發(fā)布時間：2018-10-05 12:04

【摘要】：目的構(gòu)建OSKM誘導(dǎo)的過表達(dá)c-Jun肝癌細(xì)胞(C3A-c-Jun)重編程細(xì)胞系,探討外源性c-Jun對肝癌細(xì)胞重編程的影響。方法通過C3A細(xì)胞穩(wěn)定過表達(dá)c-Jun后進(jìn)行OSKM誘導(dǎo)重編程,通過堿性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印跡法,免疫熒光等技術(shù)對細(xì)胞進(jìn)行鑒定,建立C3A-c-Jun誘導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞系C3A-c-Jun-i CSCs。結(jié)果 C3A-c-Jun-i CSCs克隆呈圓頂狀,邊緣圓鈍,克隆內(nèi)細(xì)胞小且排列緊密,多層分布,堿性磷酸酶染色陽性,mRNA和蛋白水平均可表達(dá)多潛能性標(biāo)記物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-i CSCs組外源性和內(nèi)源性Sox2的表達(dá)量均明顯高于C3A-i CSCs對照組;在重編程過程中c-Jun持續(xù)表達(dá)。結(jié)論 OSKM誘導(dǎo)C3A、C3A-c-Jun肝癌細(xì)胞重編程,分別建立C3A-i CSCs和C3A-c-Jun-i CSCs細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)外源性c-Jun通過上調(diào)Sox2基因的表達(dá),啟動下游一系列反應(yīng),對肝癌細(xì)胞重編程過程起促進(jìn)作用。
[Abstract]:Objective to construct OSKM induced reprogramming cell line of c-Jun cells (C3A-c-Jun) and to investigate the effect of exogenous c-Jun on reprogramming of hepatoma cells. Methods after overexpression of c-Jun in C3A cells, OSKM induction reprogramming was carried out, and C3A-c-Jun induced tumor stem cell line C3A-c-Jun-i CSCs. was established by using alkaline phosphatase staining and real-time PCR, immunoblotting, immunofluorescence and other techniques. Results the C3A-c-Jun-i CSCs clones were domed and obtuse at the edge. The cells in the clones were small and tightly arranged and distributed in multiple layers. The expression of exogenous and endogenous Sox2 in OCT4,SOX2;C3A-c-Jun-i CSCs group was significantly higher than that in C3A-i CSCs control group, and the expression of c-Jun continued during reprogramming. Conclusion OSKM induces reprogramming of C3A- C3A-c-Jun hepatoma cells and establishes C3A-i CSCs and C3A-c-Jun-i CSCs cell lines respectively. It is found that exogenous c-Jun promotes the reprogramming process of HCC cells by up-regulating the expression of Sox2 gene and initiating a series of downstream reactions.
【作者單位】： 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部細(xì)胞生物學(xué)系;北京東方亞美基因科技研究院有限公司;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81572313) 廣東省省級科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015B020229002)
【分類號】：R735.7

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本文編號：2253308