發(fā)布時(shí)間：2018-06-28 11:04

  本文選題：乳腺癌細(xì)胞 + PRMT2β　； 參考：《南華大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:初步探討PRMT2β對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的影響及其相關(guān)機(jī)制,為乳腺癌的靶向治療提供新思路。方法:通過顯微鏡觀察及蛋白免疫印跡(Western blot)技術(shù)鑒定穩(wěn)轉(zhuǎn)PRMT2β的MCF-7細(xì)胞株構(gòu)建成功。設(shè)立實(shí)驗(yàn)組即加四環(huán)素處理48h后可誘導(dǎo)PRMT2β高表達(dá)組(over expression,OE),陰性對(duì)照組即未加四環(huán)素處理組(negative control,NC)。以上述兩組細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,分別采用MTT檢測法、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測兩組細(xì)胞的增殖及克隆形成能力;通過流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡情況;利用蛋白質(zhì)免疫印跡法,從蛋白水平分析MCF-7細(xì)胞中,PRMT2β對(duì)CCND1及Akt磷酸化水平的影響。結(jié)果:1.顯微鏡下觀察,與NC組細(xì)胞相比,OE組細(xì)胞呈梭形,且細(xì)胞生長密度相對(duì)減少;Western blot結(jié)果表明,四環(huán)素能成功誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞表達(dá)PRMT2β-3Flag融合蛋白,提示PRMT2β-MCF7穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建成功。2.MTT檢測法表明,與NC組相比,OE組細(xì)胞的增殖率明顯減少,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示PRMT2β可抑制MCF-7細(xì)胞的增殖。3.克隆形成實(shí)驗(yàn)表明,相對(duì)于NC組,OE組克隆形成能力減弱,結(jié)果說明PRMT2β可以抑制MCF-7細(xì)胞體外增殖的能力。4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:與NC組相比,OE組細(xì)胞凋亡率相對(duì)增多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示OE組細(xì)胞增殖相對(duì)受抑制,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);結(jié)果說明PRMT2β能夠促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的凋亡,延長細(xì)胞周期,抑制細(xì)胞增殖。5.Western Blot結(jié)果顯示:相對(duì)于NC組,OE組細(xì)胞中CCND1的表達(dá)水平下調(diào),且Akt磷酸化水平下調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在加入兩種PI3K/Akt通路抑制劑(LY294002、Wortmannin)后,NC組與OE組中,與各自空白對(duì)照組相比,兩種抑制劑處理組的CCND1及Akt磷酸化表達(dá)水平都下調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:PRMT2β能夠抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖,其機(jī)制可能與PRMT2β下調(diào)CCND1表達(dá)及Akt磷酸化水平有關(guān)。
[Abstract]:Objective: to explore the effect of PRMT2 尾 on the proliferation of breast cancer MCF-7 cells and its related mechanisms, and to provide a new idea for the targeted treatment of breast cancer. Methods: the MCF-7 cell line was successfully constructed by microscopical observation and Western blot analysis. The experimental group was treated with tetracycline for 48h, and the over expression group (over expression OE) was induced, while the negative control group was not treated with tetracycline (negative control group). MTT assay and soft Agar clone formation assay were used to detect the proliferation and clone forming ability of the two groups of cells, and the cell cycle and apoptosis of the two groups were detected by flow cytometry. The effects of PRMT2 尾 on the phosphorylation of CCND1 and Akt in MCF-7 cells were analyzed by Western blot. The result is 1: 1. Under microscope, compared with NC group, the cells in OE group were fusiform, and the cell growth density was decreased. The results showed that tetracycline could induce the expression of PRMT2 尾 -3Flag fusion protein in MCF-7 cells successfully, and the expression of PRMT2 尾 -3Flag fusion protein in MCF-7 cells could be induced by tetracycline. The results indicated that PRMT2 尾 -MCF7 stable cell line was successfully constructed. 2. MTT assay showed that the proliferation rate of OE group was significantly lower than that of NC group (P0.05), suggesting that PRMT2 尾 could inhibit the proliferation of MCF-7 cells. Clone formation assay showed that compared with NC group, the clone forming ability of OE group was weakened. The results showed that PRMT2 尾 could inhibit the proliferation of MCF-7 cells in vitro. 4. The results showed that PRMT2 尾 could inhibit the proliferation of MCF-7 cells in vitro. The results of flow cytometry showed that the apoptosis rate of OE group was higher than that of NC group (P0.05), and the cell cycle test showed that the proliferation of OE group was inhibited. The results showed that PRMT2 尾 could promote the apoptosis of MCF-7 cells, prolong cell cycle and inhibit cell proliferation. 5. Western blot showed that the expression level of CCND1 was down-regulated and the phosphorylation of Akt was down-regulated compared with NC group. After adding two kinds of PI3K / Akt pathway inhibitor (LY294002Wortmannin), the expression of CCND1 and Akt phosphorylation was significantly decreased in NC group and OE group compared with control group (P0.05). Conclusion the proliferation of breast cancer MCF-7 cells can be inhibited by 1: PRMT2 尾, which may be related to the down-regulation of CCND1 expression and Akt phosphorylation by PRMT2 尾.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

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