【摘要】：目的 :觀察shR NA干擾己糖激酶(hexokinase,HK)Ⅱ基因表達(dá)對(duì)人淋巴瘤Raji和SU-DHL-4細(xì)胞代謝、增殖、凋亡及耐藥的影響,初步評(píng)價(jià)HKⅡ基因靶向治療在淋巴瘤中的潛在應(yīng)用前景。方法 :構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的shRNA靶向干擾HKⅡ基因表達(dá)的淋巴瘤細(xì)胞株Raji和SU-DHL-4(HKⅡshRNA轉(zhuǎn)染組),同時(shí)設(shè)置陰性shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測(cè)細(xì)胞中HKⅡmRNA和蛋白的表達(dá)水平。錐蟲藍(lán)拒染法檢測(cè)細(xì)胞存活數(shù)并繪制生長(zhǎng)曲線;CCK-8法檢測(cè)多柔比星(doxorubicin,DOX)對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。FCM法分析細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白caspase-3及其剪切體、Bcl-2和Bcl-6的表達(dá);分別應(yīng)用乳酸和葡萄糖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乳酸和葡萄糖的濃度。結(jié)果 :與空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)照組細(xì)胞相比,HKⅡshRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中HKⅡmRNA及蛋白的表達(dá)水平均明顯降低(P值均0.05)。shRNA干擾HKⅡ基因表達(dá)能抑制2種淋巴瘤細(xì)胞的增殖活性(P值均0.01),并使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期(P值均0.05),同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡(P值均0.01)。與對(duì)照組細(xì)胞相比,HKⅡ基因沉默可降低DOX對(duì)2種淋巴瘤細(xì)胞的IC50值(P值均0.05),抑制細(xì)胞中葡萄糖消耗(P值均0.05),減少乳酸生成(P值均0.01)。與對(duì)照組細(xì)胞相比,HKⅡshRNA轉(zhuǎn)染后2種淋巴瘤細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯降低(P值均0.05),而caspase-3剪切體表達(dá)水平明顯升高(P值均0.05);加入DOX作用后,2種淋巴瘤細(xì)胞的Bcl-2表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P值均0.05),但HKⅡshRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中caspase-3前體蛋白表達(dá)水平明顯降低(P值均0.01),而caspase-3剪切體表達(dá)水平升高更加明顯(P值均0.05)。結(jié)論 :shRNA干擾HKⅡ基因表達(dá)可抑制淋巴瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,糾正細(xì)胞糖酵解代謝表型,提高細(xì)胞對(duì)化療藥物DOX的敏感性。提示HKⅡ基因可能是治療復(fù)發(fā)或耐藥侵襲性淋巴瘤的潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of shR na interfering hexokinase II gene expression on the metabolism, proliferation, apoptosis and drug resistance of human lymphoma Raji and SU-DHL-4 cells, and to evaluate the potential application of HK 鈪，

本文編號(hào)：2196209