本文選題：miR-146b-5p + 甲狀腺乳頭狀癌��； 參考：《鄭州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景Micro RNAs(小分子RNA,mi RNAs)是一類全長約為21~25個核苷酸的非編碼單鏈小RNA分子,mi RNA可以識別特定的靶m RNA,轉(zhuǎn)錄以后信使RNA可以調(diào)節(jié)基因的表達(dá)水平,從而參與調(diào)控細(xì)胞的生長、增殖、分化、凋亡等生命活動。內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤為甲狀腺癌,其在惡性腫瘤中約占3%,已躍居頭頸部惡性腫瘤的首位,女性發(fā)病較多。近年來各國報道甲狀腺癌發(fā)病率的增長多以PTC為主。由于PTC早期多無明顯癥狀,常常導(dǎo)致患者就診時已經(jīng)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或已侵犯周圍器官和組織。因此,探索PTC有效的治療靶點、尋找更安全有效的治療途徑一直是提高PTC生存率和生存質(zhì)量所亟待解決的難題。在本實驗前期的研究中,應(yīng)用高通量的Micro RNA微陣列篩選不同分期的PTC組織和癌旁正常組織中差異表達(dá)的Micro RNA時發(fā)現(xiàn),mi R-146b-5p在早期和中晚期PTC組織中均呈明顯高表達(dá),同時隨著腫瘤分期的增加,其表達(dá)水平有升高的趨勢,提示其在PTC發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。Mi R-146b位于10q24.32,與mi R-146a具有高度的序列同源性。He及Sheu等通過基因芯片技術(shù)及RT-PCR方法研究發(fā)現(xiàn)mi R-146b在PTC組織中過表達(dá)。Kim、Xing及Chou等發(fā)現(xiàn)mi R-146b在BRAF基因突變組織中表達(dá)明顯升高,BRAF基因突變與PTC的侵襲性有關(guān),這可能是mi R-146b在PTC中過表達(dá)的一個分子機制。但目前尚未有關(guān)于mi RNA-146b-5p與PTC細(xì)胞生物學(xué)影響及相關(guān)機制的相關(guān)報道,通過本課題的研究,可望獲得mi R-146b-5p對PTC的生物學(xué)行為影響的可靠證據(jù),為確立mi R-146b-5p作為PTC診斷和預(yù)后監(jiān)測的生物學(xué)指標(biāo)及治療靶點奠定理論基礎(chǔ)。本次實驗通過對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1細(xì)胞株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染使mi R-146b-5p過表達(dá),之后通過CCK-8、劃痕實驗、transwell小室侵襲實驗以及流式細(xì)胞儀檢測對比轉(zhuǎn)染前后PTC的增殖、凋亡、周期以及遷移、侵襲能力的變化。從而探討mi R-146b-5p過表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)展的關(guān)系及mi R-146b-5p在甲狀腺乳頭狀癌中的作用機制。目的本實驗通過慢病毒載體構(gòu)建和慢病毒包裝并通過慢病毒侵染試驗,使得hsa-mir-146b-5p在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1細(xì)胞株中得到穩(wěn)定高表達(dá),這個試驗為接下來進一步研究mi R-146b-5p過表達(dá)對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學(xué)特性的影響打下堅實的基礎(chǔ)。方法1.慢性毒質(zhì)粒的構(gòu)建:(1)構(gòu)建mi R-146b-5p過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒(2)將過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1,獲取mi R-146b-5p穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞單克隆2.mi R-146b-5p對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響(1)觀察mi R-146b-5p過表達(dá)對TPC-1細(xì)胞增殖的影響:cck-8法檢測mi R-146b-5p過表達(dá)后可以明顯促進TPC-1細(xì)胞的增殖,實驗組和對照組的細(xì)胞數(shù)均有增加,但實驗組的細(xì)胞增殖更加明顯(P0.05)。(2)分析mi R-146b-5p過表達(dá)對TPC-1細(xì)胞周期和凋亡的影響:通過流式細(xì)胞儀分析技術(shù),可以看到實驗組和對照組的細(xì)胞凋亡率之間有明顯差異,實驗組細(xì)胞凋亡率減少更為明顯。(3)研究mi R-146b-5 p過表達(dá)對TPC-1細(xì)胞遷移能力的影響:劃痕實驗觀察過表過mi R-146b-5p的細(xì)胞,細(xì)胞遷移能力明顯增強,transwell小室侵襲實驗觀察細(xì)胞的侵襲能力明顯增強。結(jié)果(1)經(jīng)慢病毒包裝侵染將mi R-146b-5p轉(zhuǎn)染至甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1中,細(xì)胞數(shù)都有所增加,但轉(zhuǎn)染組的TPC-1細(xì)胞增殖的更加明顯。(P0.05)。(2)CCK-8法和流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p基因后可以明顯促進甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1的增殖,實驗組和對照組的TPC-1細(xì)胞數(shù)都有所增加,但實驗組的TPC-1細(xì)胞數(shù)增加更加顯著。(P0.05)。(3)流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率:實驗組和空載組、對照組相比較細(xì)胞凋亡減少明顯,差異顯著。(P0.05)。(4)劃痕實驗觀察轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p后穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p中,24h、48h、72h遷移細(xì)胞數(shù)量均高于空載體組和對照組,轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p后TPC-1細(xì)胞的遷移細(xì)胞明顯增加(P0.05)。transwell小室侵襲實驗觀察24h、48h、72h的穿膜細(xì)胞數(shù),轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p后TPC-1細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05)。結(jié)論經(jīng)過慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p后,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞經(jīng)過CCK-8、劃痕實驗、以及流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測:TPC-1細(xì)胞的增殖得到促進,凋亡減少,遷移、侵襲能力明顯增強。提示在TPC-1細(xì)胞中mi R-146b-5p與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)展相關(guān),mi R-146b-5p的過表達(dá)可以促進TPC-1細(xì)胞的異常增殖,這種作用可能是mi R-146b-5p通過調(diào)控某種抑制基因靶蛋白來實現(xiàn)的,抑制基因尚有待于進一步分析和研究。
[Abstract]:In this study , it was found that mi R - 146b - 5p plays an important role in the development and metastasis of PTC . The effects of mi R - 146b - 5p overexpression on the cell cycle and apoptosis of TPC - 1 cells were observed . ( 4 ) After transfected mi R - 146b - 5p stably transfected with mi R - 146b - 5p after transfection of mi R - 146b - 5p , the number of cells of TPC - 1 cells increased significantly after transfection of mi R - 146b - 5p ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R736.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王肖琴,陳興美,徐昌良,傅燕萍;甲狀腺乳頭狀癌的超聲特征[J];中國醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志;2002年05期

2 吳黎敏,李航,徐衛(wèi)萍;甲狀腺乳頭狀癌92例臨床分析[J];陜西腫瘤醫(yī)學(xué);2003年01期

3 周歡,陳輝,陳賢明;囊性甲狀腺乳頭狀癌誤診1例[J];東南國防醫(yī)藥;2004年01期

4 王紅衛(wèi),洪濤,劉江華,曹仁賢,文格波;人甲狀腺乳頭狀癌高表達(dá)基因片段篩選與克隆[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2004年05期

5 林艷麗,王麗曾;甲狀腺乳頭狀癌36例臨床病理分析[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;2004年06期

6 王國亮;張國昌;趙瑾;李鋒;;甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生的分子遺傳學(xué)研究[J];山東醫(yī)藥;2005年34期

7 賀清明;張修莉;師福才;;甲狀腺乳頭狀癌二次手術(shù)治療體會[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2006年08期

8 何春年;張靜;邢穎;;甲狀腺乳頭狀癌的診治進展[J];現(xiàn)代診斷與治療;2006年05期

9 梁粉花;付青;戴翠華;王剛平;李江濤;趙明春;;甲狀腺乳頭狀癌與乳頭狀增生的病理研究[J];腫瘤研究與臨床;2006年11期

10 趙爾增;;兒童和青春期甲狀腺乳頭狀癌:形態(tài)亞型、生物學(xué)行為及預(yù)后(英)[J];診斷病理學(xué)雜志;2007年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王英煒;朱宏;宋月佳;戚基萍;劉娜;;甲狀腺透明變梁狀腫瘤與甲狀腺乳頭狀癌的分析[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

2 鄭薇;張桂芝;譚建;;甲狀腺乳頭狀癌胸骨轉(zhuǎn)移2例病例報道[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第30次學(xué)術(shù)年會暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2010年

3 岳林先;馬懿;鄧立強;蔡志清;王士光;;彌漫硬化型甲狀腺乳頭狀癌的聲像圖表現(xiàn)[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第八屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 李沿江;劉燕娜;黃敏;章春泉;皮小蘭;蔡建華;李車英;李薇;徐翔;沈孝萍;張詩淵;;甲狀腺乳頭狀癌聲像圖回顧分析[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第三次全國淺表器官及外周血管超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議（高峰論壇）論文匯編[C];2011年

5 王全;楊俊杰;沈強;唐衛(wèi)華;;甲狀腺乳頭狀癌的手術(shù)范圍探討[A];2005年浙江省外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 嚴(yán)峗;;甲狀腺乳頭狀癌的超聲診斷體會[A];2012年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

7 時嘉欣;田家瑋;;甲狀腺乳頭狀癌的超聲造影特點[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

8 李逢生;韓琴芳;徐榮;;超聲造影在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

9 王建紅;趙誠;劉榮桂;牛曉燕;房世保;王正濱;;橋本甲狀腺炎合并甲狀腺乳頭狀癌的超聲診斷價值[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第八屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

10 王長秋;趙文雯;魯安懷;柳劍英;梅放;張波;;甲狀腺乳頭狀癌組織壞死后礦化特征研究[A];中國礦物巖石地球化學(xué)學(xué)會第13屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉欣;甲狀腺乳頭狀癌風(fēng)險評估研究[D];吉林大學(xué);2013年

2 劉宇飛;DLC1基因的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌中淋巴管生成關(guān)系的臨床研究[D];武漢大學(xué);2014年

3 張凌;促甲狀腺激素與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生相關(guān)的臨床基礎(chǔ)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 王偉斌;腫瘤克隆起源之爭與甲狀腺乳頭狀癌研究[D];浙江大學(xué);2010年

5 孫團起;甲狀腺乳頭狀癌的核外分子遺傳和表觀遺傳學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

6 邊學(xué);甲狀腺乳頭狀癌組織與正常腺體組織蛋白質(zhì)的差異表達(dá)分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

7 陳劍;甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征及分子標(biāo)記物在預(yù)測腫瘤生物學(xué)行為中的意義[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

8 董芳;甲狀腺乳頭狀癌合并甲狀腺良性疾病的臨床特征及風(fēng)險評估[D];華中科技大學(xué);2014年

9 朱曉麗;甲狀腺乳頭狀癌形態(tài)學(xué)、免疫表型和分子遺傳學(xué)特征及其診斷價值的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

10 鄢丹桂;甲狀腺乳頭狀癌前哨淋巴結(jié)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李瑋;甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞對促甲狀腺激素反應(yīng)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 馬恒;術(shù)前PLR、NLR對甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存的預(yù)測價值[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 王倩倩;CCNG2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞中的表達(dá)及其對K1細(xì)胞增殖凋亡影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 許建輝;慢病毒介導(dǎo)CCDC67轉(zhuǎn)染甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)活性的鑒定[D];鄭州大學(xué);2015年

5 宋廣昊;TXNIP在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊岳;STIP1、EMA和ER-α蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 趙愛國;TC-1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

8 鄭建;MiR-146b-5p對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1相關(guān)生物學(xué)特性的影響研究[D];鄭州大學(xué);2015年

9 楊珂;甲狀腺乳頭狀癌BRAF~(V600E)基因突變與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶攝碘能力的相關(guān)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

10 馬思遠(yuǎn);FoxP3對甲狀腺乳頭狀癌中NIS表達(dá)的影響及機制研究[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：2033438