發(fā)布時(shí)間：2018-06-20 06:02

  本文選題：外泌體 + 乳腺癌�。� 參考：《西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年02期

【摘要】：目的探討外泌體(exosomes,EXOs)在乳腺癌細(xì)胞間耐藥信息的傳遞作用。方法選用乳腺癌敏感細(xì)胞株(MCF-7)及其阿霉素耐藥株(MCF-7/ADR)為模型,用超速離心法提取MCF-7/ADR外泌體(ADR/EXO);用透射電子顯微鏡觀察鑒定細(xì)胞外泌體形態(tài);運(yùn)用倒置熒光顯微鏡觀察ADR/EXO與MCF-7細(xì)胞的相互作用過程;運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡觀察MCF-7與MCF-7/ADR在Transwell小室共培養(yǎng)60h后細(xì)胞內(nèi)阿霉素藥物濃度變化;運(yùn)用CCK-8法檢測(cè)ADR/EXO與MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng)后對(duì)阿霉素的IC50的影響;運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)MCF-7與ADR/EXO共培養(yǎng)后MDR1基因表達(dá)水平的變化;運(yùn)用Western blot法檢測(cè)MCF-7與ADR/EXO共培養(yǎng)12h和72h后P-gp表達(dá)水平的變化。結(jié)果透射電子顯微鏡下,外泌體呈現(xiàn)典型的圓形或橢圓形杯口狀結(jié)構(gòu),直徑為40~100nm;用PKH67標(biāo)記ADR/EXO顯示,ADR/EXO是可以被MCF-7細(xì)胞攝取;與ADR/EXO共培養(yǎng)后敏感細(xì)胞株MCF-7對(duì)阿霉素的IC50耐藥性升高2.62倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);經(jīng)過與MCF-7/ADR在Transwell小室中共培養(yǎng)60h后的MCF-7細(xì)胞,胞內(nèi)可見阿霉素聚集減少,核區(qū)分布減少,熒光強(qiáng)度減弱;MCF-7+ADR/EXO組MDR1的mRNA表達(dá)量明顯增加,是MCF-7組的8.69倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與MCF-7組相比,共培養(yǎng)12h的MCF-7+ADR/EXO組P-gp相對(duì)表達(dá)量升高4.64倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與MCF-7組相比,共培養(yǎng)72h的MCF-7+ADR/EXO組P-gp相對(duì)表達(dá)量升高3.37倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論乳腺癌外泌體可能具有傳遞耐藥信息的作用,耐藥細(xì)胞外泌體能夠使敏感細(xì)胞獲得一定的耐藥性,耐藥細(xì)胞外泌體向敏感細(xì)胞傳遞P-gp,不僅可以通過蛋白形式進(jìn)行傳遞,而且可以通過mRNA的形式進(jìn)行傳遞。
[Abstract]:Objective to investigate the role of exosomesus EXOsin in the transmission of drug resistance information between breast cancer cells. Methods MCF-7) and its adriamycin resistant cell line MCF-7 / ADR) were used as models, and ADR / EXOO was extracted by ultracentrifugation, and the morphology of exocrine of MCF-7 / ADR was observed and identified by transmission electron microscope (TEM). The interaction between ADR / EXO and MCF-7 cells was observed by inverted fluorescence microscope, and the concentration of adriamycin in MCF-7 / MCF-7 / ADR cells was observed by laser confocal microscopy after co-cultured in Transwell chamber for 60 hours. The effect of co-culture of ADR- / EXO and MCF-7 cells on the IC50 of adriamycin was detected by CCK-8 method, the expression of MDR1 gene was detected by RT-PCR after co-culture of MCF-7 and ADR- r-EXO, and the expression of P-gp was detected by Western blot assay after co-culture of MCF-7 and ADRP-EXO for 12h and 72h. Results under the transmission electron microscope, the exocrine presented a typical round or oval cup shaped structure with a diameter of 40,100nm.The PKH67 labeled ADR / EXO showed that ADR / EXO could be absorbed by MCF-7 cells. After co-culture with ADR / EXO, the IC50 resistance of MCF-7 to adriamycin increased by 2.62 times, the difference was statistically significant (P 0.05). After co-cultured with MCF-7 / ADR in Transwell chamber for 60 hours, the intracellular concentration of doxorubicin decreased and the distribution of nuclear region decreased. The expression of MDR1 mRNA in MCF-7 ADR / EXO group was 8.69 times higher than that in MCF-7 group, the difference was statistically significant (P 0.05), compared with MCF-7 group, the relative expression of P-gp in MCF-7 ADR / EXO group was 4.64 times higher than that in MCF-7 group, and compared with MCF-7 group, the difference was statistically significant (P 0.05), compared with MCF-7 group, the expression of P-gp in MCF-7 ADR / EXO group was 4.64 times higher than that in MCF-7 group. The relative expression of P-gp in MCF-7 ADR / EXO group was 3.37 times higher than that in MCF-7 ADR / EXO group for 72 h, and the difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion the exosomes of breast cancer may transmit the information of drug resistance. The exosomes of drug-resistant cells can make the sensitive cells obtain certain drug resistance. The exocrine of drug-resistant cells can transfer P-gpto sensitive cells, not only through the form of protein. And it can be transmitted in the form of mRNA.
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81173601、30972932) 濱州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015ZC0301) 濱州醫(yī)學(xué)院科研計(jì)劃與科研啟動(dòng)基金(No.BY2014KYQD36) 山東省高等學(xué)校科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.J15LL51)~~
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2043242