本文選題：食管癌微環(huán)境 + 外泌體��； 參考：《東南大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景與目的食管癌是發(fā)展中國(guó)家最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,我國(guó)作為食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國(guó)家之一,人們的生命安全和生活質(zhì)量因此而受到嚴(yán)重威脅。探索食管癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)理,尋找靈敏度和特異度均較高的食管癌早期診斷標(biāo)志物,對(duì)于食管癌高危人群篩檢以及降低其發(fā)病率和死亡率具有重大意義。本研究在miRNA微陣列芯片結(jié)合生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,通過(guò)擴(kuò)大人群樣本量,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證并建立了食管癌患者與健康人群的血漿miRNA差異表達(dá)譜,結(jié)合食管癌細(xì)胞外泌體miRNA高通量測(cè)序分析,從差異表達(dá)的血漿miRNA表達(dá)譜中選取miR-21-5p和miR-93-5p進(jìn)行后續(xù)的功能研究,探索食管癌細(xì)胞外泌體來(lái)源的miR-21-5p和miR-93-5p在食管癌微環(huán)境中,對(duì)食管癌細(xì)胞自身、血管內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的生物學(xué)作用,通過(guò)識(shí)別各自調(diào)控的靶基因及下游相關(guān)信號(hào)通路,初步探討外泌體穿梭miR-21-5p和miR-93-5p在食管癌微環(huán)境中的作用機(jī)制,并評(píng)價(jià)兩者對(duì)于食管癌的診斷價(jià)值,為闡明食管癌的發(fā)展機(jī)理、發(fā)現(xiàn)早期診斷標(biāo)志物提供研究線索。研究方法1.利用差速結(jié)合超速離心法分離食管癌細(xì)胞EC9706培養(yǎng)上清來(lái)源的沉淀物后,采用透射電鏡觀察和Western blot蛋白定性相結(jié)合的方法鑒定此沉淀物。提取沉淀物總RNA,應(yīng)用新一代Solexa高通量測(cè)序構(gòu)建EC9706細(xì)胞及此沉淀物的小RNA文庫(kù),主要包括小RNA分離、連接酶加接頭、RT-PCR、PCR產(chǎn)物割膠回收和純化幾個(gè)步驟,通過(guò)進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析比較EC9706細(xì)胞及其沉淀物中成熟miRNAs和未知miRNAs的表達(dá)豐度,識(shí)別成熟miRNAs的異構(gòu)體,并采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR驗(yàn)證表達(dá)水平較高的5個(gè)miRNAs在EC9706細(xì)胞及其分泌沉淀物中的表達(dá)水平。2.招募87例經(jīng)病理或內(nèi)鏡診斷明確且未接受放化療的原發(fā)性食管癌患者及87例條件匹配的健康對(duì)照者,采用回顧性問(wèn)卷詢問(wèn)的形式收集患者和對(duì)照者的人口學(xué)指標(biāo)及環(huán)境因素暴露情況。送檢3對(duì)食管癌患者和配對(duì)對(duì)照者的血漿,應(yīng)用miRNA表達(dá)譜芯片篩選差異表達(dá)的miRNAs,結(jié)合Solexa高通量測(cè)序結(jié)果,采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法驗(yàn)證差異表達(dá)的miRNAs在擴(kuò)大人群樣本中的表達(dá)水平。利用靶基因預(yù)測(cè)軟件(DIANA、TargetMiner、miRTarBase、RNA22)預(yù)測(cè)候選 miRNAs(miR-21-5p 和 miR-93-5p)的靶基因,Gene Ontology和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分別對(duì)預(yù)測(cè)靶基因進(jìn)行功能富集和Pathway注釋。條件logistic回歸分析差異表達(dá)的血漿miR-21-5p和miR-93-5p與食管癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系,ROC曲線下面積預(yù)測(cè)兩者對(duì)食管癌的診斷價(jià)值,并分析它們與環(huán)境危險(xiǎn)因素之間的交互作用。3.構(gòu)建體外細(xì)胞共培養(yǎng)模型,將Cy3標(biāo)記的miR-21-5p和miR-93-5pmimics轉(zhuǎn)染的EC9706細(xì)胞作為供體細(xì)胞,觀察Cy3-miR-21-5p和Cy3-miR-93-5p在供體EC9706細(xì)胞與受體EC9706細(xì)胞之間的傳遞,采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)外泌體穿梭miR-21-5p和miR-93-5p的傳遞效率。在此基礎(chǔ)上分別采用EdU染色法、Annexin V-FITCPI雙染法、Transwell穿膜法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)受體EC9706細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力及周期分布。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法和Western blot分別檢測(cè)在mRNA和蛋白水平上,外泌體穿梭miR-21-5p對(duì)其靶基因PDCD4、外泌體穿梭miR-93-5p對(duì)其靶基因PTEN的調(diào)控作用,構(gòu)建野生型和突變型的靶基因3'UTR載體,采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證在EC9706細(xì)胞中miR-21-5p和miR-93-5p與各自靶基因的調(diào)控關(guān)系。進(jìn)一步檢測(cè)了外泌體穿梭miR-21-5p所調(diào)控PDCD4下游通路中腫瘤遷移和侵襲相關(guān)基因MMP2、MMP9的表達(dá)水平,以及外泌體穿梭miR-93-5p對(duì)受體EC9706細(xì)胞中周期相關(guān)基因p21、Cyclin D1的表達(dá)調(diào)控。4.觀察并檢測(cè)Cy3-miR-21-5p通過(guò)體外細(xì)胞共培養(yǎng)模型在供體細(xì)胞EC9706和受體細(xì)胞HUVEC之間的傳遞及其效率,分別采用EdU染色法、Tianswell穿膜法、體外血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)受體細(xì)胞HUVEC的增殖、遷移及新生血管形成能力。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法和Western blot檢測(cè)外泌體穿梭miR-21-5p對(duì)靶基因PTEN mRNA和蛋白水平的調(diào)控,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-21-5p是否能與PTEN 3'UTR結(jié)合。Western blot檢測(cè)受體細(xì)胞HUVEC 中 PTEN 下游 PI3K/Akt/eNOS/NO 通路中 p-Akt(Ser473)、p-eNOS(Ser1177)及增殖相關(guān)蛋白p-Erk1/2(Thr202/Tyr204)的表達(dá)水平,《一氧化氮(NO)測(cè)試盒》檢測(cè)受體細(xì)胞HUVEC培養(yǎng)上清中NO含量,熒光定量RT-PCR法檢測(cè)遷移相關(guān)基因MMP2、MMP9的mRNA水平。5.采用佛波酯、人重組白細(xì)胞介素4對(duì)人急性單核白血病細(xì)胞THP-1進(jìn)行序貫作用處理,以誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞TAM的生成。分別將miR-21-5p和miR-93-5p mimics轉(zhuǎn)染的EC9706作為供體細(xì)胞,經(jīng)誘導(dǎo)成功的TAM作為受體細(xì)胞,在體外細(xì)胞共培養(yǎng)模型下,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)外泌體穿梭miR-21-5p和miR-93-5p對(duì)受體細(xì)胞TAM中自噬相關(guān)基因ATG5、ATG12、BECN1、SQSTMA、LC3A和LC3BmRNA表達(dá)的影響,用以間接反映受體細(xì)胞TAM的自噬水平變化。主要研究成果1.人食管癌細(xì)胞EC9706與其分泌外泌體中miRNAs的鑒別與篩選1.1 EC9706細(xì)胞來(lái)源外泌體的分離與鑒定通過(guò)采用差速結(jié)合超速離心的方法,從食管癌細(xì)胞EC9706培養(yǎng)上清中分離出白色沉淀物,透射電鏡下觀察白色沉淀物是具有雙層膜結(jié)構(gòu)的微囊泡,呈圓形或橢圓形,囊泡直徑約30～60nm,符合外泌體的形態(tài)學(xué)特征;Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)白色沉淀物具有外泌體膜蛋白之一 CD63的表達(dá),因此確認(rèn)此沉淀物為外泌體。1.2 EC9706細(xì)胞與其分泌外泌體的miRNA表達(dá)譜EC9706細(xì)胞及其所分泌外泌體經(jīng)總RNA提取、質(zhì)量控制、小RNA測(cè)序后各獲得15-32nt的特異序列1919950和1226905條,高質(zhì)量的干凈序列的長(zhǎng)度分布統(tǒng)計(jì)顯示絕大多數(shù)小RNA位于19～24nt,符合miRNA的序列特征。將細(xì)胞和外泌體中miRNA與miRBase18.0數(shù)據(jù)庫(kù)中已公布的人類miRNA進(jìn)行比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中有342個(gè)已知成熟miRNAs的表達(dá),其中48個(gè)在外泌體中也同時(shí)表達(dá);另外,兩者中共同表達(dá)的新miRNA有12個(gè),有20個(gè)新miRNAs只在外泌體中特異性表達(dá)。MiRNA表達(dá)譜分析結(jié)果顯示,已知的成熟miRNA在外泌體中表達(dá)豐度均低于細(xì)胞,在所識(shí)別的細(xì)胞及其分泌外泌體中共同表達(dá)的新miRNA中,有8個(gè)在外泌體中的表達(dá)豐度高于細(xì)胞。接著,我們選取了細(xì)胞及其分泌外泌體中表達(dá)水平均較高的miR-21、let-7a、Iet-7f、miR-26a和miR-27b重新進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR驗(yàn)證,結(jié)果顯示5個(gè)miRNAs在EC9706細(xì)胞及其分泌外泌體中的表達(dá)水平趨勢(shì)一致,與測(cè)序結(jié)果基本相符。2.人血漿候選食管癌特異miRNAs的篩選2.1食管癌患者與健康對(duì)照人群血漿miRNAs差異表達(dá)分析利用Aligent miRNA芯片從3例食管癌患者和3例健康對(duì)照者的血漿中篩選出了 20個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,其中15個(gè)在食管癌患者血漿中上調(diào),5個(gè)下調(diào)。與食管癌細(xì)胞EC9706及其分泌外泌體中表達(dá)豐度均較高的miRNAs相比對(duì),我們選擇miR-21-5p、miR-19b-3p、miR-25-3p、miR-93-5p,let-7i-5p進(jìn)行擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證,最后選擇表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的miR-21-5p和miR-93-5p作為進(jìn)一步的研究對(duì)象。取四個(gè)靶基因預(yù)測(cè)軟件的交集,分別識(shí)別了與miR-21-5p、miR-93-5p的候選靶基因相關(guān)的GO分析72個(gè)和165個(gè),KEGG Pathway注釋結(jié)果顯示miR-21-5p和miR-93-5p調(diào)控的靶基因均顯著地參與了與癌癥發(fā)生相關(guān)的多條信號(hào)通路,如 mTOR、FoxO、PI3K-Akt、TGF-beta 通路等。2.2 人血漿候選食管癌特異miRNAs與食管癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的研究通過(guò)條件logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)食管癌患者血漿miR-21-5p和miR-93-5p的表達(dá)上調(diào)均可增加食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),是食管癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素,兩者對(duì)于食管癌診斷的AUC分別為0.598和0.575,兩者聯(lián)合應(yīng)用診斷的AUC為0.619。本研究收集的人群流行病學(xué)資料分析結(jié)果顯示,吸煙、飲酒和消化道疾病史的分布在食管癌患者和健康人群之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示這三個(gè)因素與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性。MiR-21-5p和miR-93-5p的表達(dá)水平與環(huán)境暴露、生活習(xí)慣之間的交互作用分析結(jié)果顯示,miR-21-5p的異常表達(dá)與吸煙具有顯著交互作用,而miR-93-5p的異常表達(dá)與職業(yè)、飲酒和飲茶有交互作用。3.外泌體穿梭miRNAs對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究3.1 miR-21-5p和miR-93-5p通過(guò)外泌體傳遞對(duì)受體細(xì)胞EC9706生物學(xué)行為的影響將Cy3-miR-21-5p和miR-93-5p mimics轉(zhuǎn)染的供體EC9706細(xì)胞與受體EC9706細(xì)胞共培養(yǎng)24h后,鏡下觀察顯示大多數(shù)受體EC9706細(xì)胞中均可見(jiàn)紅色熒光,miR-21-5p和miR-93-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體EC9706細(xì)胞中miR-21-5p、miR-93-5p的表達(dá)水平分別為陰性對(duì)照組的2.75和1.44倍,說(shuō)明miRNAs通過(guò)外泌體傳遞進(jìn)入了受體EC9706細(xì)胞,可進(jìn)行后續(xù)的細(xì)胞生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,miR-21-5pmimics轉(zhuǎn)染組受體EC9706細(xì)胞的早期凋亡率1(%)明顯低于陰性對(duì)照(miR-NC)組(4.03±0.59vs.5.67±0.71,P0.05),而miR-93-5p對(duì)其凋亡無(wú)影響;細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,miR-21-5p和miR-93-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體EC9706細(xì)胞的增殖率分別為(33.02±1.97)%和(36.95±5.58)%,較miR-NC組(30.60±3.91)%明顯升高(P0.05);細(xì)胞周期結(jié)果顯示,miR-93-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體EC9706細(xì)胞較miR-NC組各時(shí)期細(xì)胞所占比例雖無(wú)顯著差異,但有G1/S期阻滯的趨勢(shì),miR-21-5p對(duì)其周期分布無(wú)影響;遷移能力檢測(cè)結(jié)果顯示,miR-21-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體EC9706 細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯多于 miR-NC 組(90.90±7.11 vs.83.40±7.81,P0.05),而miR-93-5p對(duì)遷移無(wú)影響;侵襲能力檢測(cè)結(jié)果顯示,miR-21-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體EC9706細(xì)胞的 OD570顯著高于 miR-NC 組(0.093±0.006 vs.0.084±0.005,P0.05),而 miR-93-5p 對(duì)侵襲無(wú)影響。3.2外泌體穿梭miR-21-5p對(duì)受體細(xì)胞EC9706生物學(xué)行為影響的機(jī)制研究利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)方法取四個(gè)靶基因預(yù)測(cè)軟件的交集,共篩選出了 55個(gè)miR-21-5p的候選靶基因,結(jié)合現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道,挑選與腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖、遷移、侵襲功能均相關(guān)PDCC4作為研究對(duì)象。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,miR-21-5p過(guò)表達(dá)的供體EC9706細(xì)胞與受體EC9706細(xì)胞共培養(yǎng)24h后,外泌體穿梭miR-21-5p在轉(zhuǎn)錄后水平抑制了受體EC9706細(xì)胞中PDCD4的蛋白表達(dá);雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示miR-21-5p能夠與PDCD4 3'UTR區(qū)的"AUAAGCU"序列相結(jié)合。進(jìn)一步檢測(cè)了 PDCD4下游的腫瘤遷移和侵襲基因MMP2、MMP9在受體EC9706細(xì)胞中的表達(dá),結(jié)果顯示MMP2和MMP9的mRNA、蛋白表達(dá)水平均顯著提高。3.3外泌體穿梭miR-93-5p對(duì)受體細(xì)胞EC9706生物學(xué)行為影響的機(jī)制研究選擇DIANA、TaigetMiner、miRTarBase、RNA22四個(gè)靶基因預(yù)測(cè)軟件均可預(yù)測(cè)到的PTEN作為miR-93-5p的候選靶基因,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,外泌體穿梭miR-93-5p顯著抑制了受體EC9706細(xì)胞中PTEN的蛋白翻譯過(guò)程,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示miR-93-5p與野生型PTEN 3'UTR載體共轉(zhuǎn)染組的熒光素酶活性低于其他各組,PTEN下游周期相關(guān)基因P21和CyclinD1的蛋白水平均顯著降低。加入PI3K/Akt抑制劑LY294002后,外泌體穿梭miR-93-5p的促受體EC9706細(xì)胞增殖能力明顯減弱,G1/S期阻滯趨勢(shì)亦有所減弱,p21和CyclinD1的蛋白表達(dá)分別恢復(fù)了 26.71%和10.33%。4.外泌體穿梭miR-21-5p對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究4.1 miR-21-5p通過(guò)外泌體傳遞對(duì)受體細(xì)胞HUVEC血管形成的影響將Cy3-miR-21-5p mimics轉(zhuǎn)染的供體EC9706細(xì)胞與受體細(xì)胞HUVEC共培養(yǎng)24h后,鏡下觀察顯示大多數(shù)HUVEC細(xì)胞中均可見(jiàn)紅色熒光,miR-21-5p mimics轉(zhuǎn)染組HUVEC細(xì)胞中miR-21-5p的表達(dá)水平為miR-NC組的1.23倍,提示miR-21-5p可通過(guò)外泌體傳遞進(jìn)入受體細(xì)胞HUVEC。細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,miR-21-5pmimics轉(zhuǎn)染組的受體細(xì)胞HUVEC的增殖率(%)顯著高于miR-NC組(61.01±11.88vs.51.60±10.70,P0.05);遷移能力檢測(cè)結(jié)果顯示,miR-21-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體細(xì)胞HUVEC的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯多于miR-NC組(122.10±16.13vs.79.70±7.75,P0.05);新生血管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-21-5p組受體細(xì)胞HUVEC的血管總長(zhǎng)度、血管成環(huán)數(shù)、血管分支點(diǎn)數(shù)目分別是miR-NC組的1.12、1.17、1.17 倍。4.2外泌體穿梭miR-21-5p對(duì)受體細(xì)胞HUVEC血管形成影響的機(jī)制研究結(jié)合已有的文獻(xiàn)報(bào)道,選擇四個(gè)靶基因預(yù)測(cè)軟件均可預(yù)測(cè)到且與腫瘤血管形成密切相關(guān)的PTEN作為候選靶基因,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示在HUVEC細(xì)胞中miR-21-5p能與野生型PTEN3'UTR區(qū)結(jié)合,將miR-21-5p過(guò)表達(dá)的EC9706與HUVEC共培養(yǎng)后,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示外泌體穿梭miR-21-5p可在轉(zhuǎn)錄后水平抑制PTEN的蛋白表達(dá),受體細(xì)胞HUVEC中PTEN下游的p-Akt(Ser473)表達(dá)增加了 14.18%、p-eNOS(Ser1177)表達(dá)降低了 42.13%,HUVEC上清中NO含量無(wú)明顯改變。加入LY294002后,p-Akt(Ser473)和p-eNOS(Ser1177)的表達(dá)水平均有所恢復(fù),而加入eNOS抑制劑L-NAME后,p-Akt(Ser473)并未變化,但p-eNOS(Ser1177)表達(dá)水平恢復(fù)了 28.08%,同時(shí)發(fā)現(xiàn)NO下游增殖相關(guān)蛋白p-Erk1/2(Thr202/Tyr204)表達(dá)降低并受LY294002和L-NAME的影響,遷移相關(guān)基因MMP9的mRNA水平有降低的趨勢(shì)。5.外泌體穿梭miRNAs對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞自噬調(diào)控的初步探索鏡下觀察顯示THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA作用48h后由"葡萄串"樣成團(tuán)懸浮生長(zhǎng)變?yōu)橘N壁生長(zhǎng),繼續(xù)經(jīng)人重組IL-4序貫作用48h后,細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)不規(guī)則形,部分伸出偽足,細(xì)胞間連接形成,符合TAM的形態(tài)學(xué)特征。將miR-21-5p和miR-93-5p mimics轉(zhuǎn)染的EC9706細(xì)胞與誘導(dǎo)成功的TAM體外共培養(yǎng),實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-21-5p mimics轉(zhuǎn)染組受體細(xì)胞TAM中ATG12和BECN1 mRNA表達(dá)水平分別是miR-NC組的126、1.63倍,miR-93-5p組受體細(xì)胞TAM中BECN1 mRNA表達(dá)水平是miR-NC的1.34倍,而其余自噬相關(guān)基因(ATG5、SQSTM1、LC3A和LC3B)的mRNA表達(dá)水平無(wú)組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。初步研究結(jié)論1.本研究利用差速結(jié)合超速離心法成功從食管癌細(xì)胞EC9706培養(yǎng)上清中分離出了外泌體,采用Solexa高通量測(cè)序技術(shù)分別從EC9706細(xì)胞及其分泌外泌體中識(shí)別出342、48個(gè)已知人類miRNAs,已知成熟miRNAs在細(xì)胞中的表達(dá)水平均高于外泌體,另外在EC9706細(xì)胞及其分泌外泌體中還分別發(fā)現(xiàn)了 64、32個(gè)新miRNAs,在兩者共同表達(dá)的12個(gè)新miRNAs中,8個(gè)在外泌體中表達(dá)上調(diào),4個(gè)表達(dá)下調(diào)。2.采用微陣列miRNA芯片技術(shù)在食管癌患者和健康對(duì)照者血漿中共識(shí)別了 20個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,經(jīng)擴(kuò)大人群樣本量的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)miR-21-5p和miR-93-5p在食管癌患者血漿中高表達(dá),兩者的表達(dá)上調(diào)均可增加食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),且對(duì)食管癌具有一定的診斷價(jià)值,具有成為食管癌早期診斷標(biāo)志物的潛力,但由于靈敏度和特異度并不高,尚需擴(kuò)大樣本量以進(jìn)行更深入的分析。3.在食管癌微環(huán)境中,供體食管癌細(xì)胞EC9706來(lái)源的外泌體穿梭miR-21-5p可能通過(guò)自分泌的方式與其靶基因PDCD4共同參與調(diào)控影響受體EC9706細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲過(guò)程;而供體細(xì)胞EC9706來(lái)源的外泌體穿梭miR-93-5p則可能通過(guò)PTEN/PI3K/Akt信號(hào)途徑參與調(diào)控受體EC9706細(xì)胞的周期分布和增殖能力。4.供體細(xì)胞EC9706來(lái)源的外泌體穿梭miR-21-5p可能通過(guò)旁分泌的方式激活PTEN/Akt/eNOS/NO信號(hào)通路從而參與調(diào)控受體細(xì)胞HUVEC的增殖、遷移以及新生血管形成過(guò)程,并影響下游增殖和遷移相關(guān)基因的表達(dá)。5.供體細(xì)胞EC9706來(lái)源的外泌體穿梭miR-21-5p和miR-93-5p可能通過(guò)影響自噬相關(guān)基因(ATG12和BECN1)的表達(dá)而調(diào)節(jié)TAM的自噬水平,外泌體穿梭miR-21-5p和miR-93-5p在食管癌微環(huán)境中的生物功能學(xué)及其機(jī)制研究,豐富了細(xì)胞間信息交流的途徑,增加了細(xì)胞間通訊的復(fù)雜性,是對(duì)傳統(tǒng)細(xì)胞間通訊方式的補(bǔ)充。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
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本文編號(hào)：2012180