發(fā)布時間：2018-09-19 16:04

【摘要】：目前臨床上已經(jīng)廣泛應(yīng)用化驗?zāi)蛞旱润w液中的成分來進(jìn)行疾病診斷。唾液是人體的一種外分泌液,主要由三對大唾液腺(腮腺、頜下腺、舌下腺)所分泌。唾液中的有機(jī)、無機(jī)成分非常豐富,中含有一千多種蛋白質(zhì)和大量的無機(jī)鹽。唾液能夠通過許多的無創(chuàng)性手段簡便快速獲取,然而,應(yīng)用唾液進(jìn)行常規(guī)的疾病診斷目前還沒有實現(xiàn)。有研究證實,當(dāng)機(jī)體存在系統(tǒng)性疾病或者口腔局部病變時,許多唾液蛋白的表達(dá)都將產(chǎn)生變化,例如:糖尿病、舍格倫綜合征、牙周炎以及口腔鱗狀細(xì)胞癌。那么,腮腺作為分泌唾液的三大唾液腺之一,當(dāng)其發(fā)生腫瘤時,唾液蛋白成分理論上會產(chǎn)生變化,這些改變對于腮腺腫瘤的診斷是否有參考價值呢?為了探究腮腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PMA)和腮腺惡性腫瘤(parotid malignant tumors,PMT)存在時腮腺所分泌的唾液蛋白的表達(dá)異常,本實驗使用液相色譜電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜(Liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry,LC-ESI-MS/MS)技術(shù)來對腮腺腫瘤患者的唾液蛋白進(jìn)行蛋白組學(xué)對比分析,并使用ELISA技術(shù)進(jìn)行差異蛋白驗證。研究目的:1.通過測定不同腮腺腫瘤患者及正常人群唾液蛋白組,找到能夠反應(yīng)腮腺腫瘤存在的蛋白標(biāo)志物。2.證實質(zhì)譜檢測技術(shù)所鑒定的重要蛋白在唾液中真實存在。3.通過比較不同腮腺腫瘤患者唾液蛋白組分,找到具有代表性的標(biāo)志物,輔助術(shù)前明確腫瘤良惡性或腫瘤性質(zhì)。實驗方法:分別采集腮腺多形性腺瘤、腮腺惡性腫瘤及正常人群的腮腺唾液標(biāo)本各5例,使用質(zhì)譜分析方法篩選差異表達(dá)蛋白。腫瘤組采集患側(cè)唾液樣本,正常對照組隨機(jī)采集一側(cè),提取、純化唾液蛋白,超濾濃縮、裂解、脫鹽后,進(jìn)行質(zhì)譜分析檢測,分析數(shù)據(jù)找出差異蛋白后,加大樣本量,使用ELISA試劑盒選擇性鑒定多形性腺瘤組顯著性增高的galectin-7。實驗結(jié)果:總共有21個蛋白在三組樣本間的表達(dá)量存在1.5倍或更大改變。其中g(shù)alectin-7在PMA組中的表達(dá)量顯著性高于PMT組及對照組;SPARCL1(Hevin)在PMT組中的表達(dá)量顯著性低于PMA組及對照組;Azurocidin及ARPC4-TTLL3在PMA組和PMT組中的表達(dá)量顯著性高于對照組;Cystatin C和Lipocalin 1在PMA組和PMT組中的表達(dá)量則顯著性低于對照組。進(jìn)一步對18個PMA樣本、6個正常樣品及5個惡性腫瘤樣本中的galectin-7進(jìn)行ELISA檢測,多個獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗及秩和檢驗分析結(jié)果顯示:唾液中g(shù)alectin-7含量在多形性腺瘤組中較對照組(P=0.002)及惡性腫瘤組(P=0.008)均顯著性增高,而對照組與惡性腫瘤組之間無顯著性差異(P=0.193)。實驗結(jié)論:1.質(zhì)譜檢測能夠特異性地篩選出腮腺腫瘤患者唾液中有顯著性改變的蛋白。2.通過質(zhì)譜檢測技術(shù)及ELISA檢測均證明,唾液galectin-7在多形性腺瘤組中表達(dá)明顯高于對照組及惡性腫瘤組,而對照組與惡性腫瘤組之間相比較無顯著性差異。3.galectin-7有望在多形性腺瘤的術(shù)前無創(chuàng)性診斷中提供重要參考。
[Abstract]:Saliva is an exocrine fluid of the human body, secreted mainly by three large salivary glands (parotid glands, submandibular glands, sublingual glands). Saliva is rich in organic and inorganic components, containing more than a thousand proteins and a large number of inorganic salts. Conventional diagnosis of diseases using saliva has not been achieved yet. Studies have shown that when systemic diseases or local oral lesions occur, the expression of many salivary proteins changes, such as diabetes, Schoegren's syndrome, periodontitis and oral squama. So, parotid gland as one of the three salivary glands secreting saliva, when the tumor occurs, the salivary protein composition will theoretically change, these changes for the diagnosis of parotid gland tumors have reference value? In order to explore parotid pleomorphic adenoma (PMA) and parotid malignant tumor (parotid malignancy) Ors (PMT) exists abnormal expression of salivary proteins secreted by parotid glands. In this study, the Liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) technique was used to analyze the salivary proteins in parotid tumor patients by proteomic analysis and the use of ELISA technology. Objectives: 1. To find protein markers that can reflect the presence of parotid gland tumors by determining the salivary protein groups of different parotid gland tumor patients and normal people. 2. To confirm the existence of important proteins in saliva identified by mass spectrometry. 3. To find out the salivary protein components of different parotid gland tumor patients by comparing the salivary protein components. Methods: Samples of parotid gland saliva from 5 patients with pleomorphic adenoma, 5 patients with malignant tumor of parotid gland and 5 patients with normal salivary gland were collected, and the differentially expressed proteins were screened by mass spectrometry. On one side, salivary protein was extracted, purified, concentrated, lysed and desalted, then analyzed by mass spectrometry. After differentially expressed proteins were identified, the sample size was increased and the Galectin-7 significantly increased in pleomorphic adenoma group was identified by ELISA kit. The expression of Galectin-7 in PMA group was significantly higher than that in PMT group and control group; the expression of SPARCL1 (Hevin) in PMT group was significantly lower than that in PMA group and control group; the expression of Azurocidin and ARPC4-TTLL3 in PMA group and PMT group was significantly higher than that in control group; the expression of Cystatin C and Lipocalin-1 in PMA group and PMT group was significantly higher than that in PMT group. Galectin-7 was detected by ELISA in 18 PMA samples, 6 normal samples and 5 malignant tumor samples. The results of non-parametric and rank sum tests showed that Galectin-7 content in saliva was higher in pleomorphic adenoma group than in control group (P = 0.002) and malignant tumor group (P = 0.008). There was no significant difference between the control group and the malignant tumor group (P = 0.193). Conclusion: 1. Mass spectrometry can specifically screen out salivary proteins with significant changes in parotid tumor patients. 2. Mass spectrometry and ELISA detection showed that the expression of Galectin-7 in saliva was significantly higher in pleomorphic adenoma group. There was no significant difference between the control group and the malignant tumor group. 3. Galectin-7 is expected to provide an important reference for the preoperative non-invasive diagnosis of pleomorphic adenoma.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱形好,高磊民,王靖蕭,王瑩;腮腺多形性腺瘤的手術(shù)治療[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2002年11期

2 吳其勤,胡勤剛;兒童腮腺多形性腺瘤臨床分析[J];口腔醫(yī)學(xué);2003年06期

3 劉世杰;副腮腺多形性腺瘤診治體會(附6例報告)[J];實用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

4 劉廣毅,楊志敏;腮腺多形性腺瘤73例手術(shù)治療效果分析[J];華西醫(yī)學(xué);2005年01期

5 謝景華;高雄輝;吳曉鐘;孟慶翔;何龍;王磊;梁賜芳;;區(qū)域性切除在腮腺多形性腺瘤手術(shù)中的臨床應(yīng)用[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2006年05期

6 劉軍;;影響腮腺多形性腺瘤治療效果的因素分析[J];醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)資訊;2006年21期

7 王廣山;;腮腺多形性腺瘤84例臨床分析[J];臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志;2006年08期

8 曹春雷;;腮腺多形性腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)11例臨床分析[J];口腔頜面外科雜志;2006年03期

9 劉利軍;林兆全;;96例腮腺多形性腺瘤的臨床分析[J];新疆醫(yī)學(xué);2007年01期

10 邱嘉旋;朱聲榮;黃松;祝永紅;邵益森;曹鐘義;習(xí)偉宏;;腮腺多形性腺瘤并腺體區(qū)域性切除邊界的界定[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年01期

相關(guān)會議論文 前9條

1 劉軍;;影響腮腺多形性腺瘤治療效果的因素分析[A];第三次全國涎腺疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

2 金國榮;胡建道;高華珊;;腮腺多形性腺瘤部分腮腺切除的臨床應(yīng)用分析[A];2006年浙江省耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

3 陸守昌;;腮腺多形性腺瘤的外科治療附35例報告[A];FDI、CSA臨床口腔進(jìn)展學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1999年

4 黃愛玉;貢志剛;劉民志;張孟殷;嚴(yán)文洪;;正常腮腺及腮腺多形性腺瘤胞核雌激素受體的測定[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會成立大會暨第六次全國口腔醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1996年

5 王曉毅;王洪萍;溫玉明;王昌美;董佳增;楊曉勇;;CD44v6在腮腺多形性腺瘤復(fù)發(fā)及惡變中的表達(dá)[A];第三次全國涎腺疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

6 李志剛;平凡;孫德剛;劉風(fēng)軍;唐建民;;p16抑制基因在腮腺多形性腺瘤預(yù)后判斷中的作用[A];第三次全國涎腺疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 李志剛;王佩玉;;p16腫瘤抑制基因在腮腺多形性腺瘤中表達(dá)的定量分析及其臨床意義[A];第一屆全國口腔頜面部腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

8 鄒海娥;;腮腺多形性腺瘤的CT表現(xiàn)[A];2008年浙江省放射學(xué)年會論文匯編[C];2008年

9 李慧敏;;超聲在腮腺多形性腺瘤和腺淋巴瘤診斷中的價值[A];2012年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 黃寬恩;86例腮腺多形性腺瘤外科治療的回顧和分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 羊正林;腮腺多形性腺瘤及惡性腫瘤的唾液蛋白組學(xué)初探[D];山東大學(xué);2017年

3 徐義全;腮腺多形性腺瘤改良性外科治療的臨床和基礎(chǔ)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

4 劉杰;腮腺多形性腺瘤二次復(fù)發(fā)的多因素分析[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 王宇飛;PTEN基因在腮腺多形性腺瘤中表達(dá)及意義[D];南昌大學(xué);2011年

6 李春艷;抑癌基因PTEN在口腔鱗狀細(xì)胞癌、腮腺多形性腺瘤及粘液表皮樣癌中的突變與缺失[D];吉林大學(xué);2004年

7 余俊;AQP1和AQP5在腮腺多形性腺瘤中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2012年

8 祝永紅;Ki-67、p16與腮腺多形性腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究[D];南昌大學(xué);2008年

9 邱雪冰;CD44v6、E-cadherin和ki-67蛋白在腮腺多形性腺瘤中的表達(dá)及生物學(xué)意義[D];石河子大學(xué);2013年

，

本文編號：2250618