發(fā)布時間：2018-06-15 13:19

  本文選題：RRS1 + 膽管癌　； 參考：《南華大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的：本研究將探討運用慢病毒介導(dǎo)RNAi干擾技術(shù)抑制RRS1基因在膽管癌RBE細胞表達后,能否在體外實驗中對膽管癌RBE細胞增殖產(chǎn)生影響。材料與方法：1.第一步確定在膽管癌中RRS1基因是否異常表達,運用RT-PCR技術(shù)手段檢測湖南省人民醫(yī)院肝臟外二科2013年5月至2013年11月間10例手術(shù)切除的膽管癌與癌旁膽管組織標本RRS1mRNA基因水平的表達。2.第二步擬通過慢病毒載體介導(dǎo)RNA干擾技術(shù),從轉(zhuǎn)錄水平沉默RRS1基因表達,RT-PCR技術(shù)檢測抑制RRS 1后在膽管癌mRNA基因水平的表達；體外實驗觀察抑制RRS1基因后對膽管癌RBE細胞增殖的影響,初步探討抑制RRS1基因表達后對膽管癌細胞增殖的影響。結(jié)果：1.在10例臨床樣本中,RT-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)在膽管癌組織中的RRS1 mRNA基因表達水平較癌旁膽管組織明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示在膽管癌中RRS1基因表達上調(diào)。2.成功通過慢病毒介導(dǎo)RNA干擾技術(shù)阻斷了轉(zhuǎn)錄后水平RRS1基因的表達,RT-PCR技術(shù)手段檢測實驗組(轉(zhuǎn)染RRS1-shRNA組)與陰性對照組(轉(zhuǎn)染shRNA慢病毒載體組)RRS1mRNA基因表達水平,結(jié)果表明抑制了RRS1表達的實驗組其mRNA的相對表達量受到明顯抑制,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。評估其基因敲減效率為80.10%,提示RNA干擾RRS1基因效果顯著。3.在體外實驗中運用cellomics檢測實驗組和陰性對照組兩組細胞生長計數(shù)并繪制其生長曲線,結(jié)果表明RNA干擾抑制RRS1基因在膽管癌RBE細胞中表達后,膽管癌RBE細胞的增殖能力受到了明顯下降。結(jié)論：1.通過實時熒光定量PCR檢測臨床樣本,其數(shù)據(jù)表明在膽管癌組織中的RRS1 mRNA表達水平較癌旁膽管組織顯著增高,提示RRS1在膽管癌組織中表達上調(diào)。2.慢病毒RNAi干擾抑制RRS1基因在膽管癌RBE細胞中的表達后,膽管癌RBE細胞生長與增殖能力有明顯下降,提示RRS1可能會促進膽管癌細胞的增殖能力。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of lentivirus-mediated RNAi interference on the proliferation of RBE cells of cholangiocarcinoma after inhibiting the expression of RRS1 gene in RBE cells in vitro. Materials and methods: 1. The first step is to determine the abnormal expression of RRS1 gene in cholangiocarcinoma. RT-PCR technique was used to detect the expression of RRS1 mRNA gene in 10 cases of cholangiocarcinoma and adjacent bile duct tissues surgically resected from May 2013 to November 2013 in the second Department of external liver of Hunan Provincial people's Hospital. In the second step, RNA interference mediated by lentivirus vector was used to detect the mRNA expression of RRS1 in cholangiocarcinoma after inhibition of RRS1 by reverse transcriptional silencing of RRS1 gene. To observe the effect of inhibiting RRS1 gene on the proliferation of cholangiocarcinoma RBE cells in vitro and to explore the effect of inhibition of RRS1 gene expression on the proliferation of cholangiocarcinoma cells in vitro. The result is 1: 1. The results of RT-PCR in 10 clinical samples showed that the expression level of RRS1 mRNA in cholangiocarcinoma tissues was significantly higher than that in adjacent bile duct tissues, and the difference was statistically significant (P 0.05). These results suggest that RRS1 gene expression is up-regulated in cholangiocarcinoma. The expression of RRS1 gene at post-transcriptional level was blocked by lentivirus mediated RNA interference. RT-PCR was used to detect the expression of RRS1 mRNA in experimental group (transfected with RRS1-shRNA) and negative control group (transfected shRNA lentivirus vector group). The results showed that the relative expression of RRS1 mRNA in the experimental group was significantly inhibited, and the difference was statistically significant (P 0.05). The gene knockout efficiency of RRS1 gene was evaluated to be 80.10%, indicating that RNA interference with RRS1 gene had a significant effect on RRS1 gene. In vitro, cellomics was used to detect the cell growth of the experimental group and the negative control group. The results showed that RNAi inhibited the expression of RRS1 gene in bile duct carcinoma cells. The proliferative ability of RBE cells in cholangiocarcinoma was significantly decreased. Conclusion 1. Clinical samples were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The results showed that the expression of RRS1 mRNA in cholangiocarcinoma tissues was significantly higher than that in adjacent bile duct tissues, suggesting that RRS1 mRNA expression was up-regulated in cholangiocarcinoma tissues. Lentivirus RNAi interference inhibited the expression of RRS1 gene in bile duct carcinoma RBE cells, and the growth and proliferation ability of bile duct carcinoma RBE cells decreased significantly, suggesting that RRS1 might promote the proliferation of cholangiocarcinoma cells.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.8

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本文編號：2022138