本文選題：FOXC2 + 卵巢腫瘤��； 參考：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：卵巢腫瘤是婦科常見(jiàn)的腫瘤。卵巢癌的死亡率居?jì)D科惡性腫瘤的首位,對(duì)婦女生命造成嚴(yán)重威脅。由于卵巢的組織學(xué)特點(diǎn),卵巢腫瘤分類(lèi)繁多,早期癥狀缺乏,至早期診斷異常困難。正常的卵巢組織學(xué)成分復(fù)雜,具有增殖活躍特性。目前已有多項(xiàng)研究支持成年哺乳動(dòng)物卵巢中含有生殖干細(xì)胞(GSC)。卵巢細(xì)胞增殖活躍可能與哺乳動(dòng)物的卵巢中存在的生殖干細(xì)胞(GSC)有關(guān)。腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為如無(wú)限增殖、多向分化等與胚胎干細(xì)胞相似,推測(cè)腫瘤的本質(zhì)有“返祖現(xiàn)象”。那么腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過(guò)程應(yīng)當(dāng)存在著與胚胎發(fā)育過(guò)程共同的調(diào)控機(jī)制。調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的某些因子可能也是促進(jìn)腫瘤發(fā)生的影響因素。FOXC2是與早期胚胎多種組織分化、構(gòu)型有關(guān)的胚胎性轉(zhuǎn)錄因子,與血管和淋巴管的發(fā)生有關(guān)。出生后FOXC2基因停止表達(dá)。近年發(fā)現(xiàn)FOXC2還與宮頸癌、內(nèi)膜癌等婦科腫瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌和黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),更與腫瘤血管和淋巴管的發(fā)生有關(guān)。亦有報(bào)道指出FOXC2在腫瘤干細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。VEGF也是新血管生成的關(guān)鍵分子,與腫瘤生長(zhǎng)、侵襲性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。VEGF通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)的微小血管內(nèi)皮細(xì)胞中Bcl 2基因的表達(dá),促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、分化和血管滲透,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和瘤內(nèi)新血管形成。VEGF與內(nèi)皮細(xì)胞膜上的VEGFR2結(jié)合后,通過(guò)PI3K-Akt信號(hào)通路激活Bcl 2,不僅促進(jìn)癌細(xì)胞存活,還促進(jìn)血管生成的效應(yīng)因子趨化因子(CXCL8,IL-8)增加,同時(shí)IL-8也作為VEGF信號(hào)途徑的下游效應(yīng)因子有強(qiáng)有力的促血管生成作用,使病灶內(nèi)血管加速形成,加速這些部位細(xì)胞生長(zhǎng)。FOXC2是否在卵巢腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮作用、FOXC2在類(lèi)型繁多復(fù)雜的卵巢腫瘤組織表達(dá)狀況如何,均未見(jiàn)明確報(bào)道。如果FOXC2在卵巢腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有作用,FOXC2對(duì)哪些種類(lèi)卵巢腫瘤起作用;由于IL8與VEGF在血管生成過(guò)程的有著必然聯(lián)系,FOXC2是否也是通過(guò)VEGF—IL8信號(hào)途徑在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、新生微血管等過(guò)程中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同種類(lèi)的卵巢腫瘤組織中的FOXC2蛋白的表達(dá)及分布進(jìn)行了研究,探討了FOXC2是否在卵巢腫瘤以及哪些種類(lèi)腫瘤中發(fā)揮作用;探討了FOXC2在腫瘤增殖與侵襲力、脈管形成上的作用和作用機(jī)制,對(duì)解明卵巢癌發(fā)生過(guò)程、預(yù)防卵巢癌淋巴轉(zhuǎn)移及發(fā)現(xiàn)新的腫瘤診治方法有非常重要的意義。目的:探討FOXC2是否在卵巢腫瘤以及哪些類(lèi)腫瘤中表達(dá),FOXC2的表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)行為有何影響以及作用機(jī)制,為解明卵巢癌發(fā)生機(jī)制、改善卵巢癌的預(yù)后及發(fā)現(xiàn)新的腫瘤診治方法提供理論基礎(chǔ)。方法:利用免疫組織化學(xué)方法對(duì)收集到的卵巢上皮性腫瘤、卵巢生殖細(xì)胞腫瘤和卵巢性索-間質(zhì)細(xì)胞腫瘤3大類(lèi)卵巢腫瘤組織中的FOXC2蛋白的表達(dá)及分布進(jìn)行了調(diào)查,探討FOXC2在各類(lèi)卵巢腫瘤組織中的表達(dá)狀況;利用FOXC2 sh RNA技術(shù)沉默人卵巢上皮性囊腺癌SKOV-3細(xì)胞的FOXC2基因表達(dá),CCK-8法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞的增殖能力、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移能力、細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞成瘤能力和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的侵襲性,以及實(shí)時(shí)定量PCR和間接免疫熒光染色的方法檢測(cè)分析SKOV-3細(xì)胞中FOXC2與VEGF和IL8信號(hào)傳遞關(guān)系。結(jié)果:1.人卵巢腫瘤組織FOXC2的表達(dá)狀況(1)FOXC2在上皮性卵巢腫瘤表達(dá)上皮性卵巢腫瘤,FOXC2表達(dá)陽(yáng)性率為88.13%(52/59)。漿液性腫瘤FOXC2表達(dá)陽(yáng)性率低于粘液性腫瘤。在卵巢漿液性囊腺瘤,僅部分生發(fā)上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)發(fā)現(xiàn)低強(qiáng)度的FOXC2表達(dá)。在卵巢交界性漿液性囊腺瘤細(xì)胞FOXC2呈低中強(qiáng)度表達(dá);CD31標(biāo)記的微小血管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)中FOXC2和VEGF強(qiáng)表達(dá)。在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組織,從IC期到IIIC期,癌細(xì)胞FOXC2呈從弱到強(qiáng)的表達(dá);在微小血管壁內(nèi)皮細(xì)胞呈強(qiáng)表達(dá)。在FOXC2表達(dá)的同時(shí),卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞也表達(dá)VEGF。在卵巢粘液性囊腺瘤,FOXC2表達(dá)在卵巢粘液性囊腺瘤的粘液上皮細(xì)胞質(zhì)以及上皮下的間質(zhì)組織細(xì)胞質(zhì);在交界性粘液性囊腺瘤,間質(zhì)中血管上皮細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均有FOXC2表達(dá)。在粘液性囊腺癌,FOXC2主要表達(dá)在癌灶間質(zhì)部癌細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞漿及間質(zhì)的微小血管壁細(xì)胞質(zhì)。在卵巢勃勒納瘤組織,沒(méi)有FOXC2表達(dá)。在卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌細(xì)胞質(zhì)和間質(zhì)微小血管壁細(xì)胞,FOXC2呈強(qiáng)表達(dá)。在間質(zhì)中有散在間質(zhì)細(xì)胞核FOXC2呈強(qiáng)表達(dá)。(2)FOXC2在生殖細(xì)胞腫瘤的表達(dá)生殖細(xì)胞腫瘤FOXC2表達(dá)陽(yáng)性率為40.00%(2/5)。在卵巢成熟性囊性畸胎瘤沒(méi)有呈現(xiàn)FOXC2表達(dá)。在伴體細(xì)胞惡變的卵巢成熟性囊性畸胎瘤鱗癌病灶,間質(zhì)細(xì)胞呈散在的細(xì)胞核FOXC2強(qiáng)表達(dá)。在III級(jí)卵巢未成熟性畸胎瘤的生發(fā)上皮有低強(qiáng)度的FOXC2表達(dá)。在卵巢甲狀腺腫和卵巢混合性生殖細(xì)胞腫瘤(卵黃囊瘤+成熟性囊性畸胎瘤)組織沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FOXC2表達(dá)。(3)FOXC2在性索-間質(zhì)腫瘤的表達(dá)性索-間質(zhì)腫瘤,FOXC2表達(dá)陽(yáng)性率為60.00%(3/5)。在高分化卵巢支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤的SERTOLI細(xì)胞沒(méi)有FOXC2表達(dá),而LEYDIG細(xì)胞核FOXC2強(qiáng)表達(dá)。在卵巢環(huán)狀小管性索瘤(SCTAT)細(xì)胞質(zhì)FOXC2強(qiáng)表達(dá)。在卵巢成年型顆粒細(xì)胞瘤,散在的有分裂相的細(xì)胞核FOXC2強(qiáng)表達(dá)。在卵巢卵泡膜纖維瘤,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FOXC2表達(dá)。2.FOXC2 sh RNA對(duì)SKOV-3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響(1)人卵巢癌細(xì)胞SKOV-3經(jīng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染FOXC2 sh RNA 24h時(shí)及以后,CCK8方法檢測(cè)結(jié)果顯示,FOXC2sh RNA組細(xì)胞數(shù)量較未轉(zhuǎn)質(zhì)粒組和sh NC組顯著地減少,P㩳0.01。(2)采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SKOV-3細(xì)胞遷移率,結(jié)果顯示,經(jīng)72h培養(yǎng)時(shí),未轉(zhuǎn)質(zhì)粒組細(xì)胞的快速遷移使劃痕消失;sh NC組劃痕兩側(cè)細(xì)胞的較快生長(zhǎng),使劃痕變得細(xì)窄,邊緣不清;而FOXC2 sh RNA組劃痕仍較寬,邊緣清晰。(3)將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞以300個(gè)/孔或以600個(gè)/孔的細(xì)胞濃度接種于6孔板培養(yǎng)14天后染色觀察,結(jié)果顯示,300個(gè)/孔的sh NC組細(xì)胞成瘤率為87.6%,600個(gè)/孔的成瘤率為90.5%均顯著高于FOXC2 sh RNA組300個(gè)/孔25.3%的成瘤率,600個(gè)/孔24.7%的成瘤率。(4)將轉(zhuǎn)染FOXC2 sh RNA和sh NC的細(xì)胞于transwell小室37℃5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染sh NC組的侵襲細(xì)胞數(shù)目明顯高于FOXC2sh RNA組。定量分析結(jié)果顯示,每個(gè)視野轉(zhuǎn)染sh NC組的侵襲細(xì)胞數(shù)目為(96.8±16.84),FOXC2 sh RNA組的侵襲細(xì)胞數(shù)目為(27.4±9.34),兩者比較,t=8.057,P0.001。3.si RNA靶向干擾FOXC2基因?qū)θ寺殉舶┘?xì)胞VEGF和IL8影響(1)在卵巢上皮性漿液性腺癌中FOXC2主要表達(dá)在腺癌細(xì)胞胞質(zhì)及周?chē)g質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中;VEGF不僅表達(dá)在間質(zhì)中血管內(nèi)皮細(xì)胞中,在卵巢漿液性囊腺癌癌灶中的癌細(xì)胞FOXC2高表達(dá)的區(qū)域,VEGF的表達(dá)強(qiáng)度同時(shí)也非常高。(2)FOXC2 sh RNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人卵巢上皮性囊腺癌細(xì)胞系SKOV-3細(xì)胞,FOXC2 sh RNA組FOXC2 m RNA水平較sh NC組下降了80.1%,差別顯著(P0.01);同時(shí)VEGF m RNA水平也較sh NC組下降77.8%,差別顯著(P0.01);但是,IL8 m RNA的表達(dá)水平,兩組比較沒(méi)有變化(P0.05)。(3)間接免疫熒光染色顯示,FOXC2 sh RNA組中FOXC2熒光強(qiáng)度弱于sh NC組,FOXC2 sh RNA組中的VEGF熒光強(qiáng)度也弱于sh NC組;FOXC2 sh RNA組FOXC2表達(dá)強(qiáng)度和VEGF的表達(dá)強(qiáng)度均較sh NC組顯著減少(P0.01)。(4)FOXC2 sh RNA和sh NC轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞后,FOXC2 sh RNA組IL8表達(dá)強(qiáng)度與sh NC組相比沒(méi)有明顯變化(P0.05)。結(jié)論:1.FOXC2在上皮性卵巢腫瘤呈高表達(dá)率。粘液性高于漿液性卵巢腫瘤。FOXC2在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌中的表達(dá)隨著臨床分期由IC向IIIC期明顯增強(qiáng)。FOXC2在卵巢粘液性囊腺癌的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于漿液性囊腺癌。2.FOXC2在卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞和囊腺癌病灶新生的微血管中與VEGF同時(shí)有表達(dá),表明VEGF與FOXC2可能存在著某種必然的聯(lián)系,FOXC2可能參與卵巢腫瘤組織血管的形成。3.在人卵巢癌細(xì)胞SKOV-3有FOXC2表達(dá)。sh FOXC2靶向沉默SKOV-3細(xì)胞FOXC2基因后,FOXC2 m RNA和蛋白表達(dá)量均明顯下降;可降低SKOV-3細(xì)胞的體外增殖能力、遷移能力、成瘤能力和侵襲能力。4.靶向沉默F(xiàn)OXC2基因使SKOV-3細(xì)胞中VEGF表達(dá)量下降,但不影響IL8的表達(dá)。FOXC2可能是VEGF的上游基因,對(duì)人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞的作用可能是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活、增殖和具有侵襲力。FOXC2可能在卵巢腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:鍗靛發(fā)鑲跨槫鏄縐戝父瑙佺殑鑲跨槫.鍗靛發(fā)鐧岀殑姝諱骸鐜囧眳濡囩鎭舵，

本文編號(hào)：2089085