本文選題：新鮮冰凍血漿 + 腫瘤�。� 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2017年博士論文

【摘要】：研究背景及目的:輸血已成為臨床上最重要的治療手段之一,但是,輸血安全在輸血醫(yī)學中卻是一個永恒的主題。安全、有效的輸血要求我們對成分非常復雜的血液制品應該有更為明確的理解�，F(xiàn)階段我國臨床使用的血漿制品有新鮮冰凍血漿、普通冰凍血漿和冷沉淀三種,新鮮冰凍血漿(fresh frozen plasma, FFP)是成分輸血的重要組成部分,由于獻血者個體上的差異,導致單人份的血漿間分子水平上存在巨大的個體差異,本研究旨在探討不同獻血者的新鮮冰凍血漿對腫瘤細胞體外增殖的影響。方法:選取來自解放軍總醫(yī)院輸血科男性無償獻血者捐獻的新鮮冰凍血漿,體外培養(yǎng)人肝癌細胞HepG2、胃癌細胞AGS,細胞貼壁后與不同獻血者的新鮮冰凍血漿共同孵育24h,分別應用3- (4,5-二甲基噻唑-2) -2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5) -dimethylthiahiazo (-z-yl) -2,5-diphenytetrazolium Bromide, MTT)和實時細胞電子分析技術(shù)(Real-time cell-based assay,RTCA)方法測定不同獻血者的新鮮冰凍血漿對腫瘤細胞體外增殖的影響程度,篩選出對腫瘤細胞增殖具有顯著差異的新鮮冰凍血漿,并采用Luminex液相芯片技術(shù)檢測這些具有差異的新鮮冰凍血漿中腫瘤壞死因子(TNF-a)、白介素-1b (IL-1b)、白介素-6 (IL-6)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、趨化蛋白-1 (MCP-1)、正常T細胞的表達和分泌因子(RANTES)和血小板衍生生長因子-AB/BB (PDGF-AB/BB)這7種細胞因子的水平,同時利用SELDI/TOF-MS技術(shù)和RayBiotech生物素標記抗體芯片方法分析不同獻血者新鮮冰凍血漿的蛋白水平。結(jié)果:(1)本研究應用不同濃度、不同年齡組獻血者的混合FFP處理細胞24小時后,發(fā)現(xiàn)混合液對腫瘤細胞增殖具有明顯的促進作用,并且呈劑量依賴性;當終濃度為10%時,與對照組相比,不同年齡組獻血者的FFP對HepG2細胞增殖并無明顯差異;50歲年齡組不同濃度的FFP混合液(終濃度為20%、30%和40%)與腫瘤細胞體外共培養(yǎng)的OD值分別為0.629、0.699和0.821,明顯高于21～30年齡組不同濃度FFP混合液的0.453、0.538和0.584 (P=0.0298、P=0.0203和P=0.0241);不同獻血者的FFP與HepG2細胞共同孵育,用MTT方法檢測體外細胞的增殖狀態(tài),結(jié)果顯示,編號為14的FFP與HepG2細胞孵育后的OD值為0.964,明顯高于編號為23的FFP與HepG2細胞孵育后的OD值為0.677 (P=0.0000)。(2)不同獻血者的FFP與HepG2細胞體外共培養(yǎng),應用MTT方法與RTCA方法檢測腫瘤細胞體外增殖的作用,比較發(fā)現(xiàn)兩種方法具有良好的相關(guān)性,差異無統(tǒng)計學意義;應用RTCA方法對68例不同獻血者的新鮮冰凍血漿肝癌HepG2細胞及胃腺癌AGS細胞兩種細胞細胞體外增殖作用進行檢測,實驗結(jié)果顯示不同獻血者的新鮮冰凍血漿對胃腺癌AGS細胞和HepG2細胞增殖的結(jié)果和趨勢基本一致。(3)不同獻血者的FFP制品與腫瘤細胞共培養(yǎng)后,呈現(xiàn)出不同的增殖狀態(tài)。本研究應用RTCA方法實時監(jiān)測不同獻血者的新鮮冰凍血漿對HCC細胞株HepG2體外增殖的狀況,篩選出CI值不同的兩組新鮮冰凍血漿。Luminex液相芯片技術(shù)結(jié)果顯示CI值不同的兩組(CI值7.0和CI值3.0)新鮮冰凍血漿中PDGF-AB/BB、VEGF濃度具有明顯差異;應用SELDI-TOF-MS技術(shù)對CI值不同的(CI值8.0和CI值3.0)兩組樣本進行檢測,結(jié)果顯示兩組的新鮮冰凍血漿蛋白表達譜具有明顯差異,經(jīng)過對鑒定獲得的差異蛋白進行分析發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因、皮質(zhì)抑素、血小板第4因子、磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白1、基質(zhì)細胞衍生因子、Lactotransferrin、轉(zhuǎn)化生長因子a等26種差異表達的蛋白,說明不同獻血者本身體內(nèi)相關(guān)生長因子和蛋白存在巨大差異,從而導致相應的FFP制品中生長因子類物質(zhì)濃度的異常升高,因此有可能增加對體外HepG2細胞體外增殖的正向作用。(4)用MTT方法檢測30例增殖組中不同獻血者混勻的FFP和9例抑制組不同獻血者混勻的FFP處理肝癌細胞的增殖率,發(fā)現(xiàn)兩組混勻后的FFP對腫瘤細胞的存活率差異具有統(tǒng)計學意義。應用RayBiotech生物素標記抗體芯片發(fā)現(xiàn)增殖組血漿中的 Smad 4、Glut2、VEGF、MIP 2、MMP-7、TIMP-1、ALCAM、RANTES、IL-1b、IL-6、MCP-1、TNF-a蛋白量表達量顯著上調(diào)。結(jié)論:(1)不同獻血者的新鮮冰凍血漿對HepG2細胞體外增殖的作用具有明顯差異。(2)新鮮冰凍血漿制品中生長因子及蛋白的'濃度差異引起對體外腫瘤細胞增殖的差異。
[Abstract]:In order to study the effect of fresh frozen plasma of different donors on the proliferation of tumor cells in vitro , fresh frozen plasma was incubated with 3 - ( 4,5 - dimethylthiazol - 2 ) - 2,5 - diphenyltetraazosin ( 3 - ( 4,5 ) - dimethylthiahiazo ( - z - yl ) -2 , 5 - diphenylathiahiazo ( - z - yl ) -2,5 - diphenylazo ( MTT ) and real - time cell electron analysis ( RTCA ) . The results showed that the OD value of FFP in different blood donors was 0.629 , 0.699 and 0.812 ( P = 0.0298 , P = 0.0203 and P = 0.0241 ) . The results showed that there were significant differences in the expressions of PDGF - AB / BB and VEGF in the fresh frozen plasma of different donors .
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7;R457.1

【參考文獻】

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本文編號：2026746