本文選題：FOXC2 + 卵巢腫瘤　； 參考：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：卵巢腫瘤是婦科常見的腫瘤。卵巢癌的死亡率居婦科惡性腫瘤的首位,對婦女生命造成嚴重威脅。由于卵巢的組織學(xué)特點,卵巢腫瘤分類繁多,早期癥狀缺乏,至早期診斷異常困難。正常的卵巢組織學(xué)成分復(fù)雜,具有增殖活躍特性。目前已有多項研究支持成年哺乳動物卵巢中含有生殖干細胞(GSC)。卵巢細胞增殖活躍可能與哺乳動物的卵巢中存在的生殖干細胞(GSC)有關(guān)。腫瘤細胞的生物學(xué)行為如無限增殖、多向分化等與胚胎干細胞相似,推測腫瘤的本質(zhì)有“返祖現(xiàn)象”。那么腫瘤細胞的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程應(yīng)當(dāng)存在著與胚胎發(fā)育過程共同的調(diào)控機制。調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的某些因子可能也是促進腫瘤發(fā)生的影響因素。FOXC2是與早期胚胎多種組織分化、構(gòu)型有關(guān)的胚胎性轉(zhuǎn)錄因子,與血管和淋巴管的發(fā)生有關(guān)。出生后FOXC2基因停止表達。近年發(fā)現(xiàn)FOXC2還與宮頸癌、內(nèi)膜癌等婦科腫瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌和黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),更與腫瘤血管和淋巴管的發(fā)生有關(guān)。亦有報道指出FOXC2在腫瘤干細胞的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。VEGF也是新血管生成的關(guān)鍵分子,與腫瘤生長、侵襲性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。VEGF通過誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)的微小血管內(nèi)皮細胞中Bcl 2基因的表達,促進內(nèi)皮細胞遷移、分化和血管滲透,進而誘導(dǎo)細胞增殖和瘤內(nèi)新血管形成。VEGF與內(nèi)皮細胞膜上的VEGFR2結(jié)合后,通過PI3K-Akt信號通路激活Bcl 2,不僅促進癌細胞存活,還促進血管生成的效應(yīng)因子趨化因子(CXCL8,IL-8)增加,同時IL-8也作為VEGF信號途徑的下游效應(yīng)因子有強有力的促血管生成作用,使病灶內(nèi)血管加速形成,加速這些部位細胞生長。FOXC2是否在卵巢腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用、FOXC2在類型繁多復(fù)雜的卵巢腫瘤組織表達狀況如何,均未見明確報道。如果FOXC2在卵巢腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展過程中有作用,FOXC2對哪些種類卵巢腫瘤起作用;由于IL8與VEGF在血管生成過程的有著必然聯(lián)系,FOXC2是否也是通過VEGF—IL8信號途徑在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、新生微血管等過程中發(fā)揮作用。本實驗對不同種類的卵巢腫瘤組織中的FOXC2蛋白的表達及分布進行了研究,探討了FOXC2是否在卵巢腫瘤以及哪些種類腫瘤中發(fā)揮作用;探討了FOXC2在腫瘤增殖與侵襲力、脈管形成上的作用和作用機制,對解明卵巢癌發(fā)生過程、預(yù)防卵巢癌淋巴轉(zhuǎn)移及發(fā)現(xiàn)新的腫瘤診治方法有非常重要的意義。目的:探討FOXC2是否在卵巢腫瘤以及哪些類腫瘤中表達,FOXC2的表達對卵巢癌細胞的生物學(xué)行為有何影響以及作用機制,為解明卵巢癌發(fā)生機制、改善卵巢癌的預(yù)后及發(fā)現(xiàn)新的腫瘤診治方法提供理論基礎(chǔ)。方法:利用免疫組織化學(xué)方法對收集到的卵巢上皮性腫瘤、卵巢生殖細胞腫瘤和卵巢性索-間質(zhì)細胞腫瘤3大類卵巢腫瘤組織中的FOXC2蛋白的表達及分布進行了調(diào)查,探討FOXC2在各類卵巢腫瘤組織中的表達狀況;利用FOXC2 sh RNA技術(shù)沉默人卵巢上皮性囊腺癌SKOV-3細胞的FOXC2基因表達,CCK-8法檢測卵巢癌細胞的增殖能力、劃痕實驗檢測遷移能力、細胞克隆實驗檢測細胞成瘤能力和侵襲實驗檢測腫瘤細胞的侵襲性,以及實時定量PCR和間接免疫熒光染色的方法檢測分析SKOV-3細胞中FOXC2與VEGF和IL8信號傳遞關(guān)系。結(jié)果:1.人卵巢腫瘤組織FOXC2的表達狀況(1)FOXC2在上皮性卵巢腫瘤表達上皮性卵巢腫瘤,FOXC2表達陽性率為88.13%(52/59)。漿液性腫瘤FOXC2表達陽性率低于粘液性腫瘤。在卵巢漿液性囊腺瘤,僅部分生發(fā)上皮細胞的細胞質(zhì)發(fā)現(xiàn)低強度的FOXC2表達。在卵巢交界性漿液性囊腺瘤細胞FOXC2呈低中強度表達;CD31標(biāo)記的微小血管內(nèi)皮細胞質(zhì)中FOXC2和VEGF強表達。在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組織,從IC期到IIIC期,癌細胞FOXC2呈從弱到強的表達;在微小血管壁內(nèi)皮細胞呈強表達。在FOXC2表達的同時,卵巢漿液性囊腺癌細胞也表達VEGF。在卵巢粘液性囊腺瘤,FOXC2表達在卵巢粘液性囊腺瘤的粘液上皮細胞質(zhì)以及上皮下的間質(zhì)組織細胞質(zhì);在交界性粘液性囊腺瘤,間質(zhì)中血管上皮細胞細胞質(zhì)和細胞核均有FOXC2表達。在粘液性囊腺癌,FOXC2主要表達在癌灶間質(zhì)部癌細胞的細胞核和細胞漿及間質(zhì)的微小血管壁細胞質(zhì)。在卵巢勃勒納瘤組織,沒有FOXC2表達。在卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞質(zhì)和間質(zhì)微小血管壁細胞,FOXC2呈強表達。在間質(zhì)中有散在間質(zhì)細胞核FOXC2呈強表達。(2)FOXC2在生殖細胞腫瘤的表達生殖細胞腫瘤FOXC2表達陽性率為40.00%(2/5)。在卵巢成熟性囊性畸胎瘤沒有呈現(xiàn)FOXC2表達。在伴體細胞惡變的卵巢成熟性囊性畸胎瘤鱗癌病灶,間質(zhì)細胞呈散在的細胞核FOXC2強表達。在III級卵巢未成熟性畸胎瘤的生發(fā)上皮有低強度的FOXC2表達。在卵巢甲狀腺腫和卵巢混合性生殖細胞腫瘤(卵黃囊瘤+成熟性囊性畸胎瘤)組織沒有發(fā)現(xiàn)FOXC2表達。(3)FOXC2在性索-間質(zhì)腫瘤的表達性索-間質(zhì)腫瘤,FOXC2表達陽性率為60.00%(3/5)。在高分化卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤的SERTOLI細胞沒有FOXC2表達,而LEYDIG細胞核FOXC2強表達。在卵巢環(huán)狀小管性索瘤(SCTAT)細胞質(zhì)FOXC2強表達。在卵巢成年型顆粒細胞瘤,散在的有分裂相的細胞核FOXC2強表達。在卵巢卵泡膜纖維瘤,沒有發(fā)現(xiàn)FOXC2表達。2.FOXC2 sh RNA對SKOV-3細胞生物學(xué)行為的影響(1)人卵巢癌細胞SKOV-3經(jīng)瞬時轉(zhuǎn)染FOXC2 sh RNA 24h時及以后,CCK8方法檢測結(jié)果顯示,FOXC2sh RNA組細胞數(shù)量較未轉(zhuǎn)質(zhì)粒組和sh NC組顯著地減少,P㩳0.01。(2)采用劃痕實驗檢測SKOV-3細胞遷移率,結(jié)果顯示,經(jīng)72h培養(yǎng)時,未轉(zhuǎn)質(zhì)粒組細胞的快速遷移使劃痕消失;sh NC組劃痕兩側(cè)細胞的較快生長,使劃痕變得細窄,邊緣不清;而FOXC2 sh RNA組劃痕仍較寬,邊緣清晰。(3)將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞以300個/孔或以600個/孔的細胞濃度接種于6孔板培養(yǎng)14天后染色觀察,結(jié)果顯示,300個/孔的sh NC組細胞成瘤率為87.6%,600個/孔的成瘤率為90.5%均顯著高于FOXC2 sh RNA組300個/孔25.3%的成瘤率,600個/孔24.7%的成瘤率。(4)將轉(zhuǎn)染FOXC2 sh RNA和sh NC的細胞于transwell小室37℃5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染sh NC組的侵襲細胞數(shù)目明顯高于FOXC2sh RNA組。定量分析結(jié)果顯示,每個視野轉(zhuǎn)染sh NC組的侵襲細胞數(shù)目為(96.8±16.84),FOXC2 sh RNA組的侵襲細胞數(shù)目為(27.4±9.34),兩者比較,t=8.057,P0.001。3.si RNA靶向干擾FOXC2基因?qū)θ寺殉舶┘毎鸙EGF和IL8影響(1)在卵巢上皮性漿液性腺癌中FOXC2主要表達在腺癌細胞胞質(zhì)及周圍間質(zhì)血管內(nèi)皮細胞中;VEGF不僅表達在間質(zhì)中血管內(nèi)皮細胞中,在卵巢漿液性囊腺癌癌灶中的癌細胞FOXC2高表達的區(qū)域,VEGF的表達強度同時也非常高。(2)FOXC2 sh RNA瞬時轉(zhuǎn)染人卵巢上皮性囊腺癌細胞系SKOV-3細胞,FOXC2 sh RNA組FOXC2 m RNA水平較sh NC組下降了80.1%,差別顯著(P0.01);同時VEGF m RNA水平也較sh NC組下降77.8%,差別顯著(P0.01);但是,IL8 m RNA的表達水平,兩組比較沒有變化(P0.05)。(3)間接免疫熒光染色顯示,FOXC2 sh RNA組中FOXC2熒光強度弱于sh NC組,FOXC2 sh RNA組中的VEGF熒光強度也弱于sh NC組;FOXC2 sh RNA組FOXC2表達強度和VEGF的表達強度均較sh NC組顯著減少(P0.01)。(4)FOXC2 sh RNA和sh NC轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV-3細胞后,FOXC2 sh RNA組IL8表達強度與sh NC組相比沒有明顯變化(P0.05)。結(jié)論:1.FOXC2在上皮性卵巢腫瘤呈高表達率。粘液性高于漿液性卵巢腫瘤。FOXC2在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌中的表達隨著臨床分期由IC向IIIC期明顯增強。FOXC2在卵巢粘液性囊腺癌的表達強度明顯高于漿液性囊腺癌。2.FOXC2在卵巢漿液性囊腺癌細胞和囊腺癌病灶新生的微血管中與VEGF同時有表達,表明VEGF與FOXC2可能存在著某種必然的聯(lián)系,FOXC2可能參與卵巢腫瘤組織血管的形成。3.在人卵巢癌細胞SKOV-3有FOXC2表達。sh FOXC2靶向沉默SKOV-3細胞FOXC2基因后,FOXC2 m RNA和蛋白表達量均明顯下降;可降低SKOV-3細胞的體外增殖能力、遷移能力、成瘤能力和侵襲能力。4.靶向沉默F(xiàn)OXC2基因使SKOV-3細胞中VEGF表達量下降,但不影響IL8的表達。FOXC2可能是VEGF的上游基因,對人卵巢癌SKOV-3細胞的作用可能是促進腫瘤細胞存活、增殖和具有侵襲力。FOXC2可能在卵巢腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:鍗靛發(fā)鑲跨槫鏄縐戝父瑙佺殑鑲跨槫.鍗靛發(fā)鐧岀殑姝諱骸鐜囧眳濡囩鎭舵，

本文編號：2089085