【摘要】：目的探討人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1(FOXM1)對脾酪氨酸激酶(SYK)表達(dá)的調(diào)控機制。方法從MCF-7、T47D、SK-BR3和MDA-MB-231中提取RNA和蛋白質(zhì),分別用PCR和Western blotting檢測SYK的表達(dá)水平,并檢測SYK基因啟動子區(qū)CpG島甲基化。在MCF-7中過表達(dá)FOXM1,采用Western blotting和實時熒光定量PCR檢測FOXM1和SYK的表達(dá)。利用染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)技術(shù)和熒光素酶報告基因檢測轉(zhuǎn)錄因子FOXM1對SYK基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控作用。結(jié)果 SYK在MCF-7中呈陽性表達(dá),而在T47D、SKBR3和MDA-MB-231中呈陰性表達(dá);MCF-7細(xì)胞中SYK基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化水平低于對照細(xì)胞(P0.05)。在MCF-7中過表達(dá)FOXM1能下調(diào)SYK表達(dá),在SK-BR3細(xì)胞系中沉默F(xiàn)OXM1基因能激活SYK表達(dá)。ChIP結(jié)果顯示FOXM1直接參與調(diào)控SYK的轉(zhuǎn)錄;基因沉默F(xiàn)OXM1激活SYK基因啟動子活性,過表達(dá)FOXM1抑制SYK基因啟動子的活性。結(jié)論在人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中,SYK是FOXM1的靶基因,FOXM1可能通過調(diào)節(jié)SYK的表達(dá)來調(diào)控乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:Objective to investigate the regulatory mechanism of forked frame transcription factor M1 (FOXM1) on (SYK) expression of spleen tyrosine kinase in human breast cancer cell line MCF-7. Methods RNA and protein were extracted from MCF-7,T47D,SK-BR3 and MDA-MB-231, the expression of SYK was detected by PCR and Western blotting, and CpG island methylation of SYK gene promoter was detected. Overexpression of FOXM1, in MCF-7 was detected by Western blotting and real-time quantitative PCR. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) technique and luciferase reporter gene were used to detect the regulation of transcription factor FOXM1 on the transcription level of SYK gene. Results SYK was positively expressed in MCF-7, but the methylation level of Cp G island in SYK gene promoter was lower in MCF-7 cells than in control cells (P0.05). Overexpression of FOXM1 in MCF-7 can down-regulate the expression of SYK. In SK-BR3 cell line, silencing FOXM1 gene can activate SYK expression. Chip results show that FOXM1 directly regulates SYK transcription, and gene silencing FOXM1 activates SYK gene promoter activity. Overexpression of FOXM1 inhibits the activity of SYK promoter. Conclusion Syk is the target gene of FOXM1 in human breast cancer cell line MCF-7, and FOXM1 may regulate the occurrence and development of breast cancer by regulating the expression of SYK.
【作者單位】： 山東大學(xué)第二醫(yī)院影像科;山東大學(xué)第二醫(yī)院檢驗科;
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2211778