【摘要】：第一部分巨大肝細(xì)胞癌術(shù)后生存分析及nomogram預(yù)測(cè)模型的建立目的:手術(shù)仍是目前肝癌最有效的治療手段,在肝細(xì)胞癌亞型中,我們選擇預(yù)后差、復(fù)發(fā)率高的巨大肝癌病人(直徑≥10 cm)進(jìn)行臨床病理資料分析,建立術(shù)前和術(shù)后nomogram預(yù)測(cè)模型對(duì)病人的生存和復(fù)發(fā)進(jìn)行分析。方法:回顧性分析2008年1月到2009年12月在東方肝膽外科醫(yī)院行肝切除術(shù)的464例巨大肝癌病人以及2008年1月到2010年4月的在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院行肝切除術(shù)的90例巨大肝癌病人的臨床病理資料。觀察術(shù)后圍手術(shù)期并發(fā)癥、死亡率、復(fù)發(fā)間隔時(shí)間和總生存期。將東方肝膽外科醫(yī)院病人隨機(jī)分為建模組和內(nèi)部驗(yàn)證組,全部的福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病人為外部驗(yàn)證組,Cox回歸分析對(duì)術(shù)前和術(shù)后資料分別進(jìn)行單因素和多因素分析,將多因素有意義(P0.05)的變量納入最終的術(shù)前和術(shù)后nomogram預(yù)測(cè)模型中。通過C-index、校準(zhǔn)曲線以及驗(yàn)證組驗(yàn)證該模型的預(yù)測(cè)性。結(jié)果:東方肝膽外科醫(yī)院病人的術(shù)后并發(fā)癥發(fā)病率為18.6%(n=95);術(shù)后1、3、5年累計(jì)復(fù)發(fā)率為43.8%,74.1%和82.1%;生存率為75.1%,49%和33.3%。福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病人的術(shù)后并發(fā)癥發(fā)病率為30.5%(n=32);術(shù)后1、3、5年累計(jì)復(fù)發(fā)率為38.3%,69.2%和84.1%;生存率為77.7%,44.9%和21.5%�；谛g(shù)前和術(shù)后資料預(yù)測(cè)生存的nomograms預(yù)測(cè)生存的C-index分別為0.75(95%CI,0.72-0.78)和0.78(0.75-0.81)。術(shù)后3年、5年生存的校準(zhǔn)曲線nomograms預(yù)測(cè)的生存情況和實(shí)際生存情況有較高的吻合度。通過nomograms預(yù)測(cè)模型,將病人進(jìn)行分層,將術(shù)后病人有效的分為生存率逐漸增加的四等分(P0.01)。術(shù)前臨床病理資料多因素分析表明:AFP200ug/L、高HBV-DNA載量、多發(fā)腫瘤、較大的腫瘤直徑,以及合并門脈癌栓為生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;AFP200ug/L、高HBV-DNA載量、多發(fā)腫瘤、較大的腫瘤直徑以及合并門脈癌栓為復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。術(shù)后臨床病理資料多因素分析表明:高HBV-DNA載量、多發(fā)腫瘤、較大的腫瘤直徑、有血管侵犯、腫瘤包膜不完整、較差的Edmonson-Stenier分級(jí)為生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;高HBV-DNA載量、多發(fā)腫瘤、較大的腫瘤直徑、有血管侵犯、腫瘤包膜不完整為復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論:術(shù)前和術(shù)后nomogram預(yù)測(cè)模型對(duì)預(yù)測(cè)巨大肝癌術(shù)后病人的長期生存和復(fù)發(fā)情況有良好的準(zhǔn)確性。第二部分巨大肝細(xì)胞癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究目的通過同位素標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)(i TRAQ)鑒定與篩選巨大肝細(xì)胞癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)的差異表達(dá)蛋白。方法選取巨大肝細(xì)胞癌手術(shù)切除術(shù)后復(fù)發(fā)病人的初次手術(shù)新鮮肝癌組織標(biāo)本,根據(jù)術(shù)后復(fù)發(fā)時(shí)間分組。應(yīng)用i TRAQ試劑標(biāo)記的二維液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(2DLC-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析得到差異表達(dá)蛋白,并進(jìn)一步行生物信息學(xué)分析。結(jié)果6個(gè)月和2年復(fù)發(fā)組比較之間存在顯著表達(dá)差異(大于1.5倍或小于0.67倍)的蛋白質(zhì)分子共計(jì)409種;6-12個(gè)月和2年復(fù)發(fā)組比較之間存在顯著表達(dá)差異的蛋白質(zhì)分子共計(jì)518種。在本研究中,我們進(jìn)一步篩選出隨復(fù)發(fā)時(shí)間不同而變化較大的差異蛋白質(zhì)10種,上調(diào)的有S100A9、MPO、APOA4、TMEM97、NR5A2,下調(diào)的有DHRS2、TTC4、CHD2、HPD、FTCD。GO分析顯示,差異表達(dá)蛋白相關(guān)基因多參與類固醇代謝,氧化還原以及蛋白代謝。IPA分析顯示,差異表達(dá)蛋白主要參與分別由NR5A2、IL1、ERK1/2、NFk B和IFNα調(diào)控的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。結(jié)論iTRAQ標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從整體上了解肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)過程中蛋白質(zhì)的表達(dá)差異,為篩選出有意義的生物標(biāo)記物提供一個(gè)良好的平臺(tái)。生物信息學(xué)的研究方法進(jìn)一步了解差異表達(dá)蛋白的功能和以及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。第三部分巨大肝細(xì)胞癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的的差異蛋白表達(dá)驗(yàn)證目的從m RNA和蛋白水平對(duì)篩選的蛋白進(jìn)行驗(yàn)證,篩選與肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)的差異蛋白。方法選取S100A9、DHRS2、TMEM97和NR5A2等四種蛋白進(jìn)一步驗(yàn)證。不同復(fù)發(fā)時(shí)間巨大肝癌病人的新鮮肝癌組織標(biāo)本進(jìn)行熒光定量PCR(Q-PCR)、免疫印跡(Western blot)驗(yàn)證。不同復(fù)發(fā)時(shí)間巨大肝癌病人的肝癌石蠟切片標(biāo)本行免疫組化驗(yàn)證。結(jié)果Q-PCR和Western blot驗(yàn)證結(jié)果顯示,TMEM97高表達(dá)為術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。免疫組化驗(yàn)證結(jié)果顯示,TMEM97高表達(dá)(P=0.005,HR1.534)、術(shù)前高血清AFP(0.003,1.595)、腫瘤多發(fā)(0.000,2.422)、腫瘤直徑較大(0.018,1.042)、有肉眼癌栓(0.002,1.776)、有MVI(0.019,1.504)、包膜不完整(0.004,0.595)、術(shù)中輸血(0.028,1.590)為術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論TMEM97在蛋白和m RNA水平的表達(dá)與蛋白組學(xué)結(jié)果一致,TMEM97可能作為肝細(xì)胞癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)的預(yù)警蛋白。
[Abstract]:Part 1 Survival Analysis and nomogram prediction model for giant hepatocellular carcinoma (HCC) objective: surgery is still the most effective treatment for liver cancer. In the subtype of hepatocellular carcinoma, we choose a large liver cancer patient with a poor prognosis and a high recurrence rate (diameter more than 10 cm) to analyze the pathological data of the clinicopathology, and establish the preoperation and postoperative nomogram prediction The model was used to analyze the survival and recurrence of the patients. Methods: a retrospective analysis of the clinicopathological data of 464 huge hepatocellular carcinoma patients who underwent hepatectomy in the Eastern Department of hepatobiliary surgery from January 2008 to December 2009 and 90 cases of hepatectomy in the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University from January 2008 to April 2010. The perioperative complications, mortality, recurrence interval and total survival time were observed. The patients in the Eastern Department of hepatobiliary surgery were randomly divided into the modeling group and the internal verification group. All the patients in the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University were the external verification group. The Cox regression analysis was used to analyze the single factor and multi factor analysis of the preoperative and postoperative data respectively. The multivariate and meaningful (P0.05) variables were included in the final preoperation and postoperatively nomogram prediction models. The predictability of the model was verified by C-index, calibration curve and verification group. Results: the incidence of postoperative complications was 18.6% (n=95) in the Oriental Department of Hepatobiliary Surgery; the cumulative recurrence rate in 1,3,5 years after operation was 43.8%, 74.1% and 82.1%; survival was 74.1% and 82.1%. The incidence of postoperative complications of 75.1%, 49%, and 33.3%. Affiliated First hospitals of Fujian Medical University was 30.5% (n=32); the cumulative recurrence rate was 38.3%, 69.2% and 84.1% in 1,3,5 years after operation; the survival rate was 77.7%, 44.9% and 21.5%. predicted survival based on preoperative and postoperative data to predict survival C-index for 0.75 (95%CI, 0.72-0.78) and 0, respectively. .78 (0.75-0.81). 3 years after the operation, the 5 year survival calibration curve nomograms predicted survival and the actual survival of a higher degree of anastomosis. Through the nomograms prediction model, the patients were stratified, and the postoperative patients were effectively divided into four equal fraction (P0.01) with increasing survival rate (P0.01). Preoperative clinicopathological data analysis showed that: AFP200ug /L, high HBV-DNA load, multiple tumor, larger tumor diameter, and an independent risk factor for survival with portal vein tumor thrombus; AFP200ug/L, high HBV-DNA load, multiple tumor, larger tumor diameter and combined portal vein thrombus as independent risk factors for recurrence. Multivariate analysis of postoperative clinicopathological data showed high HBV-DNA load and multiple swelling. Tumor, large tumor diameter, vascular invasion, tumor capsule incomplete, poor Edmonson-Stenier classification as independent risk factors for survival; high HBV-DNA load, multiple tumor, larger tumor diameter, vascular invasion, and incomplete tumor capsule as an independent risk factor for recurrence. Conclusion: preoperation and postoperative nomogram prediction model is predicted. The long-term survival and recurrence of huge hepatocellular carcinoma patients have good accuracy. Second the difference of proteomics of the recurrence related after radical hepatocarcinoma radical resection for large hepatocellular carcinoma (I TRAQ) identification and screening of differential expression related to recurrence of giant hepatocellular carcinoma after radical resection Methods the primary hepatocarcinoma tissue specimens of the patients with recurrent hepatocellular carcinoma (HCC) after surgical excision were selected to be grouped according to the postoperative recurrence time. Two dimensional liquid chromatography tandem mass spectrometry (2DLC-MS/MS) combined with I TRAQ reagent was used to analyze the differential expression of protein, and further bioinformatics analysis was performed. There were 409 protein molecules with significant differences (more than 1.5 times or less than 0.67 times) in the 6 month and 2 year recurrence groups, and 518 protein molecules with significant differences in the 6-12 and 2 year recurrence groups. In this study, we further screened the differences that varied with the recurrence time. 10 different proteins, up regulated by S100A9, MPO, APOA4, TMEM97, NR5A2, and down regulated DHRS2, TTC4, CHD2, HPD, and FTCD.GO analysis showed that the differentially expressed protein related genes were involved in steroid metabolism, redox and protein metabolism.IPA analysis. Conclusion the iTRAQ tagged quantitative proteomics technology provides a good platform for the screening of significant biomarkers in the process of recurrence of hepatocellular carcinoma. The bioinformatics research method further understands the function of differentially expressed proteins and its regulatory network. The differential protein expression in third parts of the recurrence of giant hepatocellular carcinoma (HCC) after radical resection aims to verify the selected proteins from m RNA and protein levels and to screen the differential proteins associated with the recurrence of hepatocellular carcinoma. Methods such as four proteins, such as S100A9, DHRS2, TMEM97 and NR5A2, were further verified. Fluorescence quantitative PCR (Q-PCR) and Western blot (Western blot) were tested for human fresh liver cancer tissue specimens. The paraffin section specimens of hepatoma cancer patients with different recurrence time were verified by immunohistochemistry. Results the results of Q-PCR and Western blot showed that the high expression of TMEM97 was a risk factor for postoperative recurrence. The immunohistochemical verification results showed that TMEM97 high expression (P=0.005, HR1.534), preoperative high serum AFP (0.003,1.595), tumor multiple (0.000,2.422), tumor diameter (0.018,1.042), naked eye cancer thrombus (0.002,1.776), MVI (0.019,1.504), incomplete capsule (0.004,0.595), and intraoperative blood transfusion (0.028,1.590) as an independent risk factor for postoperative recurrence The expression is consistent with the proteomics results. TMEM97 may be used as a warning protein for recurrence after radical resection of hepatocellular carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2149229