本文選題：肝內(nèi)膽管癌 + 微RNAs　； 參考：《腫瘤》2017年07期

【摘要】：目的:研究微RNA-490-5p(microRNA-490-5p,miR-490-5p)在人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況,并探討其對(duì)肝內(nèi)膽管癌RBE細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響及可能的分子機(jī)制。方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)miR-490-5p在5對(duì)肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織及其癌旁正常組織中的表達(dá)水平。利用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法將miR-490-5p模擬物及其陰性對(duì)照轉(zhuǎn)入人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌RBE細(xì)胞中。隨后,采用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)以及Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RBE細(xì)胞遷移能力的變化,Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RBE細(xì)胞侵襲能力的變化;最后,通過CCK-8法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和FCM法檢測(cè)RBE細(xì)胞增殖及凋亡的變化。應(yīng)用在線miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)miR-490-5p的靶基因,并采用蛋白印跡法對(duì)預(yù)測(cè)的靶基因進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:miR-490-5p在人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中明顯下調(diào)(P0.05)。與陰性對(duì)照組相比,miR-490-5p模擬物轉(zhuǎn)染組RBE細(xì)胞的增殖、克隆形成能力和凋亡均無明顯變化(P值均0.05);劃痕愈合實(shí)驗(yàn)以及Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示,RBE細(xì)胞的遷移能力被明顯抑制(P值均0.05);Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示,RBE細(xì)胞的侵襲能力被明顯抑制(P值0.05)。Target Scan網(wǎng)站預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子FBJ骨肉瘤癌基因(FBJ osteosarcoma oncogene,c-Fos)可能是miR-490-5p的潛在靶基因;蛋白質(zhì)印跡法證實(shí),miR-490-5p模擬物轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中c-Fos蛋白的表達(dá)水平明顯下調(diào)(P0.05)。結(jié)論:miR-490-5p在人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中低表達(dá),而且其可能通過下調(diào)c-Fos的表達(dá)來調(diào)控人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌RBE細(xì)胞的遷移和侵襲。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of microRNA-490-5pnmmiR-490-5p in human intrahepatic cholangiocarcinoma and its effect on the invasion and migration of RBE cells and its possible molecular mechanism. Methods: the expression of miR-490-5p in 5 pairs of intrahepatic cholangiocarcinoma and its adjacent normal tissues was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. MiR-490-5p mimics and their negative controls were transfected into human intrahepatic cholangiocarcinoma RBE cells by liposome transient transfection. Then, the change of migration ability of RBE cells was detected by scratch healing test and Transwell chamber migration test. Finally, the change of RBE cell invasion ability was detected by CCK-8 assay. The proliferation and apoptosis of RBE cells were detected by plate clone formation assay and FCM assay. The target gene of miR-490-5p was predicted by online miRNA target gene prediction software, and the predicted target gene was verified by Western blotting. Results: 1 miR-490-5p significantly down-regulated P0.05 in human intrahepatic cholangiocarcinoma. Compared with the negative control group, the proliferation of RBE cells was observed in the RBE cells transfected with mimics of miR-490-5p. The results of scratch healing test and Transwell chamber migration test showed that the migration ability of Transwell cells was significantly inhibited. The ability of cell invasion was significantly inhibited by 0.05).Target Scan website. It was predicted that the transcription factor FBJ osteosarcoma oncogene (FBJ osteosarcoma oncogene c-Fos) might be a potential target gene of miR-490-5p. Western blotting showed that the expression level of c-Fos protein was significantly down-regulated in the cells transfected with the mimic of miR-490-5p. Conclusion the low expression of 1% miR-490-5p in human intrahepatic cholangiocarcinoma may regulate the migration and invasion of human intrahepatic cholangiocarcinoma RBE cells by down-regulating the expression of c-Fos.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院普外科;上海市膽道疾病研究中心;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院膽道疾病研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81272402)~~
【分類號(hào)】：R735.8

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本文編號(hào)：1959432