【摘要】：NSD2是一種在黑色素瘤等多種腫瘤中高表達的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,其在Wolf-Hirschhorn syndrome(WHS)和多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中表達失控的原因已經(jīng)得到了較好的闡明,而NSD2在其他多種腫瘤中的表達失調(diào)的原因和機制還未有報道。本論文以p53野生型的人黑色素瘤細胞系92-1作為細胞模型,首先通過X-ray、UV、依托泊苷和羥基脲四種DNA損傷處理,證明DNA損傷后NSD2表達下調(diào)是一種普遍現(xiàn)象。接著采用依托泊苷和羥基脲兩種藥物處理,結(jié)合RNA干擾技術(shù)(RNA interference,RNAi)技術(shù),通過熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡,證明p53直接抑制NSD2的轉(zhuǎn)錄,而不是通過其下游基因p21來執(zhí)行此項功能。實驗結(jié)果暗示細胞衰老時p21有可能介導(dǎo)NSD2蛋白的降解,通過應(yīng)用蛋白酶體抑制劑MG-132和敲低APC/C激活因子cdh1,闡明了一條細胞衰老中介導(dǎo)NSD2降解的信號通路:p53-p21-APC/C~(cdh1)-蛋白酶體。通過比較NSD2在羥基脲處理和X-ray輻照處理后DNA損傷應(yīng)答(DNA damage response,DDR)的差異,發(fā)現(xiàn)敲低NSD2使羥基脲處理引起的p-CHK2和γ-H2AX水平升高得到顯著抑制,而對X-ray輻照處理引起的p-CHK2和γ-H2AX水平升高則沒有明顯影響,這說明NSD2在不同的DNA損傷響應(yīng)通路發(fā)揮的功能不同。以上三點結(jié)論之前文獻均未見報道,也是本論文的創(chuàng)新之處。
[Abstract]:NSD2 is a highly expressed histone methyltransferase in melanoma and other tumors. The reasons for its uncontrolled expression in Wolf-Hirschhorn syndrome (WHS) and multiple myeloma (multiple myeloma,MM) have been well elucidated. However, the cause and mechanism of NSD2 expression imbalance in other tumors have not been reported. In this paper, the p53 wild-type human melanoma cell line 92-1 was used as the cell model. Firstly, four kinds of DNA damage treatments, X-raybuv, etoposide and hydroxyurea, proved that the down-regulation of NSD2 expression was a common phenomenon after DNA injury. Then, etoposide and hydroxyurea were treated with RNA interference technique (RNA interference,RNAi), fluorescence quantitative PCR and Western blot were used to prove that p53 could directly inhibit the transcription of NSD2. This function is not performed through the downstream gene p21. The results suggested that p21 might mediate the degradation of NSD2 protein during cell senescence. By using proteasome inhibitor MG-132 and knockdown APC/C activator cdh1, a signal pathway of NSD2 degradation mediated by cell senescence was elucidated. The signal pathway: p53-p21-APC-C ~ (cdh1) -proteasome was elucidated by p53-p21-APC-C ~ (cdh1) -proteasome. By comparing the difference of DNA damage response (DNA damage response,DDR between hydroxyurea treatment and X-ray irradiation, it was found that knockdown of NSD2 significantly inhibited the increase of p-CHK2 and 緯 -H2AX levels induced by hydroxyurea treatment. However, there was no significant effect on p-CHK2 and 緯 -H2AX levels induced by X-ray irradiation, which indicated that NSD2 had different functions in different DNA damage response pathways. The above three conclusions have not been reported before, which is the innovation of this paper.
【學位授予單位】：中國科學院研究生院(近代物理研究所)
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2

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本文編號：2215796