本文選題：lincRNA-p21 + p53�。� 參考：《浙江大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：目的肝細(xì)胞肝癌在我國乃至全世界都擁有很高的發(fā)病率和死亡率,尋找精確診斷和治療肝細(xì)胞肝癌的靶標(biāo)是急需解決的迫切問題。p53是肝癌發(fā)生發(fā)展中的一個(gè)重要的抑癌分子,它與細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞衰老等均有密切的關(guān)系。長鏈非編碼RNA作為近年來的研究熱點(diǎn),已經(jīng)被證實(shí)與多種腫瘤生物學(xué)行為相關(guān),并且有一些lncRNAs直接或間接受p53調(diào)控,并參與介導(dǎo)p53信號通路。llincRNA-p21和PANDA是兩個(gè)受p53調(diào)控的長鏈非編碼RNA,而且都轉(zhuǎn)錄于p21的基因座。然而,作為p53相關(guān)的兩個(gè)重要lncRNAs,他們在肝細(xì)胞肝癌中的生物學(xué)作用和分子機(jī)制仍然知之甚少,有待進(jìn)一步探索。方法首先,我們用qRT-PCR的方法檢測lincRNA-p21和PANDA在p53依賴的DNA損傷模型和索拉非尼治療肝癌的細(xì)胞模型中的表達(dá),驗(yàn)證它們與p53的關(guān)系,并且在大樣本量的肝癌肝切除和肝癌肝移植臨床樣本中探索它們在肝癌中的表達(dá)譜。其次,我們利用siRNA技術(shù)在肝癌細(xì)胞中敲低lincRNA-p21,使用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、transwell等方法分析lincRNA-p21對肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲功能的影響,并用免疫熒光和免疫印跡的方法,分析發(fā)揮生物學(xué)功能的分子機(jī)制。然后,我們利用慢病毒感染技術(shù)在肝癌細(xì)胞中過表達(dá)PANDA,使用CCK-8、EdU、皮下成瘤、細(xì)胞周期、衰老染色、免疫印跡、免疫組化等方法,研究PANDA對肝癌的增殖和衰老的影響,并用qRT-PCR的方法找到PANDA的作用靶基因IL8,通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)IL8,觀察其對PANDA的功能拯救效果,再通過啟動子熒光雙報(bào)告和RNApull down技術(shù)探索PANDA調(diào)控IL8的分子機(jī)制,并通過臨床樣本驗(yàn)證IL8與PANDA的共表達(dá)關(guān)系。結(jié)果首先,我們發(fā)現(xiàn)lincRNA-p21和PANDA在p53依賴的DNA損傷模型中明顯上調(diào),在肝癌肝切除和肝癌肝移植臨床樣本中的表達(dá)量均明顯低于相鄰的癌旁組織,并且lincRNA-p21在索拉非尼的治療過程中明顯上調(diào)。其次,我們觀察到,當(dāng)llincRNA-p21被敲低時(shí),肝癌細(xì)胞的活力增強(qiáng)、細(xì)胞周期進(jìn)展加快、細(xì)胞遷移和侵襲能力變強(qiáng)、細(xì)胞形態(tài)和骨架變得更加靈活,并且相關(guān)MMP家族蛋白被上調(diào),肝癌細(xì)胞由上皮型向間質(zhì)型轉(zhuǎn)變,同時(shí)伴隨著EGFR入核增加。然后,我們發(fā)現(xiàn),當(dāng)PANDA在肝癌細(xì)胞中被過表達(dá)時(shí),它能促進(jìn)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞和皮下種植瘤的生長,可能與細(xì)胞周期無關(guān),隨后我們發(fā)現(xiàn)PANDA過表達(dá)中衰老的肝癌細(xì)胞所占比例降低,相關(guān)衰老的標(biāo)志包括衰老染色、pl6和y-H2AX等均有所降低。其中PANDA的下游靶基因衰老相關(guān)的炎癥因子IL8明顯降低。過表達(dá)IL8可以逆轉(zhuǎn)PANDA在肝癌中的作用,并且IL8與PANDA在臨床樣本中存在著負(fù)相關(guān)。最后我們發(fā)現(xiàn)PANDA能夠直接抑制IL8的轉(zhuǎn)錄活性,但并不與IL8蛋白質(zhì)結(jié)合。結(jié)論lincRNA-p21和PANDA在肝癌中受p53調(diào)控,并在肝癌中顯著低表達(dá)。敲低lincRNA-p21能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞活力、周期進(jìn)展、遷移和侵襲,可能與lincRNA-p21影響肝癌細(xì)胞骨架和EGFR的亞細(xì)胞定位相關(guān)。過表達(dá)PANDA能夠促進(jìn)肝癌增殖和抑制肝癌衰老,可能與PANDA能夠抑制衰老相關(guān)炎癥因子IL8的轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)。p53相關(guān)的lincRNA-p21和PANDA在肝癌中均發(fā)揮著重要的作用,可能成為肝細(xì)胞肝癌診斷的新型標(biāo)志和治療的潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of the expression of lincRNA - p21 and PANDA on the proliferation , migration and invasion of human hepatocellular carcinoma ( HCC ) by means of qRT - PCR . Conclusion PANDA can inhibit the proliferation of liver cancer cells and inhibit the aging of liver cancer cells . Conclusion The expression of IL 8 can inhibit the proliferation of liver cancer cells and inhibit the senescence of liver cancer .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：2049175