本文選題：胰腺癌 + 循環(huán)腫瘤細(xì)胞��； 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：目的：1、分析上皮細(xì)胞粘附分子依賴(lài)法提取循環(huán)腫瘤細(xì)胞對(duì)其分離效率的影響;2、探索利用粒徑依賴(lài)原理制備微流控芯片在胰腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離和富集中的可行性,并建立其有效的評(píng)估體系;3、研究胰腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離檢測(cè)在其診斷和圍手術(shù)期應(yīng)用中的價(jià)值。材料和方法：1、收集文獻(xiàn),利用meta分析方法對(duì)目前胰腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞相關(guān)的研究進(jìn)行分析,對(duì)比上皮細(xì)胞粘附分子依賴(lài)性與非依賴(lài)性方法對(duì)其分離效率等方面的影響;2、制備微流控芯片,收集成年健康志愿者血液制備細(xì)胞系的分散系,對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞分離,利用免疫熒光染色對(duì)分離后的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù);3、收集成年健康志愿者血液制備細(xì)胞系的分散系,分離循環(huán)腫瘤細(xì)胞,利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)其CK19進(jìn)行檢測(cè),獲取其熒光定量時(shí)間,與細(xì)胞個(gè)數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析;4、選取胰腺良性疾病及惡性疾病的患者,對(duì)其循環(huán)腫瘤細(xì)胞CK19進(jìn)行熒光定量分析,比較不同病理類(lèi)型的差異性,利用操作者受試曲線評(píng)估其診斷效能;5、收集手術(shù)前后胰腺癌患者的血樣標(biāo)本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)和分析,評(píng)估其術(shù)前術(shù)后的差異性,以及其與手術(shù)方式、神經(jīng)侵犯程度等指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果：1、引入研究16項(xiàng),其中上皮細(xì)胞粘附分子依賴(lài)性分離方法在胰腺癌患者中的檢出率為29%,非依賴(lài)法為68%,兩亞組之間存在顯著性差異,卡方=12.68,P=0.0004;2、成功制備微流控芯片,并成功進(jìn)行Capan-1細(xì)胞系、panc-1細(xì)胞系的分選;3、利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)其CK19進(jìn)行檢測(cè)可較好評(píng)估所分選細(xì)胞的個(gè)數(shù),與置入細(xì)胞總數(shù)之間呈顯著相關(guān);4、良性疾病與惡性疾病之間CK19熒光定量時(shí)間存在顯著性差異(240.11±189.70分鐘Vs 39.82±8.06分鐘,t=3.165,P=0.013),在對(duì)胰腺疾病的診斷中有一定意義;5、胰腺癌手術(shù)前后其CK19熒光定量時(shí)間存在顯著性差異(39.47±6.74分鐘Vs 51.15±11.44分鐘,t=-5.781,P0.001),無(wú)法行根治性手術(shù)的患者CK19熒光定量時(shí)間顯著縮短(31±6.08分鐘vs41.06±5.698分鐘,t=-2.784,P=0.013)。結(jié)論：1、利用上皮細(xì)胞粘附分子依賴(lài)的方法提取循環(huán)腫瘤細(xì)胞可導(dǎo)致陽(yáng)性率下降；2、采用粒徑依賴(lài)性的微流控芯片可以實(shí)現(xiàn)對(duì)胰腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞的無(wú)標(biāo)記篩選,利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)CK19的熒光定量時(shí)間,可用于評(píng)估胰腺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞分選的數(shù)目；2、胰腺良性和惡性腫瘤患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞的CK19熒光定量時(shí)間存在顯著性差異,在其病變性質(zhì)的診斷中有一定價(jià)值,胰腺癌手術(shù)前后循環(huán)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)顯著性差異,CK19熒光定量時(shí)間在反應(yīng)患者的手術(shù)可行性具有一定價(jià)值。
[Abstract]:Objective to analyze the effect of epithelial cell adhesion molecular dependent extraction on the isolation efficiency of circulating tumor cells and to explore the feasibility of microfluidic microarray preparation based on particle size dependence in the isolation and enrichment of pancreatic cancer circulating tumor cells. An effective evaluation system was established to study the value of tumor cell separation and detection in the diagnosis and perioperative period of pancreatic cancer. Materials and methods: 1. Collect the literature and use meta analysis method to analyze the current pancreatic cancer circulating tumor cell related research. To compare the effects of epithelial cell adhesion molecular dependent and independent methods on the separation efficiency, microfluidic microarray was prepared. The blood of adult healthy volunteers was collected to prepare the cell line dispersion lines, and the cell lines were separated. The isolated cells were counted by immunofluorescence staining. The blood of adult healthy volunteers was collected to prepare the disperse cell lines. The circulating tumor cells were isolated, and their CK19 was detected by isothermal amplification technique. The fluorescence quantitative time was obtained, and the correlation between the number of cells and the number of cells was analyzed. The patients with benign and malignant diseases of pancreas were selected and the circulating tumor cells CK19 were analyzed by fluorescence quantitative analysis, and the differences of different pathological types were compared. The diagnostic efficacy was evaluated by the operator test curve. Blood samples of patients with pancreatic cancer were collected before and after operation to detect and analyze circulating tumor cells, and to evaluate the difference between them before and after operation. The correlation of nerve invasion degree and other indexes. Results among the 16 studies, the detection rate of epithelial cell adhesion molecule dependent separation method was 29% and 68%, respectively. There was significant difference between the two subgroups. The microfluidic chip was successfully prepared. And successfully carried out the separation of Capan-1 cell line panc-1 cell line. The number of the selected cells can be estimated better by the detection of CK19 by ring mediated isothermal amplification. There was a significant correlation between CK19 and the total number of implanted cells. There was a significant difference in the fluorescent time of CK19 between benign and malignant diseases (240.11 鹵189.70 minutes vs 39.82 鹵8.06 minutes), which had a certain significance in the diagnosis of pancreatic diseases. The fluorescence quantitative time of CK19 was significantly different (39.47 鹵6.74 minutes vs 51.15 鹵11.44 minutes vs 5.781g / P0.001), and that of the patients who could not undergo radical operation was significantly shortened (31 鹵6.08 minutes vs41.06 鹵5.698 minutes, n = 2.784 min, P 0.013), and the time of CK19 fluorescence quantification was significantly shorter in the patients who could not undergo radical surgery (39.47 鹵6.74 minutes vs 51.15 鹵11.44 minutes vs 5.781g / P0.001). Conclusion the positive rate of circulating tumor cells can be decreased by using the method of epithelial cell adhesion molecule dependent extraction. The particle size dependent microfluidic chip can be used to screen circulating pancreatic cancer cells without markers. The fluorescent quantitative time of CK19 was detected by using cyclized isothermal amplification technique, which can be used to evaluate the number of circulating tumor cells in patients with pancreatic cancer. 2. The fluorescent quantitative time of CK19 in circulating tumor cells was significantly different between benign and malignant tumors of pancreas, and had a certain value in the diagnosis of the nature of the disease. Significant difference of circulating tumor cells before and after pancreatic cancer operation. The fluorescent quantitative time of CK19 has some value in the feasibility of operation in patients with pancreatic cancer.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.9

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本文編號(hào)：2089260