本文選題：新鮮冰凍血漿 + 腫瘤��； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：研究背景及目的:輸血已成為臨床上最重要的治療手段之一,但是,輸血安全在輸血醫(yī)學(xué)中卻是一個(gè)永恒的主題。安全、有效的輸血要求我們對成分非常復(fù)雜的血液制品應(yīng)該有更為明確的理解�，F(xiàn)階段我國臨床使用的血漿制品有新鮮冰凍血漿、普通冰凍血漿和冷沉淀三種,新鮮冰凍血漿(fresh frozen plasma, FFP)是成分輸血的重要組成部分,由于獻(xiàn)血者個(gè)體上的差異,導(dǎo)致單人份的血漿間分子水平上存在巨大的個(gè)體差異,本研究旨在探討不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿對腫瘤細(xì)胞體外增殖的影響。方法:選取來自解放軍總醫(yī)院輸血科男性無償獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的新鮮冰凍血漿,體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2、胃癌細(xì)胞AGS,細(xì)胞貼壁后與不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿共同孵育24h,分別應(yīng)用3- (4,5-二甲基噻唑-2) -2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5) -dimethylthiahiazo (-z-yl) -2,5-diphenytetrazolium Bromide, MTT)和實(shí)時(shí)細(xì)胞電子分析技術(shù)(Real-time cell-based assay,RTCA)方法測定不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿對腫瘤細(xì)胞體外增殖的影響程度,篩選出對腫瘤細(xì)胞增殖具有顯著差異的新鮮冰凍血漿,并采用Luminex液相芯片技術(shù)檢測這些具有差異的新鮮冰凍血漿中腫瘤壞死因子(TNF-a)、白介素-1b (IL-1b)、白介素-6 (IL-6)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、趨化蛋白-1 (MCP-1)、正常T細(xì)胞的表達(dá)和分泌因子(RANTES)和血小板衍生生長因子-AB/BB (PDGF-AB/BB)這7種細(xì)胞因子的水平,同時(shí)利用SELDI/TOF-MS技術(shù)和RayBiotech生物素標(biāo)記抗體芯片方法分析不同獻(xiàn)血者新鮮冰凍血漿的蛋白水平。結(jié)果:(1)本研究應(yīng)用不同濃度、不同年齡組獻(xiàn)血者的混合FFP處理細(xì)胞24小時(shí)后,發(fā)現(xiàn)混合液對腫瘤細(xì)胞增殖具有明顯的促進(jìn)作用,并且呈劑量依賴性;當(dāng)終濃度為10%時(shí),與對照組相比,不同年齡組獻(xiàn)血者的FFP對HepG2細(xì)胞增殖并無明顯差異;50歲年齡組不同濃度的FFP混合液(終濃度為20%、30%和40%)與腫瘤細(xì)胞體外共培養(yǎng)的OD值分別為0.629、0.699和0.821,明顯高于21～30年齡組不同濃度FFP混合液的0.453、0.538和0.584 (P=0.0298、P=0.0203和P=0.0241);不同獻(xiàn)血者的FFP與HepG2細(xì)胞共同孵育,用MTT方法檢測體外細(xì)胞的增殖狀態(tài),結(jié)果顯示,編號為14的FFP與HepG2細(xì)胞孵育后的OD值為0.964,明顯高于編號為23的FFP與HepG2細(xì)胞孵育后的OD值為0.677 (P=0.0000)。(2)不同獻(xiàn)血者的FFP與HepG2細(xì)胞體外共培養(yǎng),應(yīng)用MTT方法與RTCA方法檢測腫瘤細(xì)胞體外增殖的作用,比較發(fā)現(xiàn)兩種方法具有良好的相關(guān)性,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;應(yīng)用RTCA方法對68例不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿肝癌HepG2細(xì)胞及胃腺癌AGS細(xì)胞兩種細(xì)胞細(xì)胞體外增殖作用進(jìn)行檢測,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿對胃腺癌AGS細(xì)胞和HepG2細(xì)胞增殖的結(jié)果和趨勢基本一致。(3)不同獻(xiàn)血者的FFP制品與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后,呈現(xiàn)出不同的增殖狀態(tài)。本研究應(yīng)用RTCA方法實(shí)時(shí)監(jiān)測不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿對HCC細(xì)胞株HepG2體外增殖的狀況,篩選出CI值不同的兩組新鮮冰凍血漿。Luminex液相芯片技術(shù)結(jié)果顯示CI值不同的兩組(CI值7.0和CI值3.0)新鮮冰凍血漿中PDGF-AB/BB、VEGF濃度具有明顯差異;應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)對CI值不同的(CI值8.0和CI值3.0)兩組樣本進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示兩組的新鮮冰凍血漿蛋白表達(dá)譜具有明顯差異,經(jīng)過對鑒定獲得的差異蛋白進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因、皮質(zhì)抑素、血小板第4因子、磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白1、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子、Lactotransferrin、轉(zhuǎn)化生長因子a等26種差異表達(dá)的蛋白,說明不同獻(xiàn)血者本身體內(nèi)相關(guān)生長因子和蛋白存在巨大差異,從而導(dǎo)致相應(yīng)的FFP制品中生長因子類物質(zhì)濃度的異常升高,因此有可能增加對體外HepG2細(xì)胞體外增殖的正向作用。(4)用MTT方法檢測30例增殖組中不同獻(xiàn)血者混勻的FFP和9例抑制組不同獻(xiàn)血者混勻的FFP處理肝癌細(xì)胞的增殖率,發(fā)現(xiàn)兩組混勻后的FFP對腫瘤細(xì)胞的存活率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用RayBiotech生物素標(biāo)記抗體芯片發(fā)現(xiàn)增殖組血漿中的 Smad 4、Glut2、VEGF、MIP 2、MMP-7、TIMP-1、ALCAM、RANTES、IL-1b、IL-6、MCP-1、TNF-a蛋白量表達(dá)量顯著上調(diào)。結(jié)論:(1)不同獻(xiàn)血者的新鮮冰凍血漿對HepG2細(xì)胞體外增殖的作用具有明顯差異。(2)新鮮冰凍血漿制品中生長因子及蛋白的'濃度差異引起對體外腫瘤細(xì)胞增殖的差異。
[Abstract]:In order to study the effect of fresh frozen plasma of different donors on the proliferation of tumor cells in vitro , fresh frozen plasma was incubated with 3 - ( 4,5 - dimethylthiazol - 2 ) - 2,5 - diphenyltetraazosin ( 3 - ( 4,5 ) - dimethylthiahiazo ( - z - yl ) -2 , 5 - diphenylathiahiazo ( - z - yl ) -2,5 - diphenylazo ( MTT ) and real - time cell electron analysis ( RTCA ) . The results showed that the OD value of FFP in different blood donors was 0.629 , 0.699 and 0.812 ( P = 0.0298 , P = 0.0203 and P = 0.0241 ) . The results showed that there were significant differences in the expressions of PDGF - AB / BB and VEGF in the fresh frozen plasma of different donors .
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7;R457.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2026746