本文選題：重樓 + 胃癌細(xì)胞　； 參考：《暨南大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究目的:研究重樓活性單體PP-26對人胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用,并探討其作用機(jī)制,以期為重樓活性單體PP-26的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法和研究內(nèi)容:1.MTT法和細(xì)胞克隆形成抑制實(shí)驗(yàn)檢測不同劑量PP-26對人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞的增殖抑制作用;2.Annexin V-FITC/PI雙染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測胃癌細(xì)胞凋亡水平的變化,Hoechst33258染色檢測PP-26對人胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變;3.JC-1染色法檢測PP-26對人胃癌細(xì)胞線粒體膜電位的影響,蛋白免疫印跡法(westernblotting)檢測PP-26對胃癌細(xì)胞Bcl-2家族蛋白以及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響,用caspases抑制劑(Z-VAD-fmk)抑制凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)檢測PP-26對胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響,探討其增殖抑制作用與細(xì)胞線粒體凋亡途徑是否存在聯(lián)系;4.Western blotting檢測PP-26對胃癌細(xì)胞Akt蛋白表達(dá)水平的影響,探討其增殖抑制作用與Akt信號通路之間的聯(lián)系。研究結(jié)果:1.MTT法檢測發(fā)現(xiàn),PP-26對人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞的細(xì)胞毒性相對高于正常肝L02細(xì)胞以及人胚腎HEK293細(xì)胞,MGC-803細(xì)胞48與72h IC50分別為:2.45±0.11、1.57±0.07μmol/L;BGC-823細(xì)胞72 h IC50分別為:2.41±0.08μmol/L;人正常肝L02細(xì)胞與人胚腎HEK-293細(xì)胞24 h、48 h與72 h均未檢測出IC50值。細(xì)胞克隆形成抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),1~1.25μmol/L PP-26作用人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞7d后,細(xì)胞集落數(shù)量明顯減少,細(xì)胞的克隆增殖能力受到抑制。2.Annexin V-FITC/PI雙染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),不同濃度PP-26作用人胃癌MGC-803 24 h與BGC-823細(xì)胞48 h后,隨著藥物濃度增加,細(xì)胞的總凋亡水平隨之增加。對兩種腫瘤細(xì)胞采用Hoechst33258染色及熒光顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)PP-26作用人胃癌MGC-803 24 h與BGC-823細(xì)胞48 h后,細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變,細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、裂解,部分形成凋亡小體,說明PP-26作用人胃癌MGC-803 24 h與BGC-823細(xì)胞48h后,引起腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。3.JC-1法檢測顯示,PP-26作用人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞后,熒光顯微鏡下觀察呈高綠低紅熒光,說明細(xì)胞線粒體膜電位下降。Western blotting檢測顯示,PP-26作用人胃癌MGC-803細(xì)胞24 h與BGC-823細(xì)胞48 h后,凋亡調(diào)控蛋白Bcl-x L、Mcl-1均表達(dá)下降,Bax表達(dá)增加;另外,MGC-803細(xì)胞中Bak表達(dá)增加,BGC-823細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)下降。凋亡相關(guān)蛋白Caspase9、Caspase3與PARP表達(dá)下降,cleavedCaspase3與cleaved PARP出現(xiàn)表達(dá)增加,說明PP-26作用人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞后,線粒體凋亡途徑被激活,誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。4.Western blotting檢測顯示,不同濃度及時間梯度PP-26作用人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞后,Phospho-Akt蛋白的表達(dá)水平均下降,其下游蛋白GSK-3β磷酸化水平受到抑制,說明PP-26通過抑制Akt信號通路介導(dǎo)線粒體途徑以及細(xì)胞凋亡通路的活化。結(jié)論:1.重樓活性單體PP-26對人胃癌MGC-803及BGC-823細(xì)胞表現(xiàn)出增殖抑制作用,對人正常肝L02細(xì)胞與人胚腎HEK293細(xì)胞具有相對較弱的細(xì)胞毒性。2.重樓活性單體PP-26通過抑制Akt信號通路,激活線粒體凋亡途徑,從而發(fā)揮對人胃癌MGC-803與BGC-823細(xì)胞的增殖抑制作用。
[Abstract]:The inhibitory effect of PP - 26 on human gastric cancer cell apoptosis was studied by MTT assay and MTT assay . The results showed that the inhibitory effect of PP - 26 on the expression of Bcl - 2 family protein and apoptosis - related protein in human gastric cancer cells was detected by MTT assay . The expressions of Bcl - xL and Bcl - 2 in human gastric cancer MGC - 803 cells were decreased and the expression of Bcl - 2 in human gastric cancer MGC - 803 cells was inhibited by Western blotting .
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：2000808