miRNA-302b在結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞“干性”維持中的作用
本文選題:結(jié)腸癌 + 微小RNA-b。 參考:《腫瘤防治研究》2017年08期
【摘要】:目的探討miRNA-302b在結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞"干性"維持中的作用及可能機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29,轉(zhuǎn)染miRNA-302b模擬物(miRNA-302b mimics),同時(shí)以未轉(zhuǎn)染組(control)和陰性模擬物轉(zhuǎn)染組(negative control-mimics,NC-mimics)作為對(duì)照,采用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(real-time PCR)檢測(cè)HT-29細(xì)胞結(jié)腸癌"干性"標(biāo)志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2mRNA的表達(dá)情況;采用蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)以上"干性"標(biāo)志蛋白表達(dá)的變化;采用克隆形成實(shí)驗(yàn)及干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)分別觀察HT-29細(xì)胞克隆形成和細(xì)胞球形成能力的變化。結(jié)果 Realtime PCR結(jié)果示,miR-302b mimics轉(zhuǎn)染HT-29細(xì)胞48 h,"干性"標(biāo)志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2 mRNA表達(dá)一致性上調(diào)(P0.05);Western blot結(jié)果示Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2蛋白表達(dá)也上調(diào)(P0.05)?寺⌒纬蓪(shí)驗(yàn)及干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)結(jié)果示,miR-302b mimics轉(zhuǎn)染后HT-29細(xì)胞克隆形成和細(xì)胞球形成能力增強(qiáng),與control組和NC-mimics組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 miRNA-302b可通過(guò)上調(diào)"干性"標(biāo)志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2的表達(dá)促進(jìn)HT-29細(xì)胞的克隆形成和細(xì)胞球形成能力,從而在結(jié)腸癌"干性"維持中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Objective to investigate the role and possible mechanism of miRNA-302b in the maintenance of colon cancer HT-29 cells. Methods Human colon cancer cell line HT-29 was cultured in vitro and transfected with miRNA-302b mimic RNA-302b mimicsl. The negative control-mimicsNC-mimicswere used as control group and negative control group. Real-time PCR was used to detect the expression of "dry" marker Ascl2Lgr5, Oct4 and Sox2mRNA in HT-29 cells, and Western blotting was used to detect the expression of the above "dry" markers. Clone formation test and stem cell ball forming test were used to observe the changes of HT-29 cell clone formation and cell ball formation ability. Results the results of Realtime PCR showed that the expression of Ascl2Lgr5Oct4 and Sox2 mRNA were up-regulated in HT-29 cells 48 h after transfection with miR-302b mimics. Western blot showed that the protein expression of Ascl2Lgr5OT4 and Sox2 was also up-regulated. The results of clone formation test and stem cell formation test showed that the ability of HT-29 cell clone formation and cell ball formation was enhanced after transfection of miR-302b mimics, and there was significant difference compared with control group and NC-mimics group (P 0.05). Conclusion miRNA-302b can promote the clone formation and cell ball formation of HT-29 cells by upregulating the expression of ASCL 2, Lgr5, Oct4 and Sox2, thus playing an important role in the maintenance of "dry" colon cancer.
【作者單位】: 遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科貴州省消化病研究所;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(81560467) 貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目(黔科合J字LKZ[2013]18號(hào)) 貴州省高層次人才科研條件特助經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目(TZJF-2011-32) 遵義醫(yī)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金(F-572)
【分類(lèi)號(hào)】:R735.35
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