【摘要】：PB3A是從蜂膠中分離出的黃酮單體,它對包括大腸癌細胞、宮頸癌細胞、白血病細胞、肝癌細胞、肺癌細胞等多種癌細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用已被證明,但其在癌癥發(fā)生和發(fā)展中對miRNA表達量的影響,從而發(fā)揮的抗腫瘤機制尚未清楚。本研究調查了蜂膠黃酮PB3A對大腸癌細胞中miRNA表達譜的影響,尋求與大腸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關的差異表達miRNAs,從而為大腸癌診斷治療的藥物靶點篩選提供新的方法和思路。本研究中首先用MTT比色法檢測不同濃度的(25、50、75和100μg/m L)PB3A,在不同時間(24h、48h、72h))對SW480大腸癌細胞增殖的影響,結果顯示,隨著PB3A濃度增加細胞存活率降低,隨著作用時間延長藥物增殖抑制作用也增高,PB3A對SW480大腸癌細胞以劑量和時間依賴性起增殖抑制作用。然后以miRNA芯片同樣條件(100μg/m L PB3A,24h)處理SW480細胞,提總RNA進行實時熒光RT-PCR實驗驗證miRNA表達譜芯片的真實性和可靠性,結果顯示進行驗證的12個miRNA中mi R-22-5p、mi R-211-5p、mi R-198、mi R-769-3P、miRNA-4321、miRNA-204-5P、miRNA-4326、miRNA-219a-2-3P、mi R-4697-3p、mi R-142-3p等10條miRNA的表達情況與micro RNA芯片的檢測結果一致,表達差異有統(tǒng)計學差異(P0.05);而mi R-761的表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),mi R-642a-5P在SW480細胞中差異表達量與miRNA芯片結果相反。下一步根據(jù)miRNA qRT-PCR驗證結果挑選mi R-4326,合成mi R-4326模擬物和無關序列,對SW480細胞進行轉染,結果顯示mi R-4326成功地轉染到大腸癌SW480細胞,與無關序列轉染的對照組相比mi R-4326模擬物轉染組mi R-4326的表達量顯著提高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。進一步對PB3A干預后miRNA芯片結果和qRT-PCR結果中顯示同樣趨勢的差異表達miRNAs進行靶基因預測并對預測出靶基因進行功能富集分析。利用mi RWalk,Microt4,mi Randa等12個數(shù)據(jù)庫預測差異表達miRNAs的靶基因結果顯示,mi R-22-5p有575個靶基因、mi R-802有896個靶基因、mi R-296-5p有906個靶基因、mi R-18a-5p有762個靶基因、mi R-3064-5p有209個靶基因、mi R-211-5p有1730個靶基因、mi R-769-3P有728個靶基因、miRNA-4321有7個靶基因、miRNA-204-5P有1693個靶基因、miRNA-4326有299個靶基因、miRNA-219a-2-3P有626個靶基因、mi R-4697-3p有115個靶基因、mi R-142-3p有534個靶基因、mi R-198有859個靶基因。差異表達miRNAs靶基因GO富集分析結果顯示,這14條miRNA通過調控其靶基因參與多種細胞組分形成、分子功能和生物過程,其中獲得注釋信息的靶基因數(shù)最多的是生物過程,因此這些miRNA可能通過調控其參與多種生物過程的靶基因而發(fā)揮抑癌或致癌作用。miRNAs靶基因基因功能主要富集于轉錄因子和拷貝數(shù)變異相關的基因、蛋白激酶基因、組蛋白以及致癌基因等基因功能上;蛋白功能與Ras通路、PDGF信號通路、整合素信號通路、EGF受體信號通路、血管生成、FGF信號通路、Wnt信號通路、p53通路、凋亡信號通路等腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起重要作用的信號通路有關。KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)這14條miRNAs靶基因涉及腫瘤通路、Wnt信號通路、胞吞通路、軸突導向、慢性骨髓性白血病、MAPK信號通路、前列腺癌、胰島素信號通路、膠質瘤、黑素生成、肌動蛋白細胞骨架調控、結腸癌發(fā)生等信號通路。其中腫瘤通路、Wnt信號通路、MAPK信號通路、軸突導向通路、胞吞通路都是細胞癌變、癌癥發(fā)生、發(fā)展中重要的通路。本研究qRT-PCR實驗結果提示SW480細胞中PB3A干預后差異表達的mi R-22-5p、mi R-211-5p、mi R-198、mi R-769-3P、miRNA-4321、miRNA-204-5P、miRNA-4326、miRNA-219a-2-3P、mi R-4697-3p、mi R-142-3p等10條miRNA可能在PB3A抗癌作用中起重要作用。生物信息學分析結果提示這些PB3A作用下差異表達miRNAs可能通過調控涉及多種細胞組分形成、分子功能和生物過程的靶基因,參與腫瘤通路、Wnt信號通路、MAPK信號通路、軸突導向通路、胞吞通路等重要的信號通路,從而抑制大腸癌細胞的增殖、侵襲、遷移并誘導其凋亡。
[Abstract]:PB3A is a flavonoid monomer isolated from propolis. It has been shown to inhibit the proliferation and induce apoptosis of colorectal cancer cells, cervical cancer cells, leukemia cells, liver cancer cells, lung cancer cells and other cancer cells. However, the effect of PB3A on the expression of microRNAs in cancer occurrence and development has not yet been clarified. In this study, we investigated the effect of propolis flavonoid PB3A on the expression profile of microRNAs in colorectal cancer cells, and sought to differentially express microRNAs closely related to the occurrence and development of colorectal cancer, thus providing new methods and ideas for screening drug targets for the diagnosis and treatment of colorectal cancer. The proliferation of SW480 colorectal cancer cells was inhibited by PB3A at different time (24h, 48h, 72h). The results showed that the survival rate of SW480 colorectal cancer cells decreased with the increase of PB3A concentration and the inhibitory effect of PB3A on the proliferation of SW480 colorectal cancer cells increased with the prolongation of action time. PB3A inhibited the proliferation of SW480 colorectal cancer cells in a dose-and time-dependent manner. 00ug/m L PB3A, 24h) treated SW480 cells, extracted total RNA for real-time fluorescence RT-PCR assay to verify the authenticity and reliability of the microarray expression profile. The results showed that of the 12 verified microRNAs, 10 microRNAs including mi R-22-5p, mi R-211-5p, mi R-198, mi R-769-3P, microNA-4321, microNA-204-5P, microNA-4326, microNA-219a-2-3P, mi R-4697-3p, and MI R-142-3p were detected. There was no significant difference in the expression of MI R-761 (P 0.05). The differential expression of MI R-642a-5P in SW480 cells was contrary to that of micro RNA chip. The next step was to select mi R-4326 and synthesize mir-4326 mimic and mir-4326 mimic according to the results of micro RNA qRT-PCR. MiR-4326 was successfully transfected into SW480 cells with unrelated sequence. The expression of MI R-4326 in mimic transfection group was significantly higher than that in unrelated sequence transfection group (P 0.05). The results of microarray and qRT-PCR showed that the expression of MI R-4326 in mimic transfection group was significantly higher than that in unrelated sequence transfection group (P 0.05). The target genes of differentially expressed microRNAs with the same trend were predicted and analyzed by functional enrichment. Twelve databases including MIRWalk, Microt4, and MIRanda were used to predict the target genes of differentially expressed microRNAs. The results showed that there were 575 target genes in MIR-22-5p, 896 target genes in MIR-802, 906 target genes in MIR-296-5p, and 906 target genes in MIR-18a-5p. There are 762 target genes, 209 target genes for MI R-3064-5p, 1730 target genes for MI R-211-5p, 728 target genes for MI R-769-3P, 7 target genes for miNA-4321, 1693 target genes for miNA-204-5P, 299 target genes for miNA-4326, 626 target genes for MI R-219a-2-3P, 115 target genes for MI R-4697-3p, 534 target genes for MI R-142-3p, and R-434 target genes for MI R-432-5P. There were 859 target genes in 198. Differentially expressed microRNAs target gene GO enrichment analysis showed that these 14 microRNAs were involved in many cellular components formation, molecular functions and biological processes by regulating their target genes. Among them, the most annotated target genes were biological processes, so these microRNAs may be involved in a variety of biological processes by regulating them. MicroRNAs target genes are mainly enriched in transcription factors and copy number variation-related genes, protein kinase genes, histones and oncogenes; protein functions are associated with Ras pathway, PDGF signaling pathway, integrin signaling pathway, EGF receptor signaling pathway, angiogenesis, and FGF KEGG signaling pathway analysis revealed that these 14 microRNAs target genes were involved in tumor pathway, Wnt signaling pathway, endocytosis pathway, axonal guidance, chronic myeloid leukemia, MAPK signaling pathway, prostate cancer, insulin and so on. Signal pathways, such as glioma, melanogenesis, actin cytoskeleton regulation, colon carcinogenesis, and so on. Tumor pathway, Wnt signaling pathway, MAPK signaling pathway, axon-directed pathway, and endocytosis pathway are all important pathways in cell carcinogenesis, cancer occurrence and development. The results of qRT-PCR in this study suggest that PB3A in SW480 cells is an intervention. Differentially expressed 10 microRNAs, including mi R-22-5p, mi R-211-5p, mi R-198, mi R-769-3P, microNA-4321, microNA-204-5P, microNA-4326, microNA-219a-2-3P, mi R-4697-3p, and MI R-142-3p, may play an important role in the anticancer effect of PB3A. Bioinformatics analysis suggests that the differentially expressed microNAs under the action of PB3A may involve a variety of cells. Component formation, molecular function and target genes involved in biological processes, tumor pathway, Wnt signaling pathway, MAPK signaling pathway, axon-directed pathway, endocytosis pathway and other important signaling pathways, thereby inhibiting the proliferation, invasion, migration and inducing apoptosis of colorectal cancer cells.
【學位授予單位】：新疆大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 孫厚良;;miRNAs的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2006年10期

2 ;Impact of tiny miRNAs on cancers[J];World Journal of Gastroenterology;2007年04期

3 宋寶;宋現(xiàn)讓;劉杰;魏玲;;miRNAs及其靶基因的識別[J];基礎醫(yī)學與臨床;2007年09期

4 ;放療和miRNAs兩者關系的研究進展(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2012年05期

5 王寧;黃辰;姚嘉宜;艾婷;李圍圍;付學海;宋麗萍;;肺癌相關miRNAs研究進展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2012年05期

6 ;Identification of deregulated miRNAs and their targets in hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年38期

7 William CS CHO;南娟;;miRNAs作為癌癥預測和預后標志物的巨大潛能[J];中國肺癌雜志;2013年01期

8 李長貴;紀艷;;miRNAs和內分泌疾病研究進展[J];中華醫(yī)學信息導報;2006年21期

9 William CS CHO;南娟;丁燕;;miRNAs在肺癌中的作用[J];中國肺癌雜志;2009年12期

10 Wen Luo,;Qinghua Nie;Xiquan Zhang;;MicroRNAs Involved in Skeletal Muscle Differentiation[J];遺傳學報;2013年03期

相關會議論文 前10條

1 ;A potential role for Chlamydomonas miRNAs in response to environmental changes[A];中國遺傳學會植物遺傳和基因組學專業(yè)委員會2009年學術研討會論文摘要匯編[C];2009年

2 Ping Xuan;Maozu Guo;Yangchao Huang;;MaturePred:Efficient Identification of MicroRNAs within Novel Plant Pre-miRNAs[A];第五屆全國生物信息學與系統(tǒng)生物學學術大會論文集[C];2012年

3 Zhen-Dong Xiao;Li-Ting Diao;Jian-Hua Yang;Hui Xu;Mian-Bo Huang;Yong-Jin Deng;Hui Zhou;Liang-Hu Qu;;Systematical identification of cis-elements orchestrating the expressions of miRNAs in humans[A];生命的分子機器及其調控網(wǎng)絡——2012年全國生物化學與分子生物學學術大會摘要集[C];2012年

4 ;Cell-free miRNAs may indicate diagnosis and docetaxel sensitivity of tumor cells in malignant effusions[A];2011醫(yī)學科學前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學術會議論文集[C];2011年

5 任波;馬迪;李毅;;地高辛標記探針結合化學發(fā)光技術快速靈敏檢測植物總RNA中的miRNAs方法[A];中國植物病理學會2005年學術年會暨植物病理學報創(chuàng)刊50周年紀念會論文摘要集[C];2005年

6 任波;馬迪;李毅;;地高辛標記探針結合化學發(fā)光技術快速靈敏檢測植物總RNA中的miRNAs方法[A];中國植物病理學會2005年學術年會暨植物病理學報創(chuàng)刊50周年紀念會論文集[C];2005年

7 戚鵬;韓金祥;魯艷芹;王傳璽;欒中華;卜范峰;;病毒編碼的miRNAs:基因表達新的調控因子[A];山東省藥學會2006年生化與生物技術藥物學術研討會論文集[C];2006年

8 ;Bioinformatic identification and expression analysis of new microRNAs from Medicago truncatula[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2008年學術交流會論文摘要匯編[C];2008年

9 ;Cell-free miRNAs may indicate diagnosis and docetaxel sensitivity of tumor cells in malignant effusions[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

10 ;miRNAs involved in Tau expression of BMSCs induced neurons[A];中國神經(jīng)科學學會第九屆全國學術會議暨第五次會員代表大會論文摘要集[C];2011年

相關重要報紙文章 前1條

1 江尚;特異性miRNAs與前列腺癌發(fā)病密切相關[N];中國醫(yī)藥報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 陳健德;新生兒膿毒癥miRNAs表達譜及其免疫調節(jié)作用研究[D];復旦大學;2014年

2 A.B.M.Khaldun;[D];中國科學院研究生院(武漢植物園);2015年

3 成鷹;大腸桿菌和布魯氏菌脂多糖刺激條件下巨噬細胞差異表達miRNAs的鑒定及其作用機制[D];海南大學;2014年

4 王奕;MiRNAs在白癜風外周血單個核細胞中的表達及miR-3940-5p對T細胞作用機制的研究[D];山東大學;2015年

5 陳科;小鼠子宮內膜mRNAs和miRNAs時空表達與胚胎著床的關系及SPOP對基質細胞蛻膜化的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

6 侯冬霞;游離脂肪酸在脂肪組織胰島素抵抗中的作用研究及Solexa技術在miRNAs檢測中的應用研究[D];南京大學;2011年

7 李菁;分泌的miRNAs在2型糖尿病和血管再生中的生物學功能研究[D];南京大學;2011年

8 王鳳;miRNAs對TBX5的靶向調控及其遺傳變異的調控差異在先天性心臟病中的作用[D];復旦大學;2012年

9 周朝偉;豬不同年齡段肌肉組織microRNAs鑒定和差異表達分析[D];四川農業(yè)大學;2014年

10 陳鍵;模擬微重力下的血清miRNAs研究[D];浙江大學;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 姜青華;丹參miRNAs組織特異表達譜及其靶基因鑒定[D];杭州師范大學;2015年

2 劉元會;抑郁患者腦脊液和血清中差異性miRNAs鑒定的臨床研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

3 賈文慧;宮頸癌及子宮內膜癌血清miRNAs的研究[D];南京大學;2013年

4 許成辰;不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7細胞內miRNAs表達譜及相關miRNAs對癌細胞生物學行為的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

5 曹文婷;奶山羊乳腺組織miRNAs的鑒定、篩選及功能的初步研究[D];西北農林科技大學;2015年

6 劉帥帥;循環(huán)miRNAs檢測對肝癌診斷價值的meta分析[D];蚌埠醫(yī)學院;2015年

7 王蕊;喉癌相關miRNAs的篩選及其功能的初步研究[D];南華大學;2015年

8 雷彬;大白豬和二花臉豬排卵前卵泡差異表達miRNAs及其靶基因鑒定[D];華中農業(yè)大學;2013年

9 葛瑩;綿羊不同發(fā)情狀態(tài)下松果體若干miRNAs表達差異及其與AANAT靶關系鑒定[D];揚州大學;2015年

10 黨春艷;高山離子芥低溫脅迫調控的miRNAs及其靶基因的表達分析[D];蘭州大學;2013年

，

本文編號：2215665