【摘要】：組蛋白翻譯后修飾是重要的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制，包括甲基化、乙�；�、泛素化、磷酸化和糖基化等。其中，組蛋白乙�；茄芯枯^早、最多的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制之一，它由組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶（Histone acetyltransferases, HATs）和組蛋白去乙�；D(zhuǎn)移酶（Histone deacetyltransferases, HDACs）共同調(diào)控來維持細(xì)胞內(nèi)乙�；降膭�(dòng)態(tài)平衡。因此，任何原因引起乙�；�/去乙�；g的平衡失調(diào)，，都將導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)生物過程的異常，甚至產(chǎn)生癌癥。最近，越來越多的研究數(shù)據(jù)表明，全細(xì)胞內(nèi)組蛋白H4第16位賴氨酸K16（H4K16）的乙�；赡芘c某些腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。細(xì)胞內(nèi)H4K16的乙�；绞芏喾N組蛋白修飾酶的調(diào)控，而人源乙�；D(zhuǎn)移酶MOF（hMOF）在細(xì)胞內(nèi)主要通過乙�；疕4K16來參與細(xì)胞內(nèi)的各種生物學(xué)功能。我們?cè)谥暗难芯恐幸呀?jīng)發(fā)現(xiàn)hMOF的基因表達(dá)水平可能與一些癌癥的發(fā)生相關(guān)，如腎癌、卵巢癌、結(jié)腸癌等。同時(shí)，我們?cè)谖赴┙M織中也發(fā)現(xiàn)hMOF的低表達(dá)傾向。為了進(jìn)一步研究和證實(shí)hMOF表達(dá)以及其所修飾的組蛋白H4K16的乙�；脚c胃癌之間的相關(guān)性，以及在胃癌中組蛋白H4K16的乙�；绞欠襁�受其他修飾酶的調(diào)控，本論文中以胃癌腫瘤組織和胃癌細(xì)胞株作為研究對(duì)象，通過RT-qPCR、免疫印跡（Western Blot）、細(xì)胞染色、過表達(dá)和siRNA敲低等技術(shù)，系統(tǒng)研究了hMOF的表達(dá)以及全細(xì)胞組蛋白H4K16的乙�；脚c胃癌的發(fā)生、臨床分期、病理分期、以及病人預(yù)后等之間的相關(guān)性。 （1）我們從52例胃癌患者中同時(shí)收集了腫瘤、癌旁和正常組織，利用RT-qPCR檢測(cè)了hMOF基因的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果證實(shí)81%（42/52）病人的腫瘤組織中hMOF的表達(dá)量比正常組織下降了2倍以上。另外，低表達(dá)hMOF基因不僅與胃癌的腫瘤分期pT2-T4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，而且與患者的生存期也密切相關(guān)。但是，hMOF基因的表達(dá)量在不同年齡組、不同性別組和不同細(xì)胞分化程度組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。 （2）利用RT-qPCR方法對(duì)32例胃癌患者的腫瘤、癌旁和正常組織進(jìn)行了HDAC4基因表達(dá)水平的檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，在胃癌腫瘤中HDAC4基因表達(dá)量雖然有上升趨勢(shì)，但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。HDAC4的高表達(dá)與胃癌的臨床分期、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胃癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，生存期等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 （3）結(jié)合RT-qPCR、WB和細(xì)胞染色方法，在兩種胃癌細(xì)胞系SGC-7901和MGC-803中證實(shí)了hMOF的低表達(dá)和HDAC4的高表達(dá)。同時(shí)，與正常人胃粘膜細(xì)胞GES-1比較，組蛋白H4K16的乙�；皆赟GC-7901和MGC-803胃癌細(xì)胞系中明顯降低。為了證實(shí)H4K16乙�；降牡拖屡chMOF和HDAC4之間的調(diào)控關(guān)系，在MGC-803胃癌細(xì)胞中進(jìn)行了過表達(dá)和siRNA敲低實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，過表達(dá)hMOF提高了全細(xì)胞中H4K16的乙�；�，但是并沒有影響HDAC4的mRNA水平和蛋白水平。相反，siRNA敲低HDAC4，即沒有影響hMOF的蛋白表達(dá)，也沒有因去乙�；饔玫臏p少而導(dǎo)致H4K16乙�；降纳�。 （4）本論文的研究結(jié)果證實(shí)組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶hMOF參與了胃癌的發(fā)生機(jī)制，胃癌細(xì)胞內(nèi)H4K16乙酰基化水平主要受hMOF乙�；D(zhuǎn)移酶，而不是去乙�；窰DAC4的調(diào)控。
[Abstract]:Histone acetyltransferases (HATs) and histone deathylation are important epigenetic regulatory mechanisms, including methylation, acetylation, ubiquitination, phosphorylation and glycosylation. Histone deacetyltransferases (HDACs) are co-regulated to maintain the dynamic balance of acetylation levels in cells. Therefore, any imbalance between acetylation and deacetylation caused by any cause will lead to abnormal cellular processes and even cancer. Recently, more and more research data show that all of them are complete. Acetylation of histone H4 at position 16 lysine K16 (H4K16) may be closely related to the development of some tumors. Acetylation of histone H4K16 in cells is regulated by a variety of histone modifying enzymes, while human acetyltransferase MOF (hMOF) participates in various cellular biological functions mainly through acetylation of H4K16. In order to further study and confirm the expression of hMOF and the acetylation level of histone H4K16 in stomach, we have found that the expression of hMOF may be associated with the development of some cancers, such as renal, ovarian and colon cancers. Correlation between cancers and whether the acetylation level of histone H4K16 in gastric cancer is regulated by other modified enzymes. In this study, we systematically investigated the expression of hMOF in gastric cancer tissues and cell lines by RT-qPCR, Western Blot, cell staining, overexpression and siRNA knockdown techniques. The acetylation level of whole cell histone H4K16 was correlated with the occurrence, clinical stage, pathological stage and prognosis of gastric cancer.
(1) The expression of hMOF gene was detected by RT-qPCR in 52 patients with gastric cancer. Statistical analysis showed that the expression of hMOF gene in 81% (42/52) of the cancer tissues was more than two times lower than that in normal tissues. Lymph node metastasis is associated with distant metastasis and is also associated with survival. However, there is no significant difference in the expression of hMOF gene between different age groups, sex groups and different cell differentiation groups.
(2) The expression level of HDAC4 gene was detected by RT-qPCR in 32 cases of gastric cancer, adjacent to cancer and normal tissues. Statistical analysis showed that the expression level of HDAC4 gene in gastric cancer increased, but there was no significant difference between them. There was no significant difference in metastasis, survival rate and distant metastasis of gastric cancer.
(3) The low expression of hMOF and high expression of HDAC4 were confirmed in two gastric cancer cell lines SGC-7901 and MGC-803 by RT-qPCR, WB and cell staining. The acetylation level of histone H4K16 was significantly lower in SGC-7901 and MGC-803 than in normal gastric mucosal cells GES-1. The results showed that the over-expression of hMOF increased the acetylation level of H4K16, but did not affect the mRNA and protein levels of HDAC4. On the contrary, siRNA knocked down HDAC4, which did not affect the protein surface of hMOF. Da did not increase the level of acetylation of H4K16 due to the decrease of deacetylation.
(4) Histone acetyltransferase hMOF is involved in the pathogenesis of gastric cancer. The acetylation level of H4K16 in gastric cancer cells is mainly regulated by hMOF acetyltransferase, not deacetylase HDAC 4.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2177903