【摘要】：目的:探討CUL4A在胃癌中的作用機(jī)制和臨床意義方法:免疫組織化學(xué)檢測(cè)124例胃癌組織中CUL4A的表達(dá),分析其表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理特征和生存時(shí)間的關(guān)系;觀察過表達(dá)和干擾CUL4A對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和EMT的影響;裸鼠動(dòng)物模型驗(yàn)證干擾CUL4A對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響;實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒光和蛋白質(zhì)免疫共沉淀等方法探討CUL4A失活LATS1-Hippo通路的分子機(jī)制;熒光素酶報(bào)告基因等方法探討mi R-9和mi R-137對(duì)CUL4A的靶向調(diào)控作用;最后在體外細(xì)胞水平和新鮮胃癌組織中驗(yàn)證miRNAs-CUL4A-LATS1-Hippo調(diào)控軸在胃癌細(xì)胞中的作用和臨床意義。結(jié)果:免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示CUL4A蛋白表達(dá)水平與胃癌患者TNM分期(P=0.025)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.003)密切相關(guān),高表達(dá)CUL4A蛋白預(yù)示胃癌患者預(yù)后不良(P=0.026)。過表達(dá)CUL4A促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和EMT,干擾CUL4A則抑制胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和EMT。過表達(dá)CUL4A能降低LATS1和p-YAP蛋白的表達(dá),而不影響MST1/2蛋白的表達(dá),促進(jìn)YAP蛋白入核,干擾CUL4A表達(dá)則相反,并且顯著抑制YAP相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄。免疫共沉淀結(jié)果顯示CUL4A與LATS1蛋白結(jié)合發(fā)揮作用。分別上調(diào)miR-9和miR-137的表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞增殖和侵襲,下調(diào)CUL4A蛋白表達(dá),而不影響CUL4A mRNA表達(dá),熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果表明miR-9和miR-137靶向調(diào)控CUL4A的表達(dá)。不僅如此,miR-9和miR-137通過靶向CUL4A調(diào)控Hippo通路,過表達(dá)CUL4A能部分逆轉(zhuǎn)miR-9和miR-137抑制胃癌細(xì)胞增殖和侵襲的作用。在胃癌組織中,miR-9和miR-137的表達(dá)水平均與CUL4A和YAP蛋白表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:miR-9/137-CUL4A-LATS1-Hippo調(diào)控軸失衡參與了胃癌細(xì)胞惡性進(jìn)展,CUL4A可作為治療胃癌的一個(gè)潛在分子靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: to investigate the mechanism and clinical significance of CUL4A in gastric cancer. Methods: the expression of CUL4A was detected by immunohistochemistry in 124 cases of gastric cancer, and the relationship between the expression level and clinicopathological features and survival time of gastric cancer was analyzed. The effects of overexpression and interference of CUL4A on the proliferation, invasion and EMT of gastric cancer cells were observed, and the effects of interfering CUL4A on the proliferation of gastric cancer cells were verified in nude mice. Real-time quantitative PCR, immunofluorescence and protein immunoprecipitation were used to investigate the molecular mechanism of inactivated LATS1-Hippo pathway of CUL4A, luciferase reporter gene and other methods were used to investigate the targeting regulation of CUL4A by miR-9 and miR-137. Finally, the role and clinical significance of miRNAs-CUL4A-LATS1-Hippo regulatory axis in gastric cancer cells were verified in vitro and fresh gastric cancer tissues. Results: immunohistochemical results showed that the expression of CUL4A protein was closely related to the TNM stage (P0.025) and lymph node metastasis (P0. 003) of gastric cancer patients. The high expression of CUL4A protein could predict the poor prognosis of gastric cancer patients (P0. 026). Overexpression of CUL4A promoted the proliferation, invasion and EMTof gastric cancer cells, while interfering with CUL4A inhibited the proliferation, invasion and EMTof gastric cancer cells. Overexpression of CUL4A decreased the expression of LATS1 and p-YAP, but did not affect the expression of MST1/2, promoted the entry of YAP into the nucleus, interfered with the expression of CUL4A, and significantly inhibited the transcription of YAP related target genes. The results of immunoprecipitation showed that CUL4A combined with LATS1 protein. The up-regulated expression of miR-9 and miR-137 inhibited the proliferation and invasion of gastric cancer cells, down-regulated the expression of CUL4A protein, but did not affect the expression of CUL4A mRNA. The results of luciferase reporter gene showed that miR-9 and miR-137 regulated CUL4A expression. Moreover, miR-137 and miR-9 regulated the Hippo pathway through targeting CUL4A, and overexpression of CUL4A partially reversed the inhibitory effect of miR-9 and miR-137 on proliferation and invasion of gastric cancer cells. The expression levels of miR-9 and miR-137 were negatively correlated with the expression of CUL4A and YAP in gastric carcinoma. Conclusion the imbalance of the axis regulated by 1: miR-9 / 137-CUL4A-LATS1-Hippo is involved in the malignant progression of gastric cancer cells. CUL4A may be a potential molecular target for the treatment of gastric cancer.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2164134