本文選題：細菌外膜囊泡(OMVs) + 樹突狀細胞(DCs)��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：宮頸癌是威脅全球女性健康的第二大惡性腫瘤,在幾乎100%的宮頸癌患者中均檢測到了人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的存在。除宮頸癌,HPV還可以引起頭頸癌、肛門和生殖道癌等。目前,盡管國際上已有預(yù)防性HPV疫苗獲批準上市,但是鑒于疫苗的接種覆蓋面有限、病毒基因型間交叉保護力有限、以及預(yù)防性疫苗對于已經(jīng)建立的HPV長期感染或腫瘤患者,沒有明顯的治療作用,HPV仍然是人類健康的重大威脅。因此,研發(fā)治療性HPV疫苗,針對癌前病變和腫瘤進行免疫治療,對于控制HPV相關(guān)疾病具有廣闊的應(yīng)用前景。然而,目前治療性HPV疫苗臨床研究普遍缺乏顯著的治療效果。研究顯示,不能夠激發(fā)高水平的特異性細胞免疫應(yīng)答,是腫瘤疫苗設(shè)計中存在的顯著問題。因此,積極開發(fā)新型抗原遞送系統(tǒng),增強抗原向抗原遞呈細胞的遞送,是提高疫苗激發(fā)的腫瘤抗原特異性細胞應(yīng)答強度,增強腫瘤疫苗臨床效力的重要策略。細菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)為一種蛋白脂質(zhì)體納米顆粒,直徑為20-250nm,由革蘭氏陰性菌在生長過程中由外膜突起釋放到胞外。OMVs具有成為疫苗載體的諸多特點與優(yōu)勢:如可基因重組改造,可進行大蛋白及多蛋白呈遞,具多種促進抗原遞呈細胞識別的受體,具自佐劑活性,作為一種納米顆�？梢源龠M向淋巴結(jié)趨化等。此外,B群奈瑟腦膜炎OMVs疫苗的成功臨床應(yīng)用,對于發(fā)展OMVs成為有潛力的疫苗載體有著重要提示作用。近年,有研究者嘗試將外源蛋白整合到OMVs中,例如將肺炎球菌蛋白PspA成功呈遞在沙門氏菌的OMVs以抵御肺炎雙球菌的感染,以及我們前期研究中將Omp22蛋白呈遞在大腸桿菌E.coli的OMVs上以抵御鮑曼不動桿菌的感染,展示OMVs經(jīng)基因工程改造,可承載外源大分子抗原蛋白,誘導(dǎo)特異體液免疫應(yīng)答,有效抵御病原菌的攻擊。然而,以大腸桿菌OMVs作為治療性疫苗載體、激發(fā)抗原特異的細胞免疫應(yīng)答,其技術(shù)、免疫特點、腫瘤干預(yù)效應(yīng)等相關(guān)的研究尚無報道。本研究旨在探討重組細菌外膜囊泡作為一種新型治療性腫瘤疫苗載體的特點與潛力。研究主要包括:1)利用基因工程手段將腫瘤抗原HPV16型E7蛋白呈遞在大腸桿菌OMVs上,獲得重組OMVs疫苗形式;2)在體外培養(yǎng)的巨噬細胞Raw264.7中,考察重組OMVs將自身成分及模式抗原GFP遞送至抗原遞呈細胞的能力;在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的骨髓來源樹突狀細胞(BMDCs)中,探討了重組OMVs被高效攝取的能力、囊泡結(jié)構(gòu)在攝取過程中的重要性及BMDCs攝取OMVs后的成熟情況;3)在C57BL/6小鼠TC-1移植腫瘤模型中,評價了呈遞HPV16 E7抗原的重組OMVs激發(fā)特異細胞免疫的能力及對已建立腫瘤的治療性干預(yù)效果。結(jié)果表明,經(jīng)利用ClyA及硫氧還蛋白作為引導(dǎo)序列,可將HPV16E7蛋白呈現(xiàn)于OMVs表面及內(nèi)腔;OMVs可被Raw264.7及BMDCs有效攝取,且囊泡結(jié)構(gòu)對于攝取效率非常重要;OMVs能夠促進BMDCs表面共刺激分子CD80、CD86、CD83、CD40等的高表達及TNFα的分泌,顯著促進BMDCs的功能成熟;無需混合傳統(tǒng)佐劑,重組OMVs同時誘導(dǎo)了抗原特異的細胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答,且具有偏向于誘導(dǎo)Th1/CTL的免疫特點;重組OMVs治療性免疫顯著抑制了腫瘤的生長;重組OMVs呈遞E7較之wtOMVs直接混合E7以及弗氏佐劑混合E7,具有更強的免疫效應(yīng)。本研究提示,納米級的大腸桿菌OMVs在腫瘤免疫治療中可以作為一種潛在的新型疫苗遞送載體,有效激發(fā)腫瘤抗原特異的細胞免疫應(yīng)答。研究為新型治療性腫瘤疫苗突破探討了嶄新的策略。
[Abstract]:In recent years , the research and development of therapeutic HPV vaccine is a major threat to human health . In this study , we have evaluated the ability of recombinant omVs to express HPV16 E7 protein to antigen - presenting cells in vitro . The results show that recombinant omVs can be used as a potential new vaccine delivery vector in tumor immunotherapy , which can effectively stimulate tumor antigen - specific cellular immune response .
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

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本文編號：2112183