發(fā)布時(shí)間：2018-08-20 08:36

【摘要】：第一部分二氫青蒿素抑制胃癌細(xì)胞株BGC-823增殖及其機(jī)制的影響目的：在體外細(xì)胞水平及活體動(dòng)物水平探討DHA對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823增殖、細(xì)胞周期、凋亡等生物學(xué)表型的影響,并初步探討其分子機(jī)制。方法：采用MTT法檢測(cè)DHA、5氟尿嘧啶(5-FU)對(duì)BGC-823細(xì)胞的殺傷作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DHA對(duì)BGC-823細(xì)胞周期與凋亡的影響；Western blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)；分光光度方法檢測(cè)Caspase-3活性。建立裸鼠胃癌動(dòng)物模型評(píng)估DHA在活體水平對(duì)胃癌的治療效果。結(jié)果：與對(duì)照組相比,不同濃度DHA(10、20、40μmol/L)均能顯著抑制BGC-823胃癌細(xì)胞的體外增殖。小劑量DHA (10μmol/L)可與5-FU協(xié)同殺傷胃癌細(xì)胞,促進(jìn)5-FU的細(xì)胞毒效應(yīng);與5-FU單藥組相比,聯(lián)合用藥組的細(xì)胞存活率顯著下降,5-FU殺傷BGC-823的半數(shù)抑制率濃度(ICso)=3.04μg/mL,而聯(lián)合用藥組的IC50下降為1.42 μg/mL。細(xì)胞周期和凋亡分析顯示,DHA可以使BGC-823細(xì)胞在G2/M期發(fā)生阻滯,并可誘導(dǎo)BGC-823凋亡。DHA處理BGC-823細(xì)胞后,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)顯著下調(diào),促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表達(dá)顯著上調(diào)。DHA能夠顯著抑制裸鼠皮下胃癌移植瘤的生長(zhǎng),并誘導(dǎo)其細(xì)胞凋亡。結(jié)論：DHA能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞的增殖,阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,并能增加BGC-823細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性,其機(jī)理可能與下調(diào)Bcl-2表達(dá),上調(diào)Bax表達(dá)有關(guān)。第二部分二氫青蒿素對(duì)BGC-823胃癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響及其機(jī)制的研究目的：二氫青蒿素是青蒿素的一種衍生物,具有較為廣泛的抗腫瘤活性。本課題研究DHA對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823體外遷移、粘附、侵襲能力及活體腫瘤轉(zhuǎn)移能力的影響并初步探討其分子機(jī)制。方法：采用Transwell小室技術(shù)檢測(cè)DHA對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響,黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DHA作用后細(xì)胞黏附能力的變化。實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法和酶聯(lián)免疫分析法分別檢測(cè)VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)水平。采用尾靜脈注射方式建立裸鼠胃癌肺轉(zhuǎn)移模型,采用DHA灌胃方式研究DHA對(duì)裸鼠胃癌轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果：與對(duì)照組相比,DHA (20、40μmol/L)處理組BGC-823胃癌細(xì)胞的體外遷移、粘附、侵襲能力均顯著降低(P0.05)。DHA處理胃癌細(xì)胞VEGF mRNA表達(dá)水平顯著下降,細(xì)胞上清中VEGF水平也比對(duì)照組顯著減少(P0.05)。DHA處理可以顯著減少裸鼠肺部胃癌轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量(P0.01)。結(jié)論：DHA能夠顯著抑制胃癌腫瘤轉(zhuǎn)移能力,其機(jī)理可能與下調(diào)VEGF表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Part I effects of dihydroartemisinin on the proliferation of gastric cancer cell line BGC-823 and its mechanism objective: to investigate the effects of DHA on the proliferation, cell cycle, apoptosis and other biological phenotypes of human gastric cancer cell line BGC-823 in vitro and in vivo. The molecular mechanism was also discussed. Methods: MTT assay was used to detect the cytotoxicity of DHA5 fluorouracil (5-FU) to BGC-823 cells, flow cytometry was used to detect the effect of DHA on the cell cycle and apoptosis of BGC-823 cells. Western blot was used to detect the expression of apoptosis-related protein Baxia Bcl-2Caspase-3, and the activity of Caspase-3 was detected by spectrophotometry. Animal models of gastric cancer in nude mice were established to evaluate the therapeutic effect of DHA on gastric cancer in vivo. Results: compared with the control group, the proliferation of BGC-823 gastric cancer cells was significantly inhibited by different concentrations of DHA (10 ~ 2040 渭 mol/L). Low dose DHA (10 渭 mol/L) could synergistically kill gastric cancer cells with 5-FU and promote the cytotoxic effect of 5-FU. Compared with 5-FU single drug group, the cell survival rate of the combined treatment group was significantly lower than that of the 5-FU group (ICso) 3.04 渭 g / mL), while the IC50 of the combined treatment group was 1.42 渭 g / mL. Cell cycle and apoptosis analysis showed that DHA could block BGC-823 cells in G _ 2 / M phase and induce BGC-823 apoptosis. DHA could significantly down-regulate the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 after BGC-823 cells were treated with DHA. The expression of pro-apoptotic protein Bax and Caspase-3 increased significantly. DHA could significantly inhibit the growth and induce apoptosis of xenografts of subcutaneous gastric cancer in nude mice. ConclusionDHA can significantly inhibit the proliferation of gastric cancer cells, block cell cycle progression, promote cell apoptosis, and increase the sensitivity of BGC-823 cells to 5-FU. The mechanism may be related to down-regulation of Bcl-2 expression and up-regulation of Bax expression. Effect of dihydroartemisinin on invasion and metastasis of BGC-823 gastric cancer cells and its mechanism objective: dihydroartemisinin is a derivative of artemisinin and has extensive antitumor activity. The aim of this study was to investigate the effects of DHA on the migration, adhesion, invasion and metastasis of human gastric cancer cell line BGC-823 in vitro and to explore its molecular mechanism. Methods: Transwell chamber technique was used to detect the effect of DHA on the migration and invasion of gastric cancer BGC-823 cells. Adhesion assay was used to detect the changes of cell adhesion ability after DHA treatment. Real-time quantitative RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) were used to detect the expression of VEGF mRNA and protein respectively. The lung metastasis model of gastric cancer in nude mice was established by tail vein injection, and the effect of DHA on gastric cancer metastasis in nude mice was studied by DHA. Results: compared with the control group, the migration, adhesion and invasiveness of BGC-823 gastric cancer cells treated with DHA (20 渭 mol/L) were significantly decreased (P0.05) .DHA treated with DHA significantly decreased the expression of VEGF mRNA in gastric cancer cells. The level of VEGF in the supernatant was significantly lower than that in the control group (P0.05). DHA treatment could significantly reduce the number of metastatic foci of lung gastric cancer in nude mice (P0.01). ConclusionDHA can significantly inhibit the ability of gastric cancer to metastasize, and its mechanism may be related to the down-regulation of VEGF expression.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2193032