本文選題：胰腺癌 + sema3c��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景與意義最近的流行病學(xué)研究表明,胰腺導(dǎo)管腺癌是惡性程度高,致死率高,預(yù)后極差的惡性腫瘤。隨著環(huán)境污染、生活節(jié)奏的加快、診斷手段的改進(jìn),胰腺癌的發(fā)病率越來越高。胰腺癌的5年生存率低于6%,且確診后大部分患者已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,只有約20%的病人有手術(shù)機(jī)會[1,41]。多種因素導(dǎo)致胰腺癌患者的低生存期,其中最主要的因素是早期診斷方式的缺乏,大部分患者確診時已經(jīng)屬于中晚期,85%的患者確診時已經(jīng)并發(fā)有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,失去了手術(shù)切除的機(jī)會,即使手術(shù)切除5年生存率也只有25%[1,3]。尸檢發(fā)現(xiàn),90%胰腺癌患者并發(fā)有遠(yuǎn)處器官臟器的轉(zhuǎn)移[42]。因此,研究胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,并研發(fā)新的早期診斷標(biāo)志物成為現(xiàn)階段腫瘤生物研究的熱點(diǎn)。信號素是調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、形態(tài)、功能以及細(xì)胞間相互作用的可溶性蛋白質(zhì)家族,其主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和胞膜上[6]。在哺乳動物中已經(jīng)有20種信號素,并且分為五類(信號素3-7)[43]。所有的信號素都具有由約500個氨基酸組成的氨基末端sema結(jié)構(gòu)域[44]。信號素semaphorin的大部分效應(yīng)是由信號叢蛋白plexin介導(dǎo)的,信號叢蛋白是一組九個跨膜受體,可以細(xì)分為四類,叢蛋白A-D。信號素semaphorin和叢蛋白plexin廣泛表達(dá)于哺乳動物體內(nèi),但是兩個蛋白家族的成員通常具有特異性的表達(dá)模式。信號素-神經(jīng)叢系統(tǒng)在發(fā)育期間和成年生物體內(nèi)涉及多種作用,特別是在神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和血管生成期間[7,45-49]。在過去的10年中,對信號素神經(jīng)叢蛋白在分子和細(xì)胞功能中的作用機(jī)制有一定的研究,其中許多信號素叢蛋白在特定的疾病中起著關(guān)鍵性的作用。阻斷信號素神經(jīng)叢信號傳導(dǎo)的效應(yīng)分析通常使用缺乏特定信號素或神經(jīng)叢素的敲除小鼠模型,或RNA干擾技術(shù)抑制信號素或神經(jīng)叢表達(dá)的動物模型[50]。目前小分子藥物和各種生物制劑也已經(jīng)在臨床前疾病模型中開發(fā)和測試,這些最新的發(fā)現(xiàn)在越來越多文獻(xiàn)中報道,主要闡明阻斷或者促進(jìn)信號素神經(jīng)叢樣信號傳導(dǎo)以預(yù)防或治療特定疾病的機(jī)制。在過去五年中,在信號素和神經(jīng)叢蛋白的結(jié)構(gòu)方面的研究也取得了一定的進(jìn)展,信號素和神經(jīng)叢蛋白的sema結(jié)構(gòu)域之間的結(jié)合界面的研究,促進(jìn)了信號素神經(jīng)肽相互作用特異機(jī)制的研究。信號素和神經(jīng)叢蛋白在調(diào)節(jié)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移,以及在骨轉(zhuǎn)移和微血管疾病中起著中樞作用,并且能控制組織的再生,它們還在炎癥、自身免疫和其他免疫性疾病中起到關(guān)鍵性的作用。semaphorin3s是分泌型蛋白,主要包括semaphorin3a、semaphorin3b、semaphorin3c、semaphorin3d、semaphorin3e、semaphorin3F等。其中大部分semaphorin起到抑制腫瘤生長的作用,如sema3a、sema3b、sema3e、sema3F等。研究發(fā)現(xiàn)sema3c在多種腫瘤組織中高表達(dá),并起到促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的作用,如胃癌、肝癌、乳腺癌、口腔腫瘤等[9,13,51,52]。Sema3c的表達(dá)還和胃癌、乳腺癌的預(yù)后成正相關(guān)[17,20]。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的研究中發(fā)現(xiàn),sema3c能促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及卷曲形成血管,因此和腫瘤內(nèi)新生血管的形成密切相關(guān)[18,53]。近期的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),full-length sema3c能抑制腫瘤淋巴管的形成及轉(zhuǎn)移。綜上所述,sema3c可能在不同的腫瘤中具有不同的作用,但是其具體的分子調(diào)控機(jī)制及臨床意義還有待研究。目前關(guān)于sema3c在胰腺導(dǎo)管腺癌中的作用及機(jī)制還沒有相關(guān)文獻(xiàn)報道。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),是指上皮細(xì)胞在特定的病理生理情況下向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象。在多種腫瘤的進(jìn)展過程中,EMT和腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其中包括肝癌、胃癌、胰腺癌等消化道腫瘤[54]。EMT時會導(dǎo)致相關(guān)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)的減少,而致間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白的表達(dá)增加[55]。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中,EMT可能激活一種類似胚胎發(fā)育的過程,為細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移提供能力,Herman等研究表明,在前列腺癌細(xì)胞系中過表達(dá)sema3c后,會下調(diào)兩個重要的上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cadherin和α-catenin,而使細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)。因此sema3c可能通過調(diào)控EMT促進(jìn)胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。多個信號通路在EMT調(diào)節(jié)腫瘤的進(jìn)展中起著重要作用,如βWnt/β-catenin、JAK/STAT3,NF-κBκ和ERK1/2信號通路。研究表明,ERK1/2信號通路在EMT誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲過程中起著重要的作用,且在腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移以及EMT過程中也起著關(guān)鍵性作用[28]。在多種腫瘤中ERK1/2的磷酸化水平均增加,其中包括胰腺癌。javle等研究發(fā)現(xiàn),胰腺癌中ERK1/2磷酸化的增強(qiáng),以及EMT過程與患者的預(yù)后密切相關(guān)[40]。因此在胰腺癌中,ERK1/2信號通路可能參與調(diào)控EMT過程。研究目的:1.檢測sema3c在胰腺癌腫瘤組織及胰腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。2.研究sema3c在胰腺癌腫瘤組織中的表達(dá)和臨床的相關(guān)性,并分析其在腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移中的作用。3.觀察sema3c是否通過調(diào)控EMT進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。4.探討ERK1/2信號通路是否在sema3c調(diào)控胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及EMT的過程中起著一定的作用。研究方法:1.首先通過RT-PCR,q RT-PCR和Westernblot檢測sema3c在胰腺癌腫瘤組織及正常胰腺組織中的表達(dá)情況,RT-PCR,q RT-PCR檢測sema3c在胰腺癌細(xì)胞株As PC-1,Bx PC-3,PANC-1,CFPAC-1和Hs766T中的表達(dá)水平。通過免疫組化觀察sema3c在胰腺癌腫瘤組織中的表達(dá)和定位情況,并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析其與TNM分期、腫瘤大小、患者年齡和患者術(shù)后生存期及復(fù)發(fā)的關(guān)系。2.通過慢病毒轉(zhuǎn)染干擾sema3c在胰腺癌細(xì)胞株Bx PC-3中的表達(dá),并通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達(dá)sema3c在胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1中的表達(dá)。轉(zhuǎn)染后,通過CCK8試劑盒檢測各組細(xì)胞的增殖情況,同時利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組細(xì)胞的凋亡情況。3.通過Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,并通過Western blot檢測各組細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白α-catenin、E-cadherin,以及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白N-cadherin和ZEB2的表達(dá)情況。4.免疫組化檢測ERK1/2在胰腺癌腫瘤組織中的磷酸化情況,并通過linear regressin方法分期其表達(dá)與sema3c表達(dá)的相關(guān)性。用ERK1/2信號通路抑制劑U0126刺激胰腺癌細(xì)胞后,用CCK8試劑盒檢測各組細(xì)胞的增殖情況,同時利用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲能力,并通過Western blot檢測各組細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白α-catenin、E-cadherin,以及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白N-cadherin和ZEB2的表達(dá)情況。5.通過NOD/SCID老鼠的成瘤實(shí)驗(yàn)觀察sema3c在小鼠體內(nèi)對胰腺癌細(xì)胞成瘤的影響。研究結(jié)果:1.Sema3c在胰腺癌腫瘤組織中的表達(dá)升高,且在不同胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平不一致,在Bx PC-3中的表達(dá)最高,在CFPAC-1中的表達(dá)最低。2.Sema3c在胰腺癌腫瘤組織中的表達(dá)水平和TNM分期成正相關(guān),與患者術(shù)后生存期成負(fù)相關(guān)。3.Sema3c能促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖,并抑制胰腺癌細(xì)胞的凋亡。4.Sema3c可能通過調(diào)控EMT促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。5.Sema3c通過ERK1/2信號通路調(diào)控胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及EMT。6.在小鼠體內(nèi),sema3c能夠促進(jìn)腫瘤的生長。研究結(jié)論:Sema 3c在胰腺癌中過表達(dá)且與臨床具有一定的相關(guān)性,并通過ERK1/2信號通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:The recent epidemiological studies on the background and significance showed that pancreatic ductal adenocarcinoma was a malignant tumor with high malignancy , high mortality and poor prognosis . The 5 - year survival rate of pancreatic cancer was lower than 6 % . Most of the patients were diagnosed with distant metastasis . Therefore , the molecular mechanism of the occurrence , development and metastasis of pancreatic cancer has been studied , and new early diagnostic markers have become the focus of tumor biology research at present . There are already 20 signals in mammals and are divided into five classes ( signal 3 - 7 ) and 43 buds . All of the signal elements have an amino - terminal - terminal - domain structure 44 composed of about 500 amino acids . In the past 10 years , the signaling - nerve plexus system plays a key role in molecular and cellular functions , especially in the nervous system , immune system and angiogenesis . In the past five years , the expression of signal and nerve plexus proteins plays a pivotal role in regulating the growth and metastasis of tumor cells , such as gastric cancer , liver cancer , breast cancer , oral tumor and so on . EMT results in a decrease in the expression of marker proteins in the associated epithelial cells , while the expression of the interstitial cell marker protein is increased by 55 擄 . In the course of tumor genesis and development , EMT may activate a similar embryonic development process , which provides the ability for the migration and metastasis of the cells . The study shows that the two important epithelial cell markers E - cadherin and 偽 - catenin can be regulated by regulating EMT . Therefore , it plays an important role in EMT - induced tumor cell migration and invasion . The phosphorylation level increased , including pancreatic cancer , in a variety of tumors , including pancreatic cancer . Studies in javle et al . have found that the enhancement of the / 2 phosphorylation in pancreatic cancer , as well as the EMT process , is closely related to the prognosis of the patient . The expression of 偽 - catenin , E - cadherin , and the expression of N - cadherin , E - cadherin in pancreatic cancer cell line were investigated by means of immunohistochemistry .
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.9

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1 丁曉潔;李多;黃新偉;付娟娟;潘s，

本文編號：2000613