發(fā)布時(shí)間：2018-07-09 19:29

  本文選題：腫瘤轉(zhuǎn)移 + 肝癌細(xì)胞��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景及目的:肝癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均位居前列,我國(guó)是肝癌高發(fā)國(guó)家之一,其新發(fā)和死亡病例數(shù)約占全球一半。肝癌早期不易發(fā)現(xiàn),就診時(shí)多處于中晚期,治療困難,轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是影響其預(yù)后的主要因素,因此尋找肝癌生物標(biāo)志物包括腫瘤易感基因和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因等成為腫瘤研究的熱點(diǎn)。本課題組前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)了 NDRG1能夠抑制肝癌細(xì)胞株BEL7402細(xì)胞侵襲遷移能力,NDRG1發(fā)揮抑癌作用的分子機(jī)制是本研究的重點(diǎn)。本項(xiàng)目旨在尋找NDRG1調(diào)控的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)下游基因,并探索NDRG1通過(guò)Smad2/3通路調(diào)控整合素β3(ITGB3)的表達(dá)進(jìn)而影響B(tài)EL7402細(xì)胞侵襲遷移能力的分子機(jī)制,為肝癌侵襲轉(zhuǎn)移提供新的線索。方法:1、通過(guò)PCR Array實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低NDRG1基因表達(dá)后肝癌細(xì)胞株BEL7402細(xì)胞和SMMC7721細(xì)胞中mRNA表達(dá)發(fā)生變化的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,尋找NDRG1發(fā)揮作用的可能下游基因。2、應(yīng)用Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證在BEL7402細(xì)胞和SMMC7721細(xì)胞中敲低NDRG1基因后可能下游基因的蛋白表達(dá)變化,鎖定ITGB3基因繼續(xù)進(jìn)行深入研究。3、Real-Time PCR檢測(cè)肝癌細(xì)胞系中ITGB3 mRNA表達(dá)情況,利用siRNA技術(shù)敲低BEL7402細(xì)胞中ITGB3基因的表達(dá),并利用Real-Time PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其敲低效果。4、在 BEL7402 細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染 sh-NDRGl 和 si-ITGB3 后,利用 Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證整合素β3對(duì)NDRG1功能發(fā)揮的影響。5、Western Blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在 BEL7402 細(xì)胞中敲低 NDRG1 后,TGF-β/Sma d通路關(guān)鍵分子Smad2、Smad3及其磷酸化蛋白p-Smad2、p-Smad3的表達(dá)變化。6、向轉(zhuǎn)染了 sh-NDRGl的BEL7402細(xì)胞中加入TGF-β/Smad通路抑制劑SB431542,Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SB431542對(duì)NDRG1引起的整合素β3蛋白表達(dá)變化的影響,Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SB431542對(duì)NDRG1抑制BEL7402細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。7、在BEL7402細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染si-Smad2、si-Smad3或通路共同調(diào)節(jié)蛋白si-Smad4,Real-Time PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證siRNA對(duì)目標(biāo)基因的干擾效果,并進(jìn)一步分別共轉(zhuǎn)染sh-NDRG1及si-Smad2、si-Smad3或si-Smad4,驗(yàn)證TGF-β/Smad通路關(guān)鍵蛋白分子分別對(duì)NDRG1調(diào)控整合素β3表達(dá)的影響。結(jié)果:1、PCR Array 實(shí)驗(yàn)表明敲低 NDRG1 基因后,CTSL1、IL-1β、ITGB3、MMP10、SERPINE1基因在BEL7402細(xì)胞中表達(dá)顯著升高,MMP13、TNFSF10 基因表達(dá)減少;而在 SMMC7721 細(xì)胞中,ETV4、ITGB3、MMP10、SERPINE1基因的表達(dá)量增加,CDH6、TNFSF10基因的表達(dá)量降低。2、Western Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí),NDRG1敲低72h后,BEL7402細(xì)胞及SMMC7721細(xì)胞中整合素β3蛋白表達(dá)均上調(diào)。3、ITGB3 mRNA在BEL7402細(xì)胞中的內(nèi)源性表達(dá)量最高,其次是HepG2細(xì)胞,在SMMC7721細(xì)胞中表達(dá)量最低;Real-Time PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明si-ITGB3能有效干擾BEL7402細(xì)胞中整合素β3的表達(dá)。4、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明敲低ITGB3后sh-NDRG1誘導(dǎo)的BEL7402細(xì)胞遷移和侵襲能力的增強(qiáng)被顯著抑制,NDRG1可能通過(guò)干擾整合素β3的表達(dá)抑制BEL7402細(xì)胞的遷移和侵襲能力。5、Western Blot 實(shí)驗(yàn)表明敲低 NDRG1 基因后,Smad2、p-Smad2 及 p-Smad3的表達(dá)上調(diào)。6、通路抑制劑SB431542能夠阻礙sh-NDRG1介導(dǎo)的BEL7402細(xì)胞中整合素β3的上調(diào),并且能夠阻礙NDRG1對(duì)BEL7402細(xì)胞遷移和侵襲能力的調(diào)控,說(shuō)明NDRG1可能通過(guò)TGF-β/Smad通路發(fā)揮抑制BEL7402細(xì)胞的遷移和侵襲能力的作用。7、Real-Time PCR 和 Western Blot 實(shí)驗(yàn)表明 si-Smad2、si-Smad3 及 si-Smad4均能有效干擾相應(yīng)目標(biāo)基因mRNA和蛋白的表達(dá),且分別敲低Smad2、Smad3及Smad4均能阻礙NDRG1對(duì)整合素β3的調(diào)控作用,進(jìn)一步證實(shí)了NDRG1可能通過(guò)抑制BEL7402細(xì)胞中Smad2/3通路而阻礙整合素β3的表達(dá)。結(jié)論:1、敲低BEL7402和SMMC7721肝癌細(xì)胞中的NDRG1基因后,ITGB3表達(dá)顯著升高。2、NDRG1通過(guò)干擾整合素β3的表達(dá)抑制BEL7402細(xì)胞的侵襲和遷移能力。3、NDRG1通過(guò)抑制BEL7402細(xì)胞中Smad2/3通路而阻礙整合素β3的表達(dá)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of NDRG1 on the expression of ITGB3 mRNA in BEL7402 cells and to investigate the effect of NDRG1 on the expression of ITGB3 mRNA in BEL7402 cells . The results showed that the expression of TGF - 尾 / Smad pathway in BEL7402 cells was higher than that of BEL7402 cells . Conclusion : The expression of TGF - Smad2 , Smad3 and Smad4 can inhibit the expression of integrin 尾3 . Conclusion : 1 . NDRG1 can inhibit the expression of integrin 尾3 by inhibiting Smad2 / 3 pathway in BEL7402 cells . Conclusion : 1 . NDRG1 can inhibit the invasion and migration of BEL7402 cells by interfering with the expression of Smad2 / 3 in BEL7402 cells .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 霍艷英 ,張開泰 ,李邦印 ,段瑞峰 ,范保星 ,項(xiàng)小瓊 ,胡迎春 ,謝玲 ,吳德昌;RESPONSIVENESS OF Smad7 GENE TO TGF-b1 IN THE TUMORIGENESIS[J];Chinese Journal of Cancer Research;2002年03期

2 陳偉 ,付小兵 ,盛志勇;Review of current progress in the structure and function of Smad proteins[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

3 王啟偉;Smad蛋白信號(hào)網(wǎng)絡(luò)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年04期

4 張遠(yuǎn)強(qiáng),胡靜,劉新平,許若軍;EXPRESSION AND LOCALIZATION OF SMAD4 PROTEIN IN RAT TESTIS DURING THE POSTNATAL DEVELOPMENT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

5 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凱,魏玉華,于鑫,彭吉潤(rùn);Inhibitory effect of retroviral vector containing anti-sense Smad_4 gene on Ito cell line, LI90[J];Chinese Medical Journal;2004年08期

6 鄭啟新;王運(yùn)濤;郭曉東;;Wild-type Smad3 Gene Enhances the Osteoblastic Differentiation of Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells in Vitro[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年06期

7 王運(yùn)濤,鄭啟新,郭曉東,吳永超,郝杰;Influence of Exogenous TGFβ_1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年01期

8 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年03期

9 ;Berbamine inhibits proliferation and induces apoptosis of KU812 cells by increasing Smad3 activity[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

10 尚政軍;修復(fù)相關(guān)基因Smad3的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 霍艷英;李剛;胡迎春;周平坤;吳德昌;;THE SIGNIFICANCE OF SMAD7 IN TGF-β-MEDIATED SMADS AND ERK/MAPK SIGNAL PATHWAY IN RADIATION-INDUCED TUMORIGENIC HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會(huì)論文摘要[C];2005年

2 張素平;張然;陳峰;張麗霞;陳曄光;;Smad7 antagonises TGF-β signaling in the nucleus[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 王劍;楊曉;;Gene expression profile in cardiomyocyte-specific Smad4 knock-out mice[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

4 劉昭廷;王強(qiáng);孟安明;;基因組水平上受斑馬魚Smad2調(diào)控的靶基因[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

7 Jingmin Zhao;Jia Wang;Jun Yu;;Inhibitory role of Smad7 in hepatocarcinogenesis in mice and in vitro[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

9 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

10 楊曉;;Targeted disruption of Smad4 in mouse epidemis results in failure of hair follicle cycling and formation of skin tumors[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)七屆一次青年研討會(huì)暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

2 通訊員 俞志新　記者 李水根;骨碎補(bǔ)總黃酮可以促進(jìn)骨形成[N];健康報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 黎錦;氨氯地平通過(guò)調(diào)節(jié)Smad的表達(dá)防止腎臟纖維化[D];武漢大學(xué);2014年

2 張俊文;TGF-β信號(hào)通路中兩個(gè)與TβRI相互作用蛋白的功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 胡祥鵬;復(fù)方芪參提取物調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)及miR-145、miR-21表達(dá)發(fā)揮抗肝纖維化—肝細(xì)胞癌作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 徐濤;NLRC5通過(guò)NF-κB與TGF-β1/Smad通路調(diào)控肝星狀細(xì)胞炎癥因子分泌和纖維化的功能及其機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 徐洪杰;回轉(zhuǎn)條件下成骨細(xì)胞微絲對(duì)BMP2信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控[D];西北工業(yè)大學(xué);2015年

6 黃闖;FTY-720調(diào)節(jié)去勢(shì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化Smad信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王加紅;IL-6對(duì)TGF-β1/Smad3信號(hào)通路介導(dǎo)缺血心肌重構(gòu)的影響及作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

8 田彥;三步序貫法對(duì)激素依賴型哮喘患者及激素撤減過(guò)程中氣道重塑模型大鼠TGF-β_1/Smad信號(hào)通路的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 計(jì)磊;突變體p53與生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子β信號(hào)在肺癌發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中的作用[D];華東師范大學(xué);2015年

10 牛立慢;TGF-β1/Smad3在四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及其作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林琳;SnoN蛋白在RPE細(xì)胞TGF-β/Smad信號(hào)通路中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 丁雪峰;芪藶強(qiáng)心提取物阻斷Smad3信號(hào)通路抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李祥亭;N-乙酰半胱氨酸對(duì)大鼠肺纖維化模型肺組織Smad家族基因表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 李鑫靜;Smad4、Kindlin-2和Anxa2基因在胃癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 汪呈;靶向Smurf1 HECT結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑的細(xì)胞學(xué)水平驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

6 田茜華;補(bǔ)腎法、疏肝法對(duì)體外培養(yǎng)IVF-ET患者卵巢顆粒細(xì)胞中ACTA及其Smads信號(hào)通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李春杰;新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表達(dá)及羅格列酮的干預(yù)作用[D];蘇州大學(xué);2015年

8 孫景英;CXCL9和Smad3的表達(dá)與新疆維吾爾族銀屑病發(fā)病關(guān)系的研究[D];石河子大學(xué);2015年

9 黃海平;MiR-145通過(guò)靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[D];蘇州大學(xué);2015年

10 劉昌偉;Smad2通過(guò)抑制TGF-β1/Smad3介導(dǎo)的膠原合成在肝纖維化中起保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2110425