發(fā)布時間：2018-09-08 07:32

【摘要】：濾泡性淋巴瘤(FL)是一種常見的惰性B細(xì)胞淋巴瘤,占惰性淋巴瘤的70%。在濾泡性淋巴瘤中80%-90%的病例存在14號與18號染色體異位,導(dǎo)致這些病例中BCL-2呈陽性表達(dá),但其余10%-20%左右的病例由于缺乏t(14;18)(q32;q21)而不表達(dá)BCL-2。目前,對于BCL-2表達(dá)為陰性的濾泡性淋巴瘤即使通過免疫化學(xué)染色方法檢測其他標(biāo)志物的表達(dá)對其進(jìn)行診斷仍有困難,因此找到一個在各分級結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤高表達(dá)同時在BCL-2陰性樣本中高表達(dá)的濾泡性淋巴瘤診斷標(biāo)志物對于濾泡性淋巴瘤的臨床診斷具有重要意義。本實驗擬通過基因芯片找到結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤與反應(yīng)性濾泡增生病例相比具有差異性表達(dá)的基因,并對其功能進(jìn)行研究,意在找到一個新型的FL診斷標(biāo)志物并初步探索其影響FL發(fā)生、發(fā)展的可能的分子機(jī)制。具體實驗方法和結(jié)果如下:方法(1)通過基因芯片分析找到結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤與反應(yīng)性濾泡增生相比具有差異性表達(dá)的基因,進(jìn)一步篩選出差異最明顯的基因,綜合考慮現(xiàn)有抗體產(chǎn)品的局限性等因素,確定PCDHGA3為研究對象。(2)運用免疫組織化學(xué)染色方法檢測PCDHGA3在各分級的結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤及反應(yīng)性濾泡增生病例中的表達(dá)情況,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,探討PCDHGA3是否可以成為結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤的診斷標(biāo)志物。(3)采用RT-PCR檢測PCDHGA3在結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況,應(yīng)用si RNA下調(diào)PCDHGA3的表達(dá)水平,研究PCDHGA3對細(xì)胞增殖的影響,通過實時定量PCR檢測NF-κB信號通路相關(guān)基因表達(dá),以探索PCDHGA3調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的可能的分子機(jī)制。對基因芯片數(shù)據(jù)中差異表達(dá)基因進(jìn)行分析,找到與PCDHGA3基因表達(dá)相關(guān)的共表達(dá)基因,通過免疫熒光化學(xué)染色的方法檢測共表達(dá)基因在濾泡性淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果(1)基因芯片分析結(jié)果顯示,原鈣粘蛋白γ家族13個成員基因(原鈣粘蛋白γA2,A3,A5,A7,A8,A9,A12,B1,B3,B4,B6和B7)在結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤中高表達(dá),其中上調(diào)最明顯的5個基因分別為原鈣粘蛋白A3,A5,B2,B3和B4。(2)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,原鈣粘蛋白γA3在1級結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤的表達(dá)率為93.1%(27/29),2級結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤的表達(dá)率為83.3%(5/6),3級結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤的表達(dá)率為55.6%(5/9)。同時在結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤彌漫區(qū)域其表達(dá)率為100%(10/10),但在反應(yīng)性濾泡增生的表達(dá)率僅為5.9%(1/17),并且在BCL-2呈陰性表達(dá)的結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤病例中原鈣粘蛋白γA3仍為高表達(dá)(86.7%,13/15)。(3)PCR結(jié)果證實,原鈣粘蛋白γA3在濾泡性淋巴瘤細(xì)胞系F18和F318中均表達(dá)。運用電轉(zhuǎn)染的方法將PCDHGA3 si RNA轉(zhuǎn)染入FL18細(xì)胞后,實時定量PCR及Western blot結(jié)果證實結(jié)果PCDHGA3 si RNA3可使原鈣粘蛋白γA3的表達(dá)下調(diào)60%(p=0.005)。細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示,下調(diào)原鈣粘蛋白γA3的表達(dá)后,FL18細(xì)胞增殖與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比明顯減慢(26±2.16vs 43.3±1.43,p0.001)。同時,實時定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染PCDHGA3si RNA3的FL18細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的NF-κB信號通路相關(guān)基因RELA、NFKB1、NFKB2表達(dá)下調(diào),提示原鈣粘蛋白γA3可能是通過NF-κB信號通路調(diào)節(jié)濾泡性淋巴瘤細(xì)胞的增殖。通過對結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤及反應(yīng)性濾泡增生病例中差異表達(dá)的基因數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,找到與PCDHGA3基因表達(dá)呈正相關(guān)且相關(guān)度最大的五個基因,分別為OPRL1,TNFRSF6B,ADAMTSL5,ACCSL和CHST4,其中TNFRSF6B蛋白與PCDHGA3蛋白在FL18細(xì)胞膜共表達(dá)。結(jié)論(1)結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤與反應(yīng)性濾泡增生病例相比,差異表達(dá)最明顯的5個基因分別為原鈣粘蛋白γ家族A3,A5,B2,B3和B4。(2)與反應(yīng)性濾泡增生病例相比,PCDHGA3在各分級結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤病例中呈現(xiàn)高表達(dá),其中BCL-2陰性FL病例PCDHGA3亦呈現(xiàn)高表達(dá)。因此PCDHGA3是結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤潛在的診斷標(biāo)志物。(3)沉默PCDHGA3基因后FL18細(xì)胞增殖減慢,經(jīng)典NF-κB信號通路相關(guān)基因RELA,NFKB1和NFKB2表達(dá)水平下調(diào)。說明沉默PCDHGA3基因可抑制FL細(xì)胞增殖,并且可能是通過下調(diào)經(jīng)典NF-κB信號通路相關(guān)基因發(fā)揮抑制作用。(4)具有通過與Fas配體相結(jié)合抑制細(xì)胞凋亡作用的TNFRSF6B蛋白在結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤中表達(dá)且其表達(dá)與PCDHGA3相關(guān),提示PCDHGA3可能是通過TNFRSF6B調(diào)節(jié)FL18細(xì)胞增殖。
[Abstract]:Follicular lymphoma (FL) is a common inert B-cell lymphoma, accounting for 70% of inert lymphoma. 80% to 90% of follicular lymphoma cases have heterotopic chromosomes 14 and 18, resulting in positive expression of BCL-2 in these cases, but the remaining 10% to 20% of cases due to lack of t (14; 18) (q32; q21) but not expression of BCL-2. It is still difficult to diagnose follicular lymphoma with negative expression of-2 even if the expression of other markers is detected by immunochemical staining. Therefore, it is difficult to find a diagnostic marker for follicular lymphoma with high expression in all grades of follicular lymphoma and high expression in BCL-2 negative samples for follicular lymphoma. The purpose of this study is to identify the differentially expressed genes in intranodal follicular lymphoma (IFL) and reactive follicular hyperplasia (RFH) by gene chip, and to study their functions in order to find a novel FL diagnostic marker and explore the possible molecular mechanism of FL. Methods: (1) The genes differentially expressed between intranodal follicular lymphoma and reactive follicular hyperplasia were identified by gene chip analysis, and the most distinct genes were screened out. PCDHGA3 was selected as the research object by considering the limitation of antibody products. The expression of PCDHGA3 in different grades of intranodal follicular lymphoma and reactive follicular hyperplasia was detected by histochemical staining, and statistical analysis was carried out to explore whether PCDHGA3 could be used as a diagnostic marker of intranodal follicular lymphoma. (3) The expression of PCDHGA3 in intranodal follicular lymphoma cell lines was detected by RT-PCR. SiRNA was used to down-regulate the expression of PCDHGA3, and the effect of PCDHGA3 on cell proliferation was studied. The expression of genes related to NF-kappa B signaling pathway was detected by real-time quantitative PCR to explore the possible molecular mechanism of PCDHGA3 regulating cell proliferation. Results (1) Gene chip analysis showed that 13 members of the procadherin gamma family (procadherin gamma A2, A3, A5, A7, A8, A9, A12, B1, B3, B4, B6 and B7) were highly expressed in intranodal follicular lymphoma. (2) Immunohistochemical staining showed that the expression of procadherin gamma A3 in primary intranodal follicular lymphoma was 93.1% (27/29), that in grade 2 intranodal follicular lymphoma was 83.3% (5/6), and that in grade 3 intranodal follicular lymphoma was 55.6%. (5/9). At the same time, the expression rate was 100% (10/10) in the diffuse region of intranodal follicular lymphoma, but only 5.9% (1/17) in reactive follicular hyperplasia, and the expression of pro-cadherin gamma A3 was still high in BCL-2 negative intranodal follicular lymphoma (86.7%, 13/15). (3) PCR results confirmed that pro-cadherin gamma A3 was in follicular lymphoma. Both F18 and F318 were expressed in lymphoma cell lines. PCDHGA3 Si RNA was transfected into FL18 cells by electrotransfection. Real-time quantitative PCR and Western blot results showed that PCDHGA3 Si RNA 3 could down-regulate the expression of procadherin gamma A3 by 60% (p = 0.005). Cell counts showed that FL18 cells were down-regulated by down-regulating the expression of procadherin gamma A3. The proliferation of FL18 cells transfected with PCDHGA3si RNA 3 was significantly slower than that of untransfected cells (26 Proliferation of follicular lymphoma cells. By analyzing the differentially expressed gene data in intranodal follicular lymphoma and reactive follicular hyperplasia, five genes with the greatest positive correlation with the expression of PCDHGA3 gene were identified, namely OPRL1, TNFRSF6B, ADAMTSL5, ACCSL and CHST4, in which TNFRSF6B and PCDHGA3 proteins were FL. Conclusion (1) Compared with reactive follicular hyperplasia, PCDHGA3 was overexpressed in all grades of intranodal follicular lymphoma, and BCL-2 was negative. PCDHGA3 was also highly expressed in FL patients. Therefore, PCDHGA3 was a potential diagnostic marker for intranodal follicular lymphoma. (3) After PCDHGA3 gene silencing, FL18 cells proliferated slowly, and the expression levels of classical NF-kappa B signaling pathway related genes RELA, NFKB1 and NFKB2 were down-regulated. (4) The expression of TNFRSF6B protein in intranodal follicular lymphoma is related to PCDHGA3, suggesting that PCDHGA3 may regulate FL18 cell proliferation through TNFRSF6B.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邱丙森;原發(fā)性皮膚濾泡性淋巴瘤研究進(jìn)展[J];實用腫瘤雜志;2004年03期

2 謝蘊;潘玉林;金曉龍;袁春艷;浦文蘭;;闌尾原發(fā)性濾泡性淋巴瘤一例報道及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年07期

3 劉勇;;伴漿細(xì)胞分化的濾泡性淋巴瘤可分為兩種亞型[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2010年02期

4 王小英;劉德純;王玉華;鐘萍萍;;擴(kuò)散性濾泡性淋巴瘤1例報告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];實用癌癥雜志;2010年06期

5 孫大菊;王鐵延;楊華;;濾泡性淋巴瘤轉(zhuǎn)變?yōu)閺浡源驜細(xì)胞淋巴瘤1例[J];診斷病理學(xué)雜志;2010年04期

6 晉大祥;謝煒星;江曉兵;梁德;;侵犯脊柱的濾泡性淋巴瘤1例報道[J];中國脊柱脊髓雜志;2011年02期

7 施遠(yuǎn)洋;鄭瑞璣;林榮金;陳暄暄;;濾泡性淋巴瘤患者預(yù)后相關(guān)因素分析[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年06期

8 潘毅;孟斌;付凱;孫保存;;98例濾泡性淋巴瘤組織學(xué)及遺傳學(xué)的初步研究[J];中國腫瘤臨床;2011年18期

9 潘毅;孫保存;;t(14;18)陰性濾泡性淋巴瘤的分子遺傳學(xué)機(jī)制及研究進(jìn)展[J];中國腫瘤臨床;2011年21期

10 鄭熙年,仲明,宋增民;原發(fā)性右腎巨大濾泡性淋巴瘤1例報告[J];江蘇醫(yī)藥;1987年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉紅利;;濾泡性淋巴瘤治療體會[A];第四屆湖北省抗癌協(xié)會青年委員會學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2012年

2 楊文萍;;兒童侵襲性成熟B細(xì)胞淋巴瘤的病理診斷問題[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

3 錢悅;黃長征;陳思遠(yuǎn);;原發(fā)性皮膚濾泡性淋巴瘤兩例[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

4 司英健;張曦;陳幸華;;淋巴濾泡瘤樣增生與濾泡性淋巴瘤鑒別診斷(附個案一例)[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

5 高子芬;;WHO淋巴瘤分類及口腔常見淋巴瘤類型[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會第七屆全國口腔病理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2006年

6 郭英;黃高f;;Bcl-2陰性濾泡性淋巴瘤發(fā)病機(jī)理的研究[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

7 郭曄;;Double-hit淋巴瘤的爭議與共識[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

8 楊開顏;金珍琳;俞康;王素芬;;P73基因在反應(yīng)性淋巴結(jié)增生性炎及濾泡性淋巴瘤中的表達(dá)[A];2009年浙江省病理學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

9 張學(xué)美;徐明;;實時定量PCR檢測淋巴瘤Bcl-2/IgH融合基因及其臨床應(yīng)用研究[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

10 吳暉;黃雪珍;;原發(fā)性骨非霍奇金淋巴瘤臨床分析[A];第十次全國淋巴瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 本報記者 連漪;淋巴瘤：規(guī)范化治療能顯著提高生存率[N];健康報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 張雪妍;結(jié)內(nèi)濾泡性淋巴瘤的新標(biāo)識—原鈣粘蛋白γA3[D];吉林大學(xué);2016年

2 郭英;濾泡性淋巴瘤形態(tài)、免疫表型及發(fā)病機(jī)理的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 張培紅;濾泡性淋巴瘤的形態(tài)學(xué)、免疫表型和分子遺傳學(xué)關(guān)系的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

4 季明;B細(xì)胞淋巴瘤內(nèi)miR-17-92基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 霍穎穎;MUM1/IRF4在濾泡性淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[D];山東大學(xué);2011年

2 陳敏;濾泡性淋巴瘤中錯配修復(fù)蛋白的表達(dá)[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

3 朱珂;大劑量化療后自體干細(xì)胞移植一線治療濾泡性淋巴瘤的Meta分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

4 孫大菊;濾泡性淋巴瘤和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的蛋白表達(dá)研究[D];吉林大學(xué);2008年

5 吳鈴;FOXP3~+Tregs、IL-6在濾泡性淋巴瘤微環(huán)境中的表達(dá)及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

，

本文編號：2229824