【摘要】：目的 :觀察shR NA干擾己糖激酶(hexokinase,HK)Ⅱ基因表達對人淋巴瘤Raji和SU-DHL-4細胞代謝、增殖、凋亡及耐藥的影響,初步評價HKⅡ基因靶向治療在淋巴瘤中的潛在應用前景。方法 :構建慢病毒介導的shRNA靶向干擾HKⅡ基因表達的淋巴瘤細胞株Raji和SU-DHL-4(HKⅡshRNA轉染組),同時設置陰性shRNA轉染對照組。采用實時熒光定量PCR法和蛋白質印跡法分別檢測細胞中HKⅡmRNA和蛋白的表達水平。錐蟲藍拒染法檢測細胞存活數(shù)并繪制生長曲線;CCK-8法檢測多柔比星(doxorubicin,DOX)對淋巴瘤細胞的半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。FCM法分析細胞周期分布及細胞凋亡。蛋白質印跡法檢測細胞中凋亡相關蛋白caspase-3及其剪切體、Bcl-2和Bcl-6的表達;分別應用乳酸和葡萄糖檢測試劑盒檢測細胞培養(yǎng)上清液中乳酸和葡萄糖的濃度。結果 :與空質粒轉染對照組細胞相比,HKⅡshRNA轉染組細胞中HKⅡmRNA及蛋白的表達水平均明顯降低(P值均0.05)。shRNA干擾HKⅡ基因表達能抑制2種淋巴瘤細胞的增殖活性(P值均0.01),并使細胞周期阻滯在G0/G1期(P值均0.05),同時促進細胞凋亡(P值均0.01)。與對照組細胞相比,HKⅡ基因沉默可降低DOX對2種淋巴瘤細胞的IC50值(P值均0.05),抑制細胞中葡萄糖消耗(P值均0.05),減少乳酸生成(P值均0.01)。與對照組細胞相比,HKⅡshRNA轉染后2種淋巴瘤細胞中Bcl-2蛋白的表達水平明顯降低(P值均0.05),而caspase-3剪切體表達水平明顯升高(P值均0.05);加入DOX作用后,2種淋巴瘤細胞的Bcl-2表達水平無明顯差異(P值均0.05),但HKⅡshRNA轉染組細胞中caspase-3前體蛋白表達水平明顯降低(P值均0.01),而caspase-3剪切體表達水平升高更加明顯(P值均0.05)。結論 :shRNA干擾HKⅡ基因表達可抑制淋巴瘤細胞增殖,促進細胞凋亡,糾正細胞糖酵解代謝表型,提高細胞對化療藥物DOX的敏感性。提示HKⅡ基因可能是治療復發(fā)或耐藥侵襲性淋巴瘤的潛在靶點。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of shR na interfering hexokinase II gene expression on the metabolism, proliferation, apoptosis and drug resistance of human lymphoma Raji and SU-DHL-4 cells, and to evaluate the potential application of HK 鈪，

本文編號：2196209