本文選題：乳腺癌 + 大腸癌��； 參考：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:利用密度梯度離心法及cytospin甩片機(jī)富集腫瘤細(xì)胞,后利用吉姆薩染色鑒定細(xì)胞形態(tài),結(jié)合免疫熒光和免疫組化對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物的鑒定進(jìn)一步確認(rèn)是否為腫瘤細(xì)胞。從而建立較為簡(jiǎn)便的CTC捕獲及鑒定方法。方法:1.腫瘤細(xì)胞的富集:在外周血中加入淋巴細(xì)胞分離液,利用密度梯度離心法進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的富集,將獲得的細(xì)胞經(jīng)cytospin甩片。2.腫瘤細(xì)胞的鑒定:利用吉姆薩染色確認(rèn)腫瘤細(xì)胞形態(tài),聯(lián)合免疫熒光及免疫組織化學(xué)的方法利用細(xì)胞表面標(biāo)志物CK及EpCAM對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3.對(duì)該方法的腫瘤細(xì)胞回收率進(jìn)行實(shí)驗(yàn),在lm丨健康人外周血中分別加入10,50,100個(gè)左右MCF-7或SW620腫瘤細(xì)胞,利用Giemsa染色方法對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)計(jì)算回收率。通過(guò)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照組,陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組來(lái)建立實(shí)驗(yàn)方法。陽(yáng)性對(duì)照組為lml健康人外周血加入相應(yīng)數(shù)量的腫瘤細(xì)胞,陰性對(duì)照組為1ml健康人外周血,實(shí)驗(yàn)組為1ml乳腺癌或結(jié)直腸癌病人外周血。從而建立具有一定的敏感性及特異性且較為簡(jiǎn)便的CTC捕獲及鑒定方法。結(jié)果:陽(yáng)性對(duì)照中,10/10例在Giemsa染色中可見形態(tài)較大細(xì)胞,在免疫熒光及免疫組織化學(xué)方法鑒定腫瘤細(xì)胞中可見陽(yáng)性細(xì)胞。在陰性對(duì)照組中,2/10例在Giemsa染色中可見形態(tài)較大細(xì)胞,1/10例樣本在免疫熒光中可見抗CK及抗EpCAM陽(yáng)性細(xì)胞,但細(xì)胞形態(tài)與白細(xì)胞無(wú)明顯差異,0/10例在免疫組織化學(xué)中可見抗CK及抗EpCAM陽(yáng)性。有較好的敏感性及特異性。實(shí)驗(yàn)組中,10/10例乳腺癌及大腸癌病人外周血中用Giemsa染色可見形態(tài)較大的細(xì)胞,10/10例用免疫熒光染色可見抗CK或抗EpCAM陽(yáng)性細(xì)胞,1/10例用免疫組織化學(xué)方法可見抗CK陽(yáng)性細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)較白細(xì)胞稍大。在腫瘤細(xì)胞的回收率實(shí)驗(yàn)中,平均回收率為88.8%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)對(duì)加入腫瘤細(xì)胞的健康人外周血,健康人外周血及乳腺癌或結(jié)直腸癌患者外周血進(jìn)行檢測(cè),利用密度梯度離心法和cytospin富集腫瘤細(xì)胞,并聯(lián)合吉姆薩染色,免疫熒光及免疫組化方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞,表明本實(shí)驗(yàn)建立的方法對(duì)外周血中腫瘤細(xì)胞的探測(cè)有較好的敏感性和特異性及有較高的腫瘤細(xì)胞回收率,通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞鑒定的進(jìn)一步研究具有應(yīng)用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床檢測(cè)的價(jià)值。
[Abstract]:Aim: to enrich the tumor cells by density gradient centrifugation and cytospin flapping machine, and then to identify the cell morphology by Gimsa staining, and to identify whether the tumor cells are tumor cells by immunofluorescence and immunohistochemistry. Thus, a simple method for CTC capture and identification was established. Method 1: 1. The enrichment of tumor cells: the lymphocyte isolate was added to the peripheral blood and the tumor cells were enriched by density gradient centrifugation. The obtained cells were separated by cytospin. 2. Identification of tumor cells: the morphology of tumor cells was confirmed by Gimsa staining, and the tumor cells were identified by CK and EpCAM, combined with immunofluorescence and immunohistochemistry. The recovery rate of tumor cells was measured by Giemsa staining method. The recovery rate of tumor cells was calculated by Giemsa staining method by adding about 10,50100 MCF-7 or SW620 tumor cells into the peripheral blood of healthy individuals. The experimental method was established by setting up positive control group, negative control group and experimental group. The positive control group added corresponding tumor cells to the peripheral blood of the lml healthy people, the negative control group was the peripheral blood of the 1ml healthy people, and the experimental group was the peripheral blood of the patients with 1ml breast cancer or colorectal cancer. A simple and sensitive method for CTC capture and identification was established. Results: in 10 / 10 of the positive controls, large cells were found in Giemsa staining and positive cells in tumor cells were identified by immunofluorescence and immunohistochemistry. In the negative control group, 10 / 10 of the positive cells were found to be positive for anti-CK and anti-EpCAM in immunofluorescence in 10 / 10 of the samples with larger cells in Giemsa staining. However, there was no significant difference between cell morphology and leukocyte in 10 cases of anti-CK and anti-EpCAM positive in immunohistochemistry. It has good sensitivity and specificity. Giemsa staining was used in the peripheral blood of 10 / 10 patients with breast cancer and colorectal cancer in the experimental group. In 10 / 10 of the patients, anti-CK or anti-EpCAM positive cells could be seen in 10 / 10 of the patients with anti-CK or anti-EpCAM by immunofluorescence staining. Anti-CK positive cells could be seen in 10 / 10 of the patients with anti-CK or anti-EpCAM by immunohistochemical method. The morphology of the cells was slightly larger than that of white blood cells. The average recovery of tumor cells was 88. 8%. Conclusion: in this experiment, the peripheral blood of healthy people with tumor cells, the peripheral blood of healthy people and the patients with breast cancer or colorectal cancer were detected. The tumor cells were enriched by density gradient centrifugation and cytospin, and combined with Gimsa staining. The detection of tumor cells by immunofluorescence and immunohistochemistry showed that the method established in this study had good sensitivity and specificity for detection of tumor cells in peripheral blood and a high recovery rate of tumor cells. The further study of tumor cell identification is valuable for clinical detection of circulating tumor cells.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9;R735.34

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本文編號(hào)：2045549