本文選題：乳腺癌 + 著絲粒蛋白��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：背景:著絲粒蛋白-U(centromere protein U,CENP-U),作為重要的常駐性著絲粒結(jié)合蛋白之一,是動粒內(nèi)層組成CCAN網(wǎng)絡(luò)(constitutively centromere-associated network,CCAN)的重要原件之一,參與中期成熟動粒的組裝,在細(xì)胞有絲分裂的過程中發(fā)揮了重要的作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)CENP-U表達(dá)情況與惡性腫瘤密切相關(guān)。本課題組擬通過體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)及臨床病例資料研究闡明CENP-U在乳腺癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移中的作用和機(jī)制,豐富現(xiàn)有CENP-U基因功能的認(rèn)識,為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的研究提供新的靶點(diǎn)。方法:1.利用免疫組化的方法分別檢測乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌、乳腺癌及其配對癌旁組織中CENP-U蛋白的差異表達(dá)情況,同時比較轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組患者間CENP-U不同表達(dá)情況;并進(jìn)行CENP-U與浸潤性導(dǎo)管癌患者預(yù)后的相關(guān)性分析。2.利用Western-blotting實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測正常乳腺上皮細(xì)胞及人乳腺癌細(xì)胞系中CENP-U蛋白的表達(dá)情況。3.構(gòu)建沉默/過表達(dá)CENP-U穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,繪制細(xì)胞的生長曲線,采用平板克隆、軟瓊脂克隆、免疫熒光等實(shí)驗(yàn),觀察沉默/過表達(dá)CENP-U表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞和正常乳腺細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響。4.利用流式細(xì)胞術(shù),檢測沉默/過表達(dá)CENP-U表達(dá)對細(xì)胞周期的影響,并檢測凋亡細(xì)胞的比例;并利用Western-blotting實(shí)驗(yàn)檢測其PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白活性,以了解CENP-U對乳腺癌增殖能力的調(diào)節(jié)機(jī)制。5.構(gòu)建沉默/過表達(dá)CENP-U細(xì)胞的體內(nèi)移植瘤模型,檢測改變CENP-U表達(dá)后對乳腺癌體內(nèi)的生物學(xué)行為的影響。6.采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn),檢測沉默/過表達(dá)CENP-U表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響;利用Western-blotting實(shí)驗(yàn)檢測沉默/過表達(dá)CENP-U表達(dá)對EMT標(biāo)志物表達(dá)的影響。7.利用Western-blotting實(shí)驗(yàn)檢測乳腺癌非干細(xì)胞及干細(xì)胞中CENP-U的表達(dá)情況;利用流式細(xì)胞術(shù)檢測CENP-U沉默/過表達(dá)細(xì)胞中ALDHhigh的比例。結(jié)果:1.通過對30例導(dǎo)管內(nèi)癌及100例浸潤性導(dǎo)管癌患者的組織進(jìn)行CENP-U蛋白的免疫組化檢測,發(fā)現(xiàn):相較于癌旁組織,CENP-U蛋白在乳腺癌處于過表達(dá)的狀態(tài);轉(zhuǎn)移組患者的CENP-U蛋白的陽性率也顯著高于未轉(zhuǎn)移組。在生存分析中發(fā)現(xiàn):CENP-U蛋白表達(dá)陰性的浸潤性導(dǎo)管癌患者的DFS和OS均顯著優(yōu)于CENP-U陽性的患者。2.細(xì)胞系中MCF-10A中CENP-U蛋白表達(dá)最低,MDA-MB-231表達(dá)最高,且在耐藥細(xì)胞系中其蛋白表達(dá)量顯著增加。3.沉默CENP-U對乳腺癌增殖能力的影響:繪制細(xì)胞的生長曲線發(fā)現(xiàn),相較于sh-Control細(xì)胞,sh CENP-U細(xì)胞的生長能力受到了顯著的抑制;且sh CENP-U的克隆形成能力顯著下降。流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)sh CENP-U細(xì)胞發(fā)生凋亡的比例和處于G2/M期的比例均顯著增加;sh-CENP-U細(xì)胞的PI3K-p110α亞基、S6、NF-κB p65亞基的表達(dá)均下調(diào),且AKT Ser473及S6 Ser235/236位點(diǎn)的磷酸化蛋白也顯著下降。4.過表達(dá)CENP-U對乳腺癌及正常乳腺上皮細(xì)胞增殖能力的影響:無論是在T47D還是MCF-10A,p CDH-CENP-U細(xì)胞增殖和克隆形成能力均強(qiáng)于p CDH-Control細(xì)胞;且p CDH-CENP-U細(xì)胞中G2/M期比例顯著增加,且PI3K-p110α亞基、NF-κB p65亞基的表達(dá)均上調(diào),且AKT Ser473及S6Ser235/236位點(diǎn)的磷酸化蛋白顯著上調(diào)。5.構(gòu)建裸鼠移植瘤模型,對體內(nèi)移植瘤體積進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn):MDA-MB-231-sh CENP-U細(xì)胞的體內(nèi)移植瘤顯著小于對照組;而T47D-CENP-U細(xì)胞的移植瘤增長迅速。6.劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)顯示,相較于231-sh Control細(xì)胞,231-sh CENP-U細(xì)胞的遷移和侵襲能力下降,E-cadherin和β-catenin表達(dá)上調(diào),Vimentin和N-cadherin表達(dá)下調(diào);而T47D-CENP-U的遷移侵襲能力較其對照組顯著增強(qiáng),間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)上調(diào),上皮標(biāo)志物表達(dá)下調(diào)。7.相較于其對應(yīng)的非干細(xì)胞群,乳腺癌干細(xì)胞中CENP-U表達(dá)均顯著下降。利用干細(xì)胞分子標(biāo)志物ALDH,檢測了CENP-U過表達(dá)或沉默細(xì)胞系中乳腺癌ALDHhigh的比例,發(fā)現(xiàn)ALDHhigh細(xì)胞比例不受CENP-U表達(dá)情況影響。結(jié)論:1.臨床數(shù)據(jù)顯示:CENP-U蛋白表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān),且CENP-U蛋白表達(dá)有可能作為預(yù)測乳腺癌患者的預(yù)后指標(biāo)。2.CENP-U在乳腺癌中可能發(fā)揮著促癌基因的作用,影響乳腺癌體內(nèi)、體外的生長增殖能力。CENP-U可調(diào)控細(xì)胞周期、抑制凋亡、改變?nèi)橄侔┑腜I3K/AKT/NF-κB信號通路活性,以調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的生長增殖。3.過表達(dá)CENP-U表達(dá)通過誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞EMT表型促進(jìn)其遷移和侵襲能力;沉默CENP-U表達(dá)通過抑制EMT從而影響乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲。4.乳腺癌干細(xì)胞中CENP-U蛋白表達(dá)較低,CENP-U表達(dá)水平的改變對乳腺癌干細(xì)胞無影響。
[Abstract]:The expression of CENP - U protein in breast cancer cells and human breast cancer cells was investigated by Western - blotting . The results showed that the proliferation and invasion ability of CENP - U cells were significantly higher than those in control group .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2107489