【摘要】：研究背景：雌激素受體(estrogen receptor, ER)和表皮生長因子受體途徑是乳腺癌細(xì)胞分裂、分化和存活等生理活動所依賴的主要信號途徑。鑒于ER和人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor2, HER2)在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的重要作用,現(xiàn)已發(fā)展了多種針對這些特定分子改變的乳腺癌治療策略,其中臨床最常見的是針對表達(dá)ER或孕激素受體(progesterone receptor,PR)的他莫昔芬(tamoxifen, Tam)內(nèi)分泌治療,以及針對HER2的Herceptin /Trastuzumab(中文商品名“赫賽汀”)的人源化單克隆抗體治療。其中僅少數(shù)表達(dá)ER和PR的病人對內(nèi)分泌治療有效；Herceptin單一用藥僅對低于35%的HER2過表達(dá)的轉(zhuǎn)移乳腺癌病人治療有效,并且大多數(shù)治療有效的病人在一年之內(nèi)會對藥物產(chǎn)生抵抗。ER-a36是一種新發(fā)現(xiàn)的ER-a變異體,經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)證明ER-a36大部分定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中,主要發(fā)揮非基因組活性,ER-a36與HER2途徑之間的廣泛“串話(Cross-talk) "可能與Tam以及Herceptin治療出現(xiàn)抵抗密切相關(guān)。Tam是一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑,最常見的內(nèi)分泌治療一線藥物,但只有一半的乳腺癌患者對Tam治療有效,即Tam抵抗在臨床內(nèi)分泌治療抵抗中十分常見,是困擾臨床乳腺癌治療的一大難題,目前Tam抵抗機(jī)制尚未闡明。已有研究表明,乳腺癌細(xì)胞中ER-a66與HER2的“串話”介導(dǎo)的E2非基因組活性導(dǎo)致了對Tam的抵抗;ER-a36也可通過其非基因組活性導(dǎo)致對Tam的抵抗。臨床資料顯示近40%ER-a66陽性乳腺癌組織表達(dá)高水平的ER-α36,并增強(qiáng)了Tam抵抗。故推測兩種受體在乳腺癌細(xì)胞中共表達(dá)可通過各自介導(dǎo)的非基因組活性增強(qiáng)Tam抵抗。Herceptin主要用于HER2陽性的乳腺癌病人治療,Herceptin在臨床抵抗常見,但其確切的機(jī)制或始發(fā)因素尚待進(jìn)一步研究。鑒于HER2途徑作為Herceptin治療靶點(diǎn),其可被ER-a36的非基因組活性激活,Herceptin的有效抑制劑量會增加,從而導(dǎo)致Herceptin療效減弱；同時我們以前的研究證明ER-a36可通過非基因組活性影響ER陽性的乳腺癌細(xì)胞Herceptin的治療效果。以上證據(jù)均支持ER-α36非基因組活性在乳腺癌細(xì)胞Herceptin治療抵抗中發(fā)揮了重要作用。本課題旨在研究ER-a36在乳腺癌藥物治療抵抗中的新作用,并初步探討其機(jī)制。研究內(nèi)容：(1)采用Western blot、CCK-8、Confocal等技術(shù)研究ER-a66與其變異體ER-a36在乳腺癌中共表達(dá)對Tamoxifen療效的影響及其機(jī)制。(2)采用Western blot、CCK-8等技術(shù)研究ER-α36對乳腺癌細(xì)胞Herceptin治療療效的影響及其機(jī)制。研究結(jié)果：(一)ER-a66與其變異體ER-α36在乳腺癌中共表達(dá)對Tamoxifen療效的影響及其機(jī)制研究(1)ER-a66和ER-a36能在兩者共表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞漿/膜中共定位。(2)乳腺癌細(xì)胞中ER-α66和ER-α36的共表達(dá)可增強(qiáng)E2/Tam介導(dǎo)的MAPK和Akt磷酸化。(3)乳腺癌細(xì)胞中ER-α66和ER-α36的共表達(dá)可增強(qiáng)Tam刺激的細(xì)胞增殖。(二)ER-α36在Herceptin治療抵抗中的作用及其機(jī)制研究：(1)ER-α36顯著降低了Herceptin的敏感性。(2)E2通過ER-α36非基因組活性顯著降低了Herceptin的敏感性。(3)E2刺激的ER-α36非基因組活性顯著干擾了Herceptin抑制HER2下游信號分子MAPK和Akt磷酸化的效應(yīng)。結(jié)論：(1)ER-α66與其變異體ER-α36在乳腺癌中共表達(dá)可通過各自介導(dǎo)的非基因組活性增強(qiáng)Tam抵抗。(2)ER-α36可通過非基因組活性降低乳腺癌細(xì)胞Herceptin的敏感性。研究目的和意義：(1)本課題通過對ER-α66與其變異體ER-α36在乳腺癌中共表達(dá)對Tamoxifen療效的影響及其機(jī)制的研究可為臨床Tam抵抗的研究提供一個新的重要機(jī)制,同時揭示ER-α 36可作為ER-α 66陽性的乳腺癌病人Tam治療的重要的潛在標(biāo)志物,并為臨床乳腺癌病人基于Tam的聯(lián)合應(yīng)用治療策略的實(shí)施提供新的理論依據(jù)。(2)通過對ER-a36在Herceptin治療抵抗中的作用及其機(jī)制研究,可為乳腺癌細(xì)胞Herceptin治療抵抗提供一個新的重要機(jī)制,為臨床乳腺癌病人基于Herceptin的聯(lián)合應(yīng)用治療策略的實(shí)施提供新的理論依據(jù)。
[Abstract]:BACKGROUND: Estrogen receptor (ER) and epidermal growth factor receptor (EGFR) pathways are the major signaling pathways for physiological activities such as cell division, differentiation and survival in breast cancer. A variety of therapeutic strategies have been developed for breast cancer with specific molecular changes. The most common clinical strategies are tamoxifen (Tam) endocrine therapy for ER or progesterone receptor (PR) expression, and human resources for HER2 (Herceptin/Trastuzumab). Chemo-monoclonal antibody therapy. Only a small number of ER-and PR-expressing patients are effective in endocrine therapy; Herceptin alone is effective in less than 35% of patients with metastatic breast cancer whose expression of ER-2 is overexpressed, and most of the patients who are effective in treatment are resistant to the drug within a year. ER-a36 is a newly discovered variant of ER-a. A large number of experiments have proved that ER-a36 is mostly located in the cell membrane and cytoplasm, mainly playing non-genomic activities. The extensive "cross-talk" between ER-a36 and HER2 pathway may be closely related to resistance to Tam and Herceptin therapy. Tam is a selective estrogen receptor modulator, the most common first-line drug for endocrine therapy. However, only half of breast cancer patients are effective in Tam therapy, i.e. Tam resistance is very common in clinical endocrine therapy resistance, which is a difficult problem for clinical breast cancer treatment. The mechanism of Tam resistance has not been clarified yet. Clinical data showed that nearly 40% of ER-a66 positive breast cancer tissues expressed high levels of ER-alpha 36 and enhanced Tam resistance. It was speculated that co-expression of the two receptors in breast cancer cells could enhance Tam resistance through their respective non-genomic activities. Herceptin resistance is common in breast cancer patients with positive HER2, but the exact mechanism or initiation of Herceptin resistance remains to be further studied. Previous studies have shown that ER-a36 can influence the therapeutic effect of ER-positive breast cancer cells Herceptin through non-genomic activity. All these evidence support that ER-a36 non-genomic activity plays an important role in the resistance of breast cancer cells to Herceptin therapy. The main contents of this study were as follows: (1) Western blot, CCK-8 and Confocal techniques were used to study the effect of ER-a66 and its variant ER-a36 co-expression on Tamoxifen in breast cancer and its mechanism. (2) Western blot, CCK-8 and other techniques were used to study the effect of ER-a66 on Herceptin treatment of breast cancer cells and its mechanism. Results: (1) The co-expression of ER-a66 and its variant ER-a36 in breast cancer could enhance the phosphorylation of MAPK and Akt mediated by E2/Tam. The co-expression of ER-alpha 66 and ER-alpha 36 in cells enhanced Tam-stimulated cell proliferation. (2) The role of ER-alpha 36 in Herceptin resistance and its mechanism: (1) ER-alpha 36 significantly decreased the sensitivity of Herceptin. (2) E2 significantly reduced the sensitivity of Herceptin through ER-alpha 36 non-genomic activity. (3) E2-stimulated ER-alpha 36 non-genomic activity. Conclusion: (1) The co-expression of ER-alpha66 and its variant ER-alpha36 in breast cancer can enhance Tam resistance through their respective non-genomic activities. (2) ER-alpha36 can reduce the sensitivity of breast cancer cells to Herceptin by non-genomic activities. Significance: (1) The study of the effect of ER-alpha 66 and its variant ER-alpha 36 co-expression on Tamoxifen in breast cancer and its mechanism may provide a new important mechanism for the study of clinical Tam resistance, and reveal that ER-alpha 36 can be used as an important potential marker of Tam therapy in ER-alpha 66 positive breast cancer patients. Tam-based combination therapy for breast cancer patients in bed provides a new theoretical basis. (2) Through the study of the role of ER-a36 in Herceptin treatment resistance and its mechanism, it can provide a new important mechanism for breast cancer cell Herceptin treatment resistance, and provide a clinical breast cancer patients with Herceptin-based combination therapy strategy. The implementation provides a new theoretical basis.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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