【摘要】：目的探討外分泌的GRP78和細胞膜表面EGFR相互作用的情況,確定外分泌GRP78和EGFR在肝癌細胞產(chǎn)生索拉非尼耐藥過程中的作用及其機制,根據(jù)外分泌GRP78含量的不同以及其產(chǎn)生的耐藥機制的原理,將其作為臨床診斷的標志和治療的靶點。方法1.用蛋白質(zhì)印跡分析各肝癌細胞外分泌GRP78的含量和細胞表面EGFR的表達,并選擇合適的細胞株。2.收集肝癌患者的血清和正常人的血清,利用ELISA分析肝癌患者血清中GRP78含量和正常人血清中GRP78含量的差異。3.在細胞水平檢測rh GRP78是否影響索拉非尼對肝癌細胞的敏感性及其作用機制。利用MTT,Western blot,GST pull down和集落形成實驗分析rh GRP78存在情況下肝癌細胞對索拉非尼敏感性的影響和rh GRP78與EGFR相互作用產(chǎn)生耐藥性的信號傳導(dǎo)通路。4.在動物水平建立腫瘤模型,并將動物分為三組,rh GRP78組,索拉非尼組和rh GRP78+索拉非尼組,采用灌胃方式進行治療,一段時間后取出小鼠腫瘤組織進行瘤體稱重和免疫組化檢測,比較三組結(jié)果的差異。結(jié)果1.GRP78可以由HCC細胞分泌2.外分泌的GRP78促進細胞增殖并抑制索拉非尼誘導(dǎo)的細胞凋亡3.分泌的GRP78與EGFR相互作用并誘導(dǎo)其活化4.EGFR介導(dǎo)HCC細胞對分泌的GRP78的反應(yīng)結(jié)論由腫瘤細胞分泌的GRP78可以以自分泌或旁分泌的方式激活EGFR-Src-STAT3信號通路導(dǎo)致肝癌細胞對索拉非尼的耐藥。并且EGFR決定HCC細胞對外分泌GRP78的反應(yīng)性
[Abstract]:Objective to investigate the interaction between exocrine GRP78 and EGFR on cell membrane, and to determine the role and mechanism of exocrine GRP78 and EGFR in the production of solafenib resistance in hepatoma cells. According to the different levels of exocrine GRP78 and the mechanism of drug resistance, it is regarded as a marker of clinical diagnosis and a target of treatment. Method 1. The content of exocrine GRP78 and the expression of EGFR on the surface of hepatoma cells were analyzed by Western blot, and the appropriate cell line. 2. The serum levels of GRP78 in HCC patients and those in normal controls were analyzed by ELISA. 3. 3. To determine whether rh GRP78 affects the sensitivity of Solafenib to hepatoma cells and its mechanism at cell level. The effects of rh GRP78 on the sensitivity of hepatoma cells to Solafenil and the signal transduction pathway of drug resistance between rh GRP78 and EGFR were analyzed by using MTTX Western blottle pull down and colony formation assay. The tumor model was established at the animal level, and the animals were divided into three groups: GRP78 group, Solafenil group and rh GRP78 sorafenil group. The tumor tissues of mice were taken out for weighing and immunohistochemical examination after a period of time. The differences among the three groups were compared. Results 1.GRP78 could be secreted by HCC cells. Exocrine GRP78 promotes cell proliferation and inhibits the apoptosis induced by Solafenib. The secreted GRP78 interacts with EGFR and induces its activation 4.EGFR mediates the response of HCC cells to secreted GRP78. Conclusion GRP78 secreted by tumor cells can activate the EGFR-Src-STAT3 signaling pathway in an autocrine or paracrine manner leading to the drug resistance of HCC cells to Solafenib. And EGFR determines the response of HCC cells to exocrine GRP78
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：2180508