【摘要】：目的:前列腺癌是美國男性人群中確診數(shù)最多的癌癥,也是導致男性死亡的第二大癌癥。通過手術或者化學方法實現(xiàn)的的雄激素剝奪療法(ADT)被廣泛應用于晚期前列腺癌的治療。雖然雄激素剝奪療法在治療起始階段可通過阻斷雄激素受體的活動來抑制前列腺癌的生長,但是在激素敏感型前列腺癌演化為去勢抵抗型前列腺癌(CRPC)的過程中,對雄激素剝奪療法的抵抗會不可避免地發(fā)生。對于雄激素剝奪療法的抵抗是由于雄激素受體信號傳導通路的再次激活,多項研究表明性腺外組織分泌的雄激素和前列腺癌細胞自分泌產(chǎn)生的雄激素仍然可以在極低濃度條件下激活雄激素受體信號傳導通路。對于雄激素剝奪療法的抵抗促進了其他類型雄激素受體阻滯劑的研發(fā),其中最新的研發(fā)進展是包括enzalutamide在內(nèi)的第二代內(nèi)分泌療法藥物的發(fā)現(xiàn)和應用。Enzalutamide是用于治療去勢抵抗型前列腺癌的第二代抗雄激素藥物。Enzalutamide可延長去勢抵抗型前列腺癌患者的總體生存率,但是其效果有限,平均可延長4.8個月的生存時間,并且在連續(xù)用藥24個月后大多數(shù)患者會在服藥過程中病情進展。但是,關于enzalutamide抵抗的具體分子生物學機制尚不清楚。最新的研究進展顯示,e RNA在腫瘤發(fā)生和包括前列腺癌在內(nèi)的多種癌癥的抗癌藥物抵抗方面發(fā)揮重要作用。但是,e RNA在去勢抵抗型前列腺癌和其對enzalutamide抵抗方面的作用和機制仍有待研究�？紤]到雄激素受體在前列腺癌對enzalutamide抵抗方面發(fā)揮的重要作用,在我們的研究中,我們重點探索了雄激素受體調(diào)控的e RNA和相應m RNA在enzalutamide處理后基因表達和相互作用的變化以及它們在前列腺癌的enzalutamide抵抗形成和發(fā)展過程中發(fā)揮的作用。我們報道了enzalutamide誘導的雄激素受體調(diào)控的增強子RNA(AR-e RNAs)以及它們在去勢抵抗型前列腺癌細胞的生長、生存和enzalutamide抵抗方面發(fā)揮的作用。方法:通過染色質(zhì)免疫共沉淀和高通量測序(Ch IP-seq)、RNA高通量測序(RNA-seq)和Meta分析得到經(jīng)enzalutamide長期處理后在C4-2細胞中上調(diào)并且同時在LNCa P細胞中下調(diào)的AR-e RNA的基因,并經(jīng)UCSC瀏覽器和實時定量RT-PCR驗證。3C實驗驗證所得基因位點啟動子和增強子間相互作用。應用基因敲除和實時定量RT-PCR研究基因在CRPC和enzalutamide抵抗形成和發(fā)展中的作用。結(jié)果:按照研究的步驟和相應實驗的流程,我們的研究發(fā)現(xiàn)可分為以下六個方面。一、雄激素受體的染色質(zhì)免疫共沉淀和高通量測序(Ch IP-seq)以及RNA高通量測序(RNA-seq)結(jié)果顯示,188和227個AR-e RNA分別在enzalutamide抵抗型LNCa P和C4-2細胞中差異性表達。二、通過Meta分析,我們獲得了enzalutamide長期處理后在C4-2細胞中上調(diào)并且同時在LNCa P細胞中下調(diào)的AR-e RNA。三、我們進一步用實時定量RT-PCR驗證了這些經(jīng)enzalutamide長期處理后在C4-2細胞中上調(diào)并且同時在LNCa P細胞中下調(diào)的AR-e RNA的基因表達水平,結(jié)果顯示在4個基因位點:FTO、LUZP2、MARC1和NCAM位點上的AR-e RNA和相關的m RNA表達經(jīng)長期enzalutamide處理后在C4-2細胞中上調(diào),在LNCa P細胞中下調(diào)或保持不變。四、我們通過3C實驗(chromosome confirmation capture assay,即染色體構(gòu)象捕捉分析)確認了NCAM2和MARC1位點上的增強子-啟動子間的相互作用,因此這些位點上轉(zhuǎn)錄出相應m RNA的啟動子DNA被證實為轉(zhuǎn)錄出e RNA的增強子DNA的靶點。五、在后續(xù)的功能學試驗中,我們發(fā)現(xiàn)LUZP2基因沉默可以抑制enzalutamide抵抗型C4-2細胞的生長,而MARC1基因沉默可以促進這些細胞的生長。六、有趣的是,對前人文獻中報道的數(shù)據(jù)庫的Meta分析顯示,和正常前列腺組織相比,LUZP2基因位點的m RNA在激素敏感型前列腺癌細胞中表達量顯著增高;但是和激素敏感型前列腺癌細胞相比,LUZP2的m RNA在轉(zhuǎn)移性去勢抵抗型前列腺癌中的表達量顯著降低。我們通過對Mayo Clinic激素敏感型前列腺癌和去勢抵抗型前列腺癌病人樣本的實時定量RT-PCR確認了LUZP2在這些樣本中有著和前人文獻數(shù)據(jù)庫相同的變化趨勢。綜上所述,這些結(jié)果提示LUZP2可能成為激素敏感型前列腺癌和enzalutamide抵抗型去勢抵抗型前列腺癌中具有藥理學價值的治療靶點;MARC1可能成為藥物敏感性的潛在指示物、預后因素和疾病監(jiān)測指標。結(jié)論:我們的研究提示對e RNA的生物學系統(tǒng)性分析是識別和篩選功能性基因位點的有效新途徑,這不僅有助于對去勢抵抗型前列腺癌的生存機制和enzalutamide抵抗的研究,也有望為去勢抵抗型前列腺癌提供新的治療靶點。
[Abstract]:Purpose : Prostate cancer is the most diagnosed cancer in the American male population and is the second major cancer leading to the death of men . The androgen deprivation therapy ( ADT ) has been widely used in the treatment of advanced prostate cancer . Although androgen deprivation therapy is a second generation antiandrogen receptor for castration - resistant prostate cancer , the latest development progress has shown that the androgen receptor - induced androgen and prostate cancer cell self - secretion produces androgen receptor signaling pathways . Enzalutamide is a second - generation anti - androgen receptor for androgen deprivation therapy . Enzalutamide is a second - generation androgen receptor for castration - resistant prostate cancer . Enzalutamide is a second - generation androgen receptor for castration - resistant prostate cancer . Enzalutamide is a second - generation androgen receptor - resistant prostate cancer . In conclusion , it is interesting to suggest that LUZP2 gene silencing can inhibit the growth of enzalutamide - resistant C4 - 2 cells compared with normal prostate tissue , and MARC1 may be a potential indicator of drug sensitivity , prognostic factors and disease monitoring indexes .
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

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本文編號：2134469