本文選題：循環(huán)腫瘤細(xì)胞 + 免疫磁珠法�。� 參考：《中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》2017年19期

【摘要】：目的建立有效獲取腫瘤患者外周血中單個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)的方法。方法預(yù)先將經(jīng)Di I染色的SW480細(xì)胞混入健康成人的抗凝全血中,分別單獨(dú)采用密度梯度離心(Onco Quick)、淋巴細(xì)胞分離術(shù)(Ficoll)、"玫瑰花富集"(Rosette Sep)、免疫磁珠(CELLection)及淋巴細(xì)胞分離術(shù)聯(lián)合免疫磁珠聯(lián)用(Ficoll+CELLection)富集這些腫瘤細(xì)胞,統(tǒng)計(jì)回收率并觀察純度以進(jìn)行比較。再使用顯微操作儀捕獲單個(gè)NCI-H460、HCT-116、DLD-1、SW480、TF-1等探測(cè)細(xì)胞及從肝癌患者外周血中富集獲得的CTC,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)技術(shù)分析單細(xì)胞的CD45 m RNA表達(dá)水平。結(jié)果 5組方法的腫瘤細(xì)胞回收率分別為(52.5±3.5)%、(46.6±1.9)%、(36.9±5.5)%、(14.1±3.1)%和(8.8±1.4)%;單因素方差分析表明,5組方法回收率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);SNK-q檢驗(yàn)表明,除Onco Quick組和Ficoll組(P0.05)、CELLection組和Ficoll+CELLection組(P0.05)外,其他各組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在熒光顯微鏡下觀察富集的腫瘤細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)CELLection組及Ficoll+CELLection組的純度更高。q RT-PCR結(jié)果顯示,總循環(huán)數(shù)60,GAPDH Ct均值為(29.94±0.59),除了單個(gè)TF-1細(xì)胞的CD45 Ct均值為(34.21±0.22),其他單個(gè)探測(cè)細(xì)胞及CTC的CD45均無(wú)表達(dá)。結(jié)論 CELLection即免疫磁珠法配合顯微操作能有效獲取肝癌患者外周血中的單個(gè)CTC并保留其原始的分子特性,適用于后續(xù)單細(xì)胞分析與研究。該方法為CTC運(yùn)用于剖析腫瘤分子的特征、評(píng)價(jià)靶向治療藥物的藥效以及監(jiān)控腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移等臨床問(wèn)題奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to establish an effective method for obtaining circulating tumor cells from peripheral blood of tumor patients. Methods SW480 cells stained with Di I were premixed into the whole anticoagulant blood of healthy adults. These tumor cells were enriched by density gradient centrifugation Onco Quickco, Ficollus, Rosette Septte, CELLection. and Ficoll CELLection. the recovery rate was analyzed and the purity was compared. The single NCI-H460 HCT-116DLD-1 SW480 TF-1 and CTCs enriched in peripheral blood of patients with liver cancer were captured by micromanipulation. The expression of CD45 m RNA in single cells was analyzed by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR). Results the recoveries of tumor cells in the five groups were 46.6 鹵1.9 and 14.1 鹵3.1% and 8.8 鹵1.4%, respectively. The results of ANOVA showed that there was a significant difference in the recovery rates between the five groups (P 0.05SNK-q test), except for the Onco Quick group and the Ficoll group (P0.05 CELLection group and Ficoll CELLection group P0.05). The differences among other groups were statistically significant (P 0.05). The enriched tumor cells were observed under fluorescence microscope. The results showed that the purity of CELLection group and Ficoll CELLection group was higher than that of Ficoll CELLection group. The mean value of GAPDH Ct was 29.94 鹵0.59. except for the CD45 Ct of a single TF-1 cell, there was no expression of CD45 in any single detected cell or CTC. Conclusion CELLection (immunomagnetic bead method combined with micromanipulation) can effectively obtain single CTC from peripheral blood of patients with liver cancer and retain its original molecular characteristics. It is suitable for subsequent single-cell analysis and research. This method can be used to analyze the characteristics of tumor molecules, evaluate the efficacy of targeted drugs and monitor the recurrence and metastasis of tumor.
【作者單位】： 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院(四川省人民醫(yī)院)消化內(nèi)科;地奧九泓制藥廠前沿生物技術(shù)研究室;
【基金】：四川省科技廳資助項(xiàng)目(No:2014TD0028)
【分類號(hào)】：R73-3

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本文編號(hào)：1981798