǎn)移組中,對比癌旁正常組織,癌組織中MALAT1的表達(dá)量顯著下調(diào)(P0.001);2.在無轉(zhuǎn)移組中,對比癌旁正常組織,癌組織中MALAT1的表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.001);3.轉(zhuǎn)移組與無轉(zhuǎn)移組相比,對比無轉(zhuǎn)移組癌組織,轉(zhuǎn)移組癌組織中MALAT1的表達(dá)量顯著下調(diào)(P0.001),與芯片結(jié)果一致;對比無轉(zhuǎn)移組癌旁正常組織,轉(zhuǎn)移組癌旁正常組織中MALAT1的表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.001);4.對比無轉(zhuǎn)移組癌組織,TUG1在轉(zhuǎn)移組癌組織中稍有下調(diào),但無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論從Q-PCR結(jié)果分析得出,無論在轉(zhuǎn)移組還是無轉(zhuǎn)移組,MALAT1在癌旁正常組織和癌組織中表達(dá)量都具有顯著性差異,這說明MALAT1在舌鱗癌的發(fā)生中具有一定作用。未發(fā)生頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌的癌組織中MALAT1的表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織,而發(fā)生頸淋巴轉(zhuǎn)移舌鱗癌的癌組織中MALAT1的表達(dá)量明顯低于癌旁正常組織,這說明MALAT1的表達(dá)量在舌鱗癌發(fā)生頸淋巴轉(zhuǎn)移前后有了顯著變化。對比轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組癌組織,轉(zhuǎn)移組中MALAT1的表達(dá)量明顯低于無轉(zhuǎn)移組,提示MALAT1的表達(dá)水平可能與舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān),MALAT1在舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制值得進(jìn)一步研究。第三部分MALAT1對舌鱗癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響目的檢測MALAT1在舌鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,利用體外實(shí)驗(yàn)研究MALAT1對舌鱗癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響。方法1.Q-PCR檢測舌鱗癌細(xì)胞系中MALAT1的表達(dá)情況;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測舌鱗癌細(xì)胞系的遷移能力;2.構(gòu)建MALAT1的有效干擾慢病毒及陰性對照;3.CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測MALAT1表達(dá)下調(diào)對舌鱗癌細(xì)胞體外增殖能力的影響;4.細(xì)胞劃痕和transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測MALATI表達(dá)下調(diào)對舌鱗癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果1.MALAT1在舌鱗癌細(xì)胞系CAL-27、SCC15、Tca8113中表達(dá)水平較高(ACt值≤12)。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:CAL-27細(xì)胞遷移率為57%;SCC15細(xì)胞遷移率為63%,均可進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。Tca-8113細(xì)胞遷移率為24%,不適宜進(jìn)行遷移實(shí)驗(yàn);2.成功構(gòu)建MALAT1的有效干擾慢病毒LV-MALAT1-RNAi(25688-1)及陰性對照慢病毒CON077;3.CCK8實(shí)驗(yàn)顯示,MALAT1表達(dá)下調(diào)可抑制舌鱗癌細(xì)胞的體外增殖能力:在CAL-27、Tca8113細(xì)胞中,細(xì)胞增殖倍數(shù)顯著降低(P0.01),在SCC15細(xì)胞中稍有降低,但無顯著性差異(P0.05);4.細(xì)胞劃痕和transwell小室實(shí)驗(yàn)顯示,MALAT1表達(dá)下調(diào)可顯著抑制舌鱗癌細(xì)胞CAL-27、SCC15的體外遷移能力(P0.05);MALAT1表達(dá)下調(diào)可顯著抑制舌鱗癌細(xì)胞CAL-27、SCC15的侵襲能力(P0.01)。結(jié)論1.MALAT1在舌鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平與舌鱗癌細(xì)胞系的遷移能力成正比。2.MALAT1可在轉(zhuǎn)染MALAT1-shRNA的舌鱗癌細(xì)胞系中呈現(xiàn)低表達(dá)。3.MALAT1表達(dá)下調(diào)可抑制舌鱗癌細(xì)胞的體外增殖、遷移及侵襲能力,提示MALAT1在舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要作用,有望成為舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移的診斷和治療靶點(diǎn),其在舌鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移中的調(diào)節(jié)機(jī)制有待我們進(jìn)一步探索。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.86

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2259024