本文選題：肝癌 + 乳腺癌�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：肝細(xì)胞肝癌(hepataocellular carcinoma,HCC)在我國是很常見的一種惡性腫瘤,具有發(fā)病率較高,侵襲性極強(qiáng),進(jìn)展及其迅速,預(yù)后極差等臨床特點(diǎn),對(duì)患者生命造成嚴(yán)重的威脅。生長較為迅速,早期就容易出現(xiàn)淋巴管、血管及遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移等惡性臨床病理特點(diǎn),與肝癌患者預(yù)后較差有關(guān)。探索肝癌發(fā)生、發(fā)展的復(fù)雜的具體生物學(xué)機(jī)制,并系統(tǒng)闡明肝癌發(fā)生和進(jìn)展的分子生物學(xué)變化,可為肝癌的診治提供新的重要途徑。MTDH(metaherin),也稱人異粘蛋白,編碼基因位于人體8號(hào)染色體長臂22區(qū)(8qq22),編碼蛋白質(zhì)的分子量約64 kda大小。2004年被報(bào)道在小鼠腫瘤模型中與乳腺癌細(xì)胞發(fā)生早期肺轉(zhuǎn)移有關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)人體一些癌組織中MTDH表達(dá)異常的增高,與腫瘤惡性的病理特征及不良預(yù)后均有一定的關(guān)系。癌蛋白表達(dá)上調(diào)機(jī)制比較復(fù)雜,很多因素均可涉及調(diào)控癌蛋白表達(dá)。本部分研究中我們分析比較了MTDH在肝、乳腺及甲狀腺腫瘤及相應(yīng)良性組織中表達(dá)情況。目前MTDH在肝癌、乳腺癌中表達(dá)與患者臨床病理特征關(guān)系及預(yù)后已經(jīng)見報(bào)道,而MTDH表達(dá)情況與甲狀腺癌臨床病理特征及預(yù)后未見相關(guān)研究。為探討MTDH作為腫瘤分子靶向治療的普遍性,同時(shí)本文作者有多年從事甲狀腺外科工作經(jīng)驗(yàn),本部分我們分析了甲狀腺癌組織中MTDH表達(dá)情況,并分析甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)患者M(jìn)TDH表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系,探討MTDH作為惡性腫瘤分子靶向治療靶點(diǎn)的普遍性。Micro RNA(miRNA)是一類非編碼單鏈小分子的RNA,堿基大小約為19-25bp,科學(xué)家已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在成百上千的miRNA,這些miRNA參與了機(jī)體復(fù)雜的生物學(xué)活動(dòng)過程,并且miRNA表達(dá)具有一定的組織特異性(tissue specific)及器官發(fā)展時(shí)序特異性(developmental stage specific manner)等特點(diǎn)。通過與m RNA的3′-UTR堿基部分或完全結(jié)合,miRNA在調(diào)節(jié)機(jī)體基因表達(dá)中發(fā)揮重要生物學(xué)作用。目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腫瘤組織與相應(yīng)的正常組織miRNA表達(dá)譜有很大差異,部分miRNA表達(dá)上調(diào),表達(dá)上調(diào)的miRNA可能發(fā)揮促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的癌基因的作用,而表達(dá)下調(diào)的miRNA則可能具有抑制腫瘤進(jìn)展的抑癌作用。MiRNA-30家族成員在腫瘤中一般表達(dá)下調(diào),而miRNA-30家族成員在肝癌中的具體作用機(jī)制研究較少,其中,家族成員之一miR-30a-5p在其他腫瘤中常見報(bào)道,而肝癌中研究有限。本研究挑選miR-30a-5p為研究對(duì)象,檢測(cè)其在肝癌組織中與癌旁組織中的表達(dá)差異,檢測(cè)其對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721增殖、凋亡、遷移和侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,及對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞裸鼠皮下腫瘤組織成瘤影響。通過生物學(xué)信息預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)MTDH是miR-30a-5p靶點(diǎn),并分析miR-30a-5p與肝癌組織中MTDH表達(dá)相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞不斷增殖并明顯的抗凋亡是其發(fā)生惡性進(jìn)展的重要原因,而越來越多的研究發(fā)現(xiàn)PTEN/AKT參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞抗凋亡,而且在調(diào)控腫瘤細(xì)胞失巢凋亡中同樣發(fā)揮一定作用。PTEN/AKT信號(hào)通路也被報(bào)道與腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲有關(guān),AKT可通過調(diào)控細(xì)胞遷移相關(guān)分子Rac1、cdc42和Rho等的表達(dá),使腫瘤細(xì)胞骨架發(fā)生一定的重排,促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生遷移及轉(zhuǎn)移。我們研究發(fā)現(xiàn)miR-30a-5p可能通過靶向調(diào)控MTDH蛋白表達(dá),進(jìn)而調(diào)控PTEN/AKT通路,參與發(fā)揮抑制肝癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用。而miR-30a-5p對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721遷移和侵襲的抑制作用,也可能通過靶向調(diào)控MTDH蛋白表達(dá),進(jìn)而調(diào)控PTEN/AKT信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)。第一章Metaherin蛋白在肝癌、乳腺癌及甲狀腺癌組織中表達(dá)及意義目的MTDH在肝癌、乳腺癌中表達(dá)與患者臨床病理特征關(guān)系及預(yù)后已見報(bào)道。MTDH表達(dá)情況與甲狀腺癌臨床病理特征及預(yù)后未見研究。為探討MTDH作為腫瘤分子靶向治療的普遍性,本部分我們分析甲狀腺乳頭狀癌(PTC)患者M(jìn)TDH表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系,探討MTDH作為惡性腫瘤分子靶向治療靶點(diǎn)的普遍性。方法⑴采用免疫組化檢測(cè)MTDH在肝癌、乳腺癌及甲狀腺癌組織表達(dá)情況,并與良性組織中表達(dá)作比較;⑵分析PTC組織中MTDH表達(dá)與臨床病理指標(biāo)關(guān)系;⑶Kaplan Meier比較PTC患者M(jìn)TDH高表達(dá)與低表達(dá)組DSS,Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析PTC組織中MTDH表達(dá)的預(yù)后意義。結(jié)果⑴肝癌旁組織中MTDH表達(dá)陽性率為20%(2/10),肝癌組織中MTDH陽性表達(dá)率為66.67%(14/21)。⑵在乳腺增生組織中MTDH表達(dá)陽性率為20%(2/10),在乳腺癌中表達(dá)陽性率為72.7%(13/18)。⑶MTDH在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及甲狀腺腺瘤組織中表達(dá)陽性率均為10%(1/10),PTC中MTDH陽性表達(dá)率為37.2%(58/156),未分化癌為50%(3/6)。⑷MTDH表達(dá)與PTC患者腫瘤大小((p=0.030))、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.041)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P=0.028),但和患者年齡、性別、包膜浸潤情況、腫瘤是否多發(fā)及腫瘤分期無關(guān),MTDH高表達(dá)與PTC患者較差的生存率有關(guān)。結(jié)論MTDH在肝癌、乳腺癌及甲狀腺癌組織中表達(dá)增高,高表達(dá)MTDH與惡性腫瘤患者不良病理特征及較差的預(yù)后有關(guān),可能為腫瘤分子靶向治療提供重要的靶點(diǎn)。第二章MiR-30a-5p調(diào)控肝癌MTDH蛋白表達(dá)的分子機(jī)制研究目的探討miR-30a-5p在肝癌組織中與癌旁組織中的表達(dá)差異,生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-30a-5p的靶點(diǎn),并分析miR-30a-5p與肝癌組織中MTDH表達(dá)相關(guān)性。方法⑴采用RT-q PCR檢測(cè)miR-30a-5p在肝癌細(xì)胞中與相應(yīng)的正常肝細(xì)胞,肝癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)差異;⑵生物學(xué)信息技術(shù)預(yù)測(cè)miR-30a-5p的靶基因,Western blot和Luciferase assay進(jìn)行初步驗(yàn)證;⑶免疫組化檢測(cè)肝癌組織中MTDH表達(dá),采用相關(guān)方法分析肝癌組織中MTDH免疫組化評(píng)分分?jǐn)?shù)與RT-q PCR檢測(cè)的miR-30a-5p相對(duì)表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果⑴與相應(yīng)的癌旁組織比較,miR-30a-5p在肝癌表達(dá)下調(diào),肝癌細(xì)胞中miR-30a-5p表達(dá)也較正常肝細(xì)胞LO2表達(dá)降低;⑵生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)MTDH可能是miR-30a-5p的靶基因,Western blot證實(shí)miR-30a-5p可抑制MTDH蛋白表達(dá),Luciferase assay驗(yàn)證MTDH可能是miR-30a-5p的靶基因;⑶相關(guān)分析肝癌組織中MTDH表達(dá)與miR-30a-5p呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論MiR-30a-5p在肝癌組織中表達(dá)降低,miR-30a-5p可靶向抑制肝癌組織中MTDH癌蛋白表達(dá)。在肝癌組織中miR-30a-5p和MTDH存在負(fù)相關(guān),表明miR-30a-5p可通過靶向調(diào)控MTDH的m RNA的3′-UTR,調(diào)控MTDH蛋白表達(dá)。第三章MiR-30a-5p調(diào)控MTDH/PTEN/AKT通路對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究目的MiR-30家族成員在肝癌中的具體作用機(jī)制研究較少,本部分挑選miR-30a-5p為研究對(duì)象,檢測(cè)其對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)影響,并探討可能機(jī)制。方法⑴采用Lipofection2000轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721內(nèi)miR-30a-5p,CCK-8、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;⑵劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)分別觀察miR-30a-5p過表達(dá)后對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2和SMMC-7721的遷移和侵襲能力的影響。⑶采用si RNA技術(shù),沉默肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721中MTDH蛋白,觀察對(duì)HepG2和SMMC-7721細(xì)胞增殖、克隆形成、凋亡、遷移及侵襲能力的影響。⑷Western blot檢測(cè)MTDH下游PTEN蛋白,探索miR-30a-5p對(duì)PTEN/AKT信號(hào)通路調(diào)控作用。結(jié)果⑴通過轉(zhuǎn)染miR-30a-5p mimics入肝癌細(xì)胞株HepG2、SMCC-7721細(xì)胞,CCK-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-30a-5p過表達(dá)后可以抑制HepG2、SMCC-7721細(xì)胞的增殖能力(P0.05),抑制克隆形成(P0.05),流式細(xì)胞術(shù)顯示miR-30a-5p過表達(dá)促進(jìn)了HepG2、SMCC-7721細(xì)胞凋亡(P0.05);⑵劃痕實(shí)驗(yàn)表明miR-30a-5p過表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞遷移,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)表明miR-30a-5p過表達(dá)可明顯抑制HepG2、SMCC-7721細(xì)胞的體外侵襲能力(P0.05);⑶通過si RNA技術(shù)沉默肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721中MTDH蛋白,結(jié)果明顯抑制HepG2和SMMC-7721細(xì)胞增殖(P0.05)、克隆形成(P0.05),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡(P0.05),細(xì)胞遷移和侵襲也受到抑制(P0.05)。⑷Western blot結(jié)果表明miR-30a-5p可調(diào)控PTEN/AKT通路,過表達(dá)miR-30a-5p可抑制MTDH蛋白表達(dá),從而促進(jìn)PTEN蛋白表達(dá),抑制AKT磷酸化激活。結(jié)論MiR-30a-5p可通過調(diào)控MTDH/PTEN/AKT通路,從而發(fā)揮抑制肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721增殖、克隆形成,并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,抑制肝癌細(xì)胞遷移和侵襲。第四章MiR-30a-5p抑制肝癌細(xì)胞裸鼠成瘤的實(shí)驗(yàn)研究目的在本部分中我們繼續(xù)挑選miR-30a-5p為研究對(duì)象,檢測(cè)其對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞裸鼠皮下成瘤的影響,觀察miR-30a-5p對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中肝癌細(xì)胞增殖是否同樣具有抑制作用。方法⑴采用裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn),觀察過表達(dá)miR-30a-5p對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2裸鼠皮下成瘤的影響;⑵免疫組化檢測(cè)miR-30a-5p轉(zhuǎn)染HepG2裸鼠腫瘤細(xì)胞MTDH表達(dá);⑶免疫組化檢測(cè)miR-30a-5p轉(zhuǎn)染HepG2裸鼠腫瘤細(xì)胞核增殖抗原PCNA表達(dá)和核凋亡蛋白TUNEL蛋白表達(dá);⑷Western blot檢測(cè)miR-30a-5p轉(zhuǎn)染HepG2裸鼠腫瘤細(xì)胞MTDH和PCNA蛋白表達(dá),p-AKT蛋白表達(dá)。結(jié)果⑴通過裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn),觀察到肝癌細(xì)胞HepG2在轉(zhuǎn)染miR-30a-5p后裸鼠皮下腫瘤的生長明顯減緩,與對(duì)照組相比較miR-30a-5p轉(zhuǎn)染組腫瘤的大小、質(zhì)量均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);⑵MiR-30a-5p轉(zhuǎn)染HepG2可明顯抑制裸鼠皮下腫瘤組織MTDH表達(dá);⑶MiR-30a-5p轉(zhuǎn)染HepG2裸鼠皮下腫瘤組織核增殖抗原PCNA表達(dá)減低,而核凋亡蛋白TUNEL表達(dá)明顯增加;⑷MiR-30a-5p可抑制裸鼠腫瘤組織AKT激活,抑制p-AKT形成。結(jié)論:miR-30a-5p可通過調(diào)控MTDH蛋白表達(dá),抑制肝癌腫瘤細(xì)胞裸鼠腫瘤生長。
[Abstract]:In this part , we analyzed the expression of MTDH in liver , breast and thyroid tumor and its prognosis . 鍏朵腑,瀹舵棌鎴愬憳涔嬩竴miR-30a-5p鍦ㄥ叾浠栬偪鐦や腑甯歌鎶ラ亾,鑰岃倽鐧屼腑鐮旂┒鏈夐檺.鏈爺絀舵寫閫塵iR-30a-5p涓虹爺絀跺璞，

本文編號(hào)：2023311