本文選題：肝細(xì)胞癌 + BVES　； 參考：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的最近研究發(fā)現(xiàn),正常上皮細(xì)胞通過將活細(xì)胞擠出的方式減輕增殖產(chǎn)生的上皮層擁擠,被擠出的細(xì)胞發(fā)生失巢凋亡。該現(xiàn)象啟發(fā)我們,具備失巢凋亡抵抗的腫瘤細(xì)胞能否通過該方式從原發(fā)灶轉(zhuǎn)移?借鑒國外研究經(jīng)驗(yàn),本項(xiàng)目通過多個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃头椒?研究肝癌轉(zhuǎn)移過程中癌細(xì)胞擠出現(xiàn)象的發(fā)生和作用,并進(jìn)一步研究以BVES為靶點(diǎn)來抑制肝癌細(xì)胞擠出,對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法多種模型和方法觀察肝癌細(xì)胞擠出現(xiàn)象：①將GFP標(biāo)記的肝癌細(xì)胞以1：100的比例與正常L02細(xì)胞混合后接種于培養(yǎng)皿中,當(dāng)細(xì)胞達(dá)到100%融合度時(shí),于顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；②結(jié)合GM130高爾基體染色,以及激光共聚焦掃描三維重建技術(shù),觀察細(xì)胞間力和運(yùn)動方向；③通過自制硅膠膜拉伸模型,提供細(xì)胞瞬時(shí)擁擠環(huán)境,觀察2小時(shí)內(nèi)正常L02肝細(xì)胞及Huh7和SK-Hep1肝癌細(xì)胞擠出數(shù)量；④自創(chuàng)大小皿倒扣模型,將長滿細(xì)胞的小皿倒扣入裝滿培養(yǎng)基的大皿中,觀察大皿中細(xì)胞擠出克隆數(shù)；⑤細(xì)胞三維培養(yǎng)模型結(jié)合激光共聚焦技術(shù)觀察細(xì)胞團(tuán)中細(xì)胞被擠出。qRT-PCR和免疫熒光方法檢測肝癌組織樣本和肝癌細(xì)胞系中BVES表達(dá)和定位,分析其與肝癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系。qRT-PCR和免疫熒光方法檢測被擠出肝癌細(xì)胞中BVES表達(dá)。構(gòu)建針對BVES mRNA的干擾質(zhì)粒和BVES真核表達(dá)質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞和SK-Hep1細(xì)胞,獲得穩(wěn)定細(xì)胞株,Western blot方法檢測干擾和過表達(dá)效率。通過以上研究細(xì)胞擠出的方法檢測BVES表達(dá)改變后肝癌細(xì)胞擠出變化。通過裸鼠人肝癌原位移植瘤模型檢測過表達(dá)BVES對肝癌轉(zhuǎn)移的抑制作用,同時(shí)檢測肝內(nèi)原位瘤周邊細(xì)胞擠出現(xiàn)象。免疫沉淀方法檢測BVES對RhoA活性的調(diào)節(jié)作用,免疫熒光和Western blot檢測BVES對ZO-1表達(dá)和定位的作用,免疫熒光觀察肝癌組織和肝癌細(xì)胞系中BVES、ZO1和GEFT共定位模式,CO-IP方法檢測這三種蛋白共定位,免疫熒光檢測干擾或過表達(dá)BVES后GEFT細(xì)胞定位改變。基因芯片篩選BVES的下游調(diào)節(jié)分子和通路。結(jié)果在100%融合度的培養(yǎng)狀態(tài)下,部分L02肝細(xì)胞被周圍細(xì)胞所包圍,受到“集體攻擊”,且細(xì)胞變圓。同樣,標(biāo)記GFP的Huh7和SK-Hep1細(xì)胞也受到周圍正常的L02細(xì)胞“排擠”。高爾基體GM130特異性染色和激光共聚焦掃描三維重建更直觀地觀察到肝癌細(xì)胞被L02細(xì)胞擠出現(xiàn)象。計(jì)數(shù)硅膠膜拉伸模型中擠出細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞擠出數(shù)明顯多于L02細(xì)胞,且高轉(zhuǎn)移的SK-Hep1細(xì)胞多于低轉(zhuǎn)移潛能的Huh7細(xì)胞。大小皿倒扣模型中,大皿中擠出的細(xì)胞克隆數(shù)SK-Hep1Huh7LO2,與細(xì)胞侵襲潛能一致,通過GFP熒光標(biāo)記發(fā)現(xiàn),小皿中SK-Hep1細(xì)胞較Huh7更容易被L02細(xì)胞擠出。三維細(xì)胞培養(yǎng)模型中,L02細(xì)胞呈現(xiàn)為邊界清楚的結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu),而在Huh7和SK-Hep-1細(xì)胞形成的細(xì)胞團(tuán)周圍,可見部分細(xì)胞從邊緣脫離,向周圍遷移。在即將脫落的細(xì)胞及其相鄰細(xì)胞間,骨架蛋白F-actin染色明顯增強(qiáng)。在肝癌組織標(biāo)本中我們也發(fā)現(xiàn)了部分肝癌細(xì)胞擠出現(xiàn)象。BVES蛋白表達(dá)于細(xì)胞膜和胞漿,肝癌組織中BVES較癌旁組織明顯減少,BVES表達(dá)與肝癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)移潛能呈負(fù)相關(guān),通過細(xì)胞擠出模型發(fā)現(xiàn),被擠出細(xì)胞其BVES表達(dá)減少。抑制Huh7細(xì)胞BVES表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞擠出,而在SK-Hepl細(xì)胞中過表達(dá)BVES則抑制細(xì)胞擠出。裸鼠人肝癌原位移植瘤模型中過表達(dá)BVES抑制肝癌細(xì)胞肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移,在肝內(nèi)原位瘤邊緣,過表達(dá)BVES的肝癌細(xì)胞擠出明顯減少。深入研究BVES調(diào)控肝癌細(xì)胞擠出機(jī)制,我們發(fā)現(xiàn),BVES與Z01和GEFT共定位,且調(diào)控ZO1的表達(dá)和定位,影響GEFT亞細(xì)胞定位,進(jìn)而抑制RhoA蛋白活性。我們還篩選出部分BVES下游信號分子和通路,對進(jìn)一步的機(jī)制研究提供參考。結(jié)論細(xì)胞擁擠環(huán)境中,肝癌細(xì)胞可被正常肝細(xì)胞或癌細(xì)胞團(tuán)擠出,進(jìn)而發(fā)生轉(zhuǎn)移。BVES可能通過多種途徑和機(jī)制調(diào)節(jié)Rho蛋白活性,調(diào)控肝癌細(xì)胞擠出和轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;《肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的基礎(chǔ)與臨床》出版[J];腫瘤學(xué)雜志;2003年03期

2 王其玲;肝癌≠絕癥[J];今日科技;1998年07期

3 ;肝癌轉(zhuǎn)移有哪些表現(xiàn)？[J];抗癌之窗;2014年04期

4 夏榮龍;肝癌的浸潤、轉(zhuǎn)移分子機(jī)制新進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2001年04期

5 楊艷杰,王福;肝癌侵襲性相關(guān)分子的研究進(jìn)展[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年03期

6 周信達(dá);肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的研究進(jìn)展與展望[J];中華肝臟病雜志;2004年11期

7 湯釗猷;;開展肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)研究的意義與途徑[J];中華普通外科雜志;2006年11期

8 段永強(qiáng);余輝;楊利華;王鋼勝;毛哲玉;;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的初始水平在肝癌外周血轉(zhuǎn)移中的作用[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2007年06期

9 師弘;馮英明;;肝癌轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2007年12期

10 蔡雪軍;;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子及其受體在肝癌轉(zhuǎn)移中的研究進(jìn)展[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2008年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 湯釗猷;;探索肝癌轉(zhuǎn)移干預(yù)新思路(摘要)[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 欽倫秀;葉青海;湯釗猷;;肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的分子機(jī)制與預(yù)測:從組學(xué)研究到臨床應(yīng)用[A];第十三屆中國科協(xié)年會第18分會場-癌癥流行趨勢和防控策略研究研討會論文集（補(bǔ)充）[C];2011年

3 周海軍;欽倫秀;;肝癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)制與分子預(yù)測的研究進(jìn)展和趨勢[A];第十三屆中國科協(xié)年會第18分會場-癌癥流行趨勢和防控策略研究研討會論文集（補(bǔ)充）[C];2011年

4 湯釗猷;;肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)研究的進(jìn)展[A];第八屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

5 楊鐵成;閆曉剛;;14例肝癌自發(fā)(外傷)性破裂手術(shù)治療體會[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

6 欽倫秀;湯釗猷;葉勝龍;劉康達(dá);林芷英;馬曾辰;吳志全;周信達(dá);劉銀坤;關(guān)新元;;肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

7 李雁;湯釗猷;丁士健;田波;談冶雄;夏其昌;王紅陽;葉勝龍;周云峰;;從基因組學(xué)到蛋白組學(xué):肝癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)理的研究及臨床應(yīng)用[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

8 代智;劉銀坤;崔杰峰;馮鉅濤;宋海燕;陳潔;孫瑞霞;李娜;張予;楊們原;;糖組學(xué)方法篩查與分析肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的異常核心巖藻糖基化蛋白質(zhì)[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2005年

9 武金才;陸才德;彭淑牖;戴德堅(jiān);;再切除在肝癌復(fù)發(fā)治療中的作用和地位[A];衢州市自然科學(xué)優(yōu)秀論文選編（2001-2004）[C];2005年

10 欽倫秀;周海君;黃華;史炯;葉青海;賈戶亮;王心偉;湯釗猷;;癌周微環(huán)境炎癥/免疫反應(yīng)狀態(tài)預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 張建琛;肝癌專家創(chuàng)造多項(xiàng)第一[N];經(jīng)濟(jì)參考報(bào);2003年

2 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院肝癌研究所教授 樊嘉;肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā) “種子”與“土壤”都重要[N];健康報(bào);2011年

3 胡德榮;秦嗣萃;破解預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移世界難題[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

4 姜微 秦嗣萃;我國應(yīng)用肝癌基因譜破解肝癌轉(zhuǎn)移之迷[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

5 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院 欽倫秀 葉青海 湯釗猷 陳惠芬 整理;肝癌轉(zhuǎn)移能力 始于原發(fā)瘤[N];健康報(bào);2011年

6 記者 白毅;我學(xué)者發(fā)現(xiàn)致肝癌轉(zhuǎn)移關(guān)鍵突變基因[N];中國醫(yī)藥報(bào);2012年

7 通訊員 蔡偉　早報(bào)記者 陳斯斯;肝癌轉(zhuǎn)移關(guān)鍵突變基因被發(fā)現(xiàn)[N];東方早報(bào);2012年

8 姜微 秦嗣萃;預(yù)防肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有“克星”[N];中國水利報(bào);2000年

9 石松;在治療肝癌及肝移植領(lǐng)域多建樹[N];科技日報(bào);2007年

10 李黎;肝癌腹痛五大特征[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張曉飛;QSOX1及其N-糖基化修飾對肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)作用機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 韓平;肝癌轉(zhuǎn)移新理論—“癌細(xì)胞擠出”及以BVES為干預(yù)靶點(diǎn)的研究[D];華中科技大學(xué);2016年

3 林國領(lǐng);肝癌轉(zhuǎn)移潛能始于原發(fā)瘤的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

4 申華莉;肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 于妍妍;人肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

6 張倜;利用血管內(nèi)皮異質(zhì)性預(yù)測和干預(yù)肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

7 潘奇;肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的研究及其意義[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

8 王知力;小肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)測指標(biāo)的選擇及手術(shù)與微波治療療效的對比研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

9 韓笑;P-5m八肽抑制肝癌轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2012年

10 陸斌;TIP30/CC3抑制肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高萍萍;肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移相關(guān)分泌蛋白的發(fā)現(xiàn)和初步驗(yàn)證[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 鄭慧琳;黃連素對“鳳凰涅i謾斃藕磐芬鷥偉┳頻囊種譜饔眉盎鋪教諿D];吉林大學(xué);2016年

3 宋琳嵐;基于iTRAQ技術(shù)對肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的初探[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

4 李文新;基因工程融合蛋白疫苗的衍生化及肝癌轉(zhuǎn)移動物模型的建立與鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 梁英超;骨橋蛋白調(diào)節(jié)間質(zhì)—上皮轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 張曉飛;肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)測標(biāo)簽的驗(yàn)證及重要分子的預(yù)測價(jià)值分析[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

7 張志明;血管內(nèi)皮生長因子D及其受體flt-4在肝癌中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

8 陶中華;肝癌轉(zhuǎn)移特征性microRNAs的篩選及功能鑒定[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

9 高楊;人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對肝癌轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制的探討[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

10 張志軍;ZDHHC2雜合性缺失與肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究[D];浙江大學(xué);2012年

，

本文編號：2081552