【摘要】：[背景]Th2細(xì)胞及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。IL-4、IL-13能夠刺激巨噬細(xì)胞向M2型分化并表達(dá)IL-10、TGF-β1與arginase-1等抑制因子以及VEGF、EGF等促腫瘤血管生成因子;此外,其促進(jìn)Tregs和MDSCs的分化及向腫瘤的趨化浸潤,抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等抗腫瘤免疫效應(yīng)。因此,靶向調(diào)控IL-4、IL-13功能,具有下調(diào)Th2、Treg、MDSCs及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞等免疫抑制細(xì)胞應(yīng)答,增強(qiáng)CTLs/Th1效應(yīng)細(xì)胞應(yīng)答的潛力。[目的]揭示抗IL-4、IL-13主動(dòng)免疫持續(xù)干預(yù)腫瘤微環(huán)境Th2應(yīng)答對(duì)腫瘤生長(zhǎng)與抗腫瘤免疫,以及對(duì)腫瘤抗原特異治療性疫苗作用發(fā)揮的影響,探討其中的免疫效應(yīng)機(jī)制,為腫瘤免疫干預(yù)治療提供可能的有效手段和策略。[方法]以基因重組技術(shù)構(gòu)建呈現(xiàn)IL-4、IL-13抗原表位的乙肝核心抗原(HBcAg)病毒樣顆粒(VLPs)疫苗;經(jīng)TC-1腫瘤細(xì)胞皮下移植C57小鼠,建立HPV感染引起腫瘤的小鼠模型;在腫瘤模型中,首先以預(yù)防性策略進(jìn)行抗IL-4、IL-13 疫苗免疫, 考察誘導(dǎo)的特異抗體對(duì)隨后 TC-1 移植腫瘤生長(zhǎng)及小 鼠抗腫瘤免疫應(yīng)答的影響;然后以治療性策略進(jìn)行抗細(xì)胞因子主動(dòng)免疫單獨(dú)或聯(lián)合腫瘤抗原特異治療性HPV疫苗免疫,考察腫瘤微環(huán)境建立后,抗IL-4、IL-13免疫是否仍能影響腫瘤生長(zhǎng),以及對(duì)腫瘤抗原特異的治療性疫苗的作用發(fā)揮有影響。具體操作是,先對(duì)C57小鼠進(jìn)行TC-I腫瘤細(xì)胞接種,當(dāng)腫瘤長(zhǎng)至1-2mmm直徑時(shí),進(jìn)行抗IL-4、IL-13疫苗免疫,當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至5-6mm直徑時(shí),再進(jìn)行抗原特異的治療性HPV疫苗免疫干預(yù)。動(dòng)物模型研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括:每?jī)傻饺鞙y(cè)量記錄腫瘤大小;在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn),以流式細(xì)胞術(shù)分析免疫細(xì)胞(如Th1、Th2、Tregs和CTLs)的應(yīng)答水平與功能狀態(tài),以ELISPOT分析抗原特異的表達(dá)IFN- γ或IL-4的脾細(xì)胞應(yīng)答,以ELISA檢測(cè)血清及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN- γ,IL-4和IL-13表達(dá)。[結(jié)果]重組蛋白在大腸桿菌中獲得高效表達(dá),純化后的蛋白主要以VLPs形式存在�？笽L-4、IL-13 VLPs疫苗免疫小鼠激發(fā)了高水平的特異抗體應(yīng)答。在預(yù)防性免疫研究中,抗IL-4、IL-13疫苗顯著抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng);ELISOPT結(jié)果顯示疫苗免疫顯著促進(jìn)HPV16 E7抗原特異的表達(dá)IFN-γ的脾細(xì)胞應(yīng)答水平,而下調(diào)了表達(dá)IL-4的脾細(xì)胞水平;疫苗免疫小鼠血清及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-4、IL-13水平顯著降低,而IFN-γ表達(dá)水平顯著提高;流式分析顯示,疫苗顯著抑制了Th2、Tregs細(xì)胞水平而增強(qiáng)了Th1細(xì)胞水平,此外,腫瘤抗原特異CTLs水平也顯著增強(qiáng)。在治療性免疫干預(yù)研究中,單獨(dú)抗IL-4、IL-13主動(dòng)免疫同樣表現(xiàn)出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的顯著抑制,ELISA分析顯示小鼠血清中IFN-γ表達(dá)水平增高,同時(shí)流式分析顯示脾細(xì)胞中的Th1與CTLs細(xì)胞水平提高而抑制了 Tregs細(xì)胞的水平。進(jìn)一步的,當(dāng)抗IL-4、IL-13疫苗與治療性HPV疫苗聯(lián)合免疫時(shí),顯示了顯著的協(xié)同作用,即更顯著的腫瘤生長(zhǎng)抑制,以及Th1/CTLs效應(yīng)細(xì)胞應(yīng)答增強(qiáng)及Tregs應(yīng)答減弱。[結(jié)論]靶向IL-4和IL-13的疫苗主動(dòng)免疫可誘導(dǎo)高水平的、持續(xù)存在的特異抗體應(yīng)答,顯著抑制小鼠腫瘤的生長(zhǎng),且對(duì)腫瘤抗原特異治療性疫苗的抗腫瘤作用具有協(xié)調(diào)作用。研究揭示抗IL-4、IL-13主動(dòng)免疫是潛在的腫瘤免疫干預(yù)新策略,并提供了可能的有效干預(yù)手段。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R730.51

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本文編號(hào)：2254154