發(fā)布時間：2018-08-29 18:58

【摘要】：目的評估肝癌HepG2細胞分泌的Exosome對間充質(zhì)干細胞(MSC)分化為腫瘤相關(guān)成纖維細胞(CAF)的影響及其相互作用機制。方法在人脂肪MSC培養(yǎng)體系中加入HepG2細胞分泌的Exosome進行培養(yǎng),采用Western blot法檢測CAF特征性蛋白的表達情況。將已鑒定為CAF樣條件培養(yǎng)基(CAF-CM)和牛血清白蛋白對照組分別加至HepG2培養(yǎng)基中,采用Western blot法和定量PCR檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因的表達,MTS法檢測細胞增殖,Transwell法檢測HepG2細胞的遷移和侵襲。結(jié)果 HepG2細胞分泌的Exosome表達CD63、熱休克蛋白(HSP)70和HSP90。將Exosome加入MSC培養(yǎng)體系后14 d,可檢測到α平滑肌肌動蛋白、成纖維細胞激活蛋白α、白細胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β等CAF特征性蛋白的表達。MTS法檢測CAF-CM組的細胞增殖OD值為1.075±0.104,明顯高于對照組的0.874±0.066(P=0.023)和MSC條件培養(yǎng)基組的0.649±0.034(P=0.0005)。CAF-CM組遷移的HepG2細胞數(shù)為(42.5±9.1)個,明顯高于對照組的(18.5±3.1)個(P=0.001);CAF-CM組侵襲細胞數(shù)為(29.0±3.5)個,明顯高于對照組的(13.1±3.7)個(P=0.009)。CAF-CM組Smad交互蛋白1(P=0.040)、β-catenin(P=0.038)、纖連蛋白(P=0.029)和Vimentin(P=0.013)的表達較對照組顯著上調(diào);而CAF-CM組的緊密連接蛋白表達顯著低于對照組(P=0.010)。結(jié)論肝癌HepG2細胞系分泌的Exosome可誘導脂肪組織來源的MSC分化為CAF,后者又可以促進HepG2細胞的增殖、遷移和侵襲。
[Abstract]:Objective to evaluate the effect of Exosome secreted by hepatocellular carcinoma (HepG2) cells on the differentiation of mesenchymal stem cells (MSC) into tumor-associated fibroblasts (CAF) and its interaction mechanism. Methods Exosome secreted by HepG2 cells was added to human adipose MSC culture system and the expression of CAF characteristic protein was detected by Western blot assay. CAF like conditioned medium (CAF-CM) and bovine serum albumin (BSA) control group were added to HepG2 medium, respectively. The expression of genes associated with epithelial mesenchymal transformation was detected by Western blot and quantitative PCR. The migration and invasion of HepG2 cells were detected by cell proliferation and transwell assay. Results Exosome secreted by HepG2 cells expressed CD63, heat shock protein (HSP) 70 and HSP90.. 偽 -smooth muscle actin was detected 14 days after Exosome was added to MSC culture system. The expression of fibroblast activator protein 偽, interleukin (IL) 6, IL-8 and IL-1 尾 in the CAF-CM group was 1.075 鹵0.104, which was significantly higher than that in the control group (0.874 鹵0.066) and MSC conditioned medium group (0.649 鹵0.034 (P0. 0005). CAF-CM group was (42. 5 鹵9. 1). The number of invasive cells in CAF-CM group was significantly higher than that in control group (18.5 鹵3.1) (29.0 鹵3.5), significantly higher than that in control group (13.1 鹵3.7) (P0. 009). The expression of 尾 -catenin (P0. 040), 尾-catenin (P0. 038), fibronectin (P0. 029) and Vimentin (P0. 013) in CAF-CM group were significantly higher than those in control group. The expression of tight junction protein in CAF-CM group was significantly lower than that in control group (P0. 010). Conclusion Exosome secreted by HepG2 cell line can induce MSC derived from adipose tissue to differentiate into CAF, which can promote proliferation, migration and invasion of HepG2 cells.
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科;中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所組織工程中心;
【基金】：國家自然科學基金(81472785、61435001)~~
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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1 駱飛;孫昭;韓欽;薛春玲;白春梅;;肝癌HepG2細胞分泌的Exosome對間充質(zhì)干細胞分化的影響及其相互作用機制[J];中國醫(yī)學科學院學報;2017年03期

2 Bao-Min Shi;Wen Lu;Kun Ji;Yu-Feng Wang;Shuai Xiao;Xiu-Yan Wang;;Study on the value of serum miR-106b for the early diagnosis of hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2017年20期

3 李京云;焦婷;;多西紫杉醇與骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)合干預對人肝癌細胞株SMMC-7721的影響[J];中國組織工程研究;2016年24期

【二級參考文獻】

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1 Lei Huang;A-Man Xu;Sha Liu;Wei Liu;Tuan-Jie Li;;Cancer-associated fibroblasts in digestive tumors[J];World Journal of Gastroenterology;2014年47期

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3 Axel M Gressner;Birgit Lahme;Steffen K Meurer;Olav Gressner;Raif Weiskirchen;;Variable expression of cystatin C in cultured trans-differentiating rat hepatic stellate cells[J];World Journal of Gastroenterology;2006年05期

4 ;Enhancement of migration and invasion of hepatoma cells via a Rho GTPase signaling pathway[J];World Journal of Gastroenterology;2004年02期

5 李明亮;鐘躍思;徐見亮;姚志成;顏見;鄧美海;;不同來源間質(zhì)干細胞對大鼠肝纖維化的治療作用[J];中華實驗外科雜志;2013年01期

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1 江敬鈺;用時間分辨熒光檢測細胞分泌產(chǎn)物的一種新型靈敏方法[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;1994年06期

2 陳楓;;蛙皮素可直接刺激牛垂體前葉細胞分泌生長激素[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);1984年04期

3 浦泳冰，曾正陪，孫梅勵，關(guān)炳江，李漢忠，，張銳強，宋宗祿，史軼蘩;正常人腎上腺細胞分泌內(nèi)皮素的體外研究（簡報）[J];中國醫(yī)學科學院學報;1995年05期

4 李啟亮;單保恩;張超;何明;張正茂;;不同刺激劑誘導肺癌患者引流淋巴結(jié)細胞分泌細胞因子的研究[J];細胞與分子免疫學雜志;2006年05期

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6 王茹;陳佩杰;張軍;;人外周血自然殺傷T細胞分泌胰島素樣生長因子-1的研究[J];中國運動醫(yī)學雜志;2007年04期

7 梅雅芳,任貴方,朱既明;哺乳動物細胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原的理化和生物學性狀[J];病毒學報;1991年04期

8 李志琴,俞彰,凌詒萍;NSF在細胞分泌中的作用[J];生理科學進展;2001年01期

9 婁淑杰,陳菲,陳宜張;糖皮質(zhì)激素對高鉀誘導PC12細胞分泌兒茶酚胺的快速調(diào)節(jié)作用[J];第二軍醫(yī)大學學報;2001年11期

10 羅自強,岳少杰,趙必紅;Clara細胞分泌蛋白[J];生理科學進展;2003年03期

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2 鐘定;徐效峰;;肺結(jié)核肺灌洗液細胞分泌白細胞介素-18的測定[A];中華醫(yī)學會第七次全國呼吸病學術(shù)會議暨學習班論文匯編[C];2006年

3 李江源;鄒迎紅;竇京濤;李明;;卵泡抑制蛋白對大鼠賴迪細胞分泌睪酮的影響[A];中華醫(yī)學會第六次全國內(nèi)分泌學術(shù)會議論文匯編[C];2001年

4 馬鋒振;;保加利亞乳酸桿菌對H．pylori SS1誘導SGC7901細胞NF-κB活化及凋亡的調(diào)節(jié)作用[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術(shù)會議論文匯編（上冊）[C];2007年

5 羅自強;Demayo FJ;;Clara細胞分泌蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[A];湖南省生理科學會新世紀學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2002年

6 溫志紅;胡瓊燕;周薇雅;農(nóng)生洲;;社區(qū)獲得性肺炎患兒Clara細胞分泌蛋白的變化及臨床意義[A];中華醫(yī)學會第十七次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（下冊）[C];2012年

7 溫志紅;胡瓊燕;農(nóng)生洲;周薇雅;;社區(qū)獲得性肺炎患兒Clara細胞分泌蛋白的變化及臨床意義[A];中華醫(yī)學會第十三屆全國兒科呼吸學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

8 侯穎瑩;王秀芳;;Clara細胞分泌蛋白在5歲以下喘息兒童中的表達及意義[A];中華醫(yī)學會第十五次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

9 李中原;李佳緣;王燕;袁子國;朱興全;;白細胞介素17(IL-17)及其在寄生蟲學上的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術(shù)研討會論文集[C];2011年

10 詹銘煥;林怡汝;;揮發(fā)性碳氫氯化合物對氣管上皮細胞分泌的影響[A];海峽兩岸首屆毒理學研討會論文（摘要）集[C];2001年

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1 ;春天護膚的五個講究[N];蚌埠日報;2009年

2 程柱生;哪些老人不宜飲茶[N];保健時報;2004年

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6 王茜;黃連素抑制TNF-α刺激ARPE-19細胞分泌炎癥因子的作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

7 王鑫廷;TGF-β參與IL-18刺激Th1型細胞分泌IL-9[D];天津醫(yī)科大學;2012年

8 王海濱;我國幽門螺桿菌cagPAI序列特征分析及致炎機制研究[D];中國疾病預防控制中心;2010年

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2 劉曉;鹽酸右美托咪定對非體外循環(huán)冠狀動脈搭橋術(shù)患者的肺保護作用[D];華北理工大學;2016年

3 朱翠華;支氣管肺發(fā)育不良小鼠血清Clara細胞分泌蛋白的表達水平及意義[D];泰山醫(yī)學院;2013年

4 侯穎瑩;Clara細胞分泌蛋白10基因多態(tài)性在5歲以下喘息兒童中的研究[D];鄭州大學;2011年

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6 李菲;Clara細胞分泌蛋白對創(chuàng)傷性休克肺損傷的保護作用[D];大連醫(yī)科大學;2014年

7 黃建青;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在晚期糖化終末產(chǎn)物誘導MG63細胞分泌炎癥因子IL-6中的作用[D];福建醫(yī)科大學;2013年

8 李玉紅;Clara細胞分泌蛋白、IL-17在支原體肺炎患兒血清中的表達和意義[D];山東大學;2014年

9 樓小戟;牙齦卟啉菌重組外膜蛋白誘導細胞分泌炎性因子的差異性[D];浙江大學;2008年

10 廖禮強;心梗大鼠循環(huán)血單個核細胞分泌TNF-α對MSCs遷移及心肌樣分化的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

本文編號：2212109