本文選題：FAM83D + 肺腺癌　； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分:FAM83D在肺腺癌中的表達(dá)特征及臨床意義的探索[目的]肺癌是目前世界上發(fā)病人數(shù)及死亡人數(shù)最多的惡性腫瘤。近年來(lái),肺腺癌發(fā)病率增長(zhǎng)迅速,甚至已超過(guò)肺鱗癌成為非小細(xì)胞肺癌最主要的病理類型。有研究表明,FAM83家族(Family with sequence similarity 83)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本研究旨在探索FAM83D成員在肺腺癌中的表達(dá)情況,并分析其表達(dá)與臨床病理分期間的關(guān)系以及與肺腺癌患者預(yù)后之間的相關(guān)性。[方法]應(yīng)用腫瘤基因組圖譜(the cancer genome atlas,TCGA)肺腺癌數(shù)據(jù)庫(kù)驗(yàn)證FAM83D在肺腺癌組織中表達(dá)顯著高于癌旁正常組織,且運(yùn)用Cox回歸分析探索了 FAM83D表達(dá)與肺腺癌患者總體生存之間的關(guān)系。后選取了江蘇省腫瘤醫(yī)院胸外科60例肺腺癌和癌旁正常組織標(biāo)本,使用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)方法與免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)染色的方法檢測(cè)FAM83D的表達(dá)情況并分析其表達(dá)與臨床病理表現(xiàn)的關(guān)系。[結(jié)果]TCGA肺腺癌數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果顯示:FAM83D在肺腺癌組織中的表達(dá)顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁正常肺組織,卡方檢驗(yàn)顯示FAM83D高表達(dá)與年齡沒(méi)有相關(guān)性(p=0.3164),但與更大的原發(fā)腫瘤(p0.0001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.0049)以及更高的TNM分期(p0.0001)正相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析顯示,腫瘤組織FAM83D高表達(dá)相較于低表達(dá)組,生存明顯下降(HR=1.890,p=0.0003)。綜合FAM83D表達(dá)水平、性別、T分期、N分期以及TNM分期等臨床參數(shù),多因素Cox回歸分析提示,FAM83D高表達(dá)(p=0.006)與更高階的TNM分期(p=0.012)是兩個(gè)影響肺腺癌病人總體生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。[結(jié)論]FAM83D在肺腺癌組織中高表達(dá),且肺腺癌組織FAM83D高表達(dá)提示著不良的預(yù)后。FAM83D可能參與了肺腺癌的惡性進(jìn)展。第二部分:FAM83D在肺腺癌中體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)和相關(guān)機(jī)制的探索[目的]FAM83D可能是一個(gè)潛在的促進(jìn)肺腺癌惡性表型的促癌基因。本研究旨在探討FAM83D蛋白在肺腺癌中的表達(dá),并分析其與肺腺癌惡性表型的關(guān)系及其潛在的調(diào)控機(jī)制,為肺腺癌的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。[方法]1.使用qRT-PCR方法和western blot法分別檢測(cè)肺腺癌細(xì)胞系中FAM83D的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。2.設(shè)計(jì)特異siRNA干擾FAM83D的表達(dá),體外功能實(shí)驗(yàn)探討FAM83D對(duì)腫瘤增殖、遷移能力及細(xì)胞周期、凋亡的影響。3.體內(nèi)裸小鼠移植瘤模型實(shí)驗(yàn)觀察FAM83D的干擾對(duì)肺腺癌細(xì)胞在裸小鼠皮下生長(zhǎng)的影響。4.運(yùn)用KEGG通路分析及GO富集分析預(yù)測(cè)FAM83D發(fā)揮作用的可能通路。5.使用qRT-PCR方法和western blot法檢測(cè)沉默F(xiàn)AM83D后相關(guān)細(xì)胞周期蛋白的的mRNA和蛋白的表達(dá)情況變化。6.進(jìn)行拯救實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證FAM83D與潛在靶基因的上下游關(guān)系。[結(jié)果]1.FAM83D在肺腺癌細(xì)胞系的表達(dá)明顯高于肺上皮正常細(xì)胞。沉默F(xiàn)AM83D后A549和H1299細(xì)胞株的增殖、遷移和侵襲能力明顯降低,并使細(xì)胞周期阻滯在G1期。2.裸小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)顯示,沉默F(xiàn)AM83D后腫瘤的生長(zhǎng)速度及體積均小于對(duì)照組。對(duì)移植瘤進(jìn)行免疫組化染色顯示,沉默F(xiàn)AM83D的實(shí)驗(yàn)組的Ki-67染色低于對(duì)照組(p0.05)。3.qRT-PCR和western blot結(jié)果顯示,沉默F(xiàn)AM83D后,細(xì)胞周期蛋白CCND1與CCNE1的表達(dá)也受到了明顯的抑制,而其它的細(xì)胞周期調(diào)控基因的表達(dá)沒(méi)有顯著差異。4.在沉默F(xiàn)AM83D的肺腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)CCND1或CCNE1可以部分拯救減弱的惡性表型。[結(jié)論]我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FAM83D在肺腺癌細(xì)胞系中高表達(dá),可促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖和遷移侵襲能力。FAM83D可能通過(guò)影響重要cyclin如CCND1、CCNE1的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)展,進(jìn)而發(fā)揮其癌基因的功能,因此FAM83D可能作為一個(gè)潛在的治療靶標(biāo),為未來(lái)肺腺癌的診治提供新的思路。
[Abstract]:In recent years , the incidence of lung adenocarcinoma increased rapidly , and the relationship between the expression and the prognosis of lung adenocarcinoma was analyzed . This study was conducted to investigate the relationship between tumor proliferation , migration and invasion ability of lung adenocarcinoma cell line . The results showed that the expression of the tumor growth , migration and invasion ability of lung adenocarcinoma cell line were significantly lower than those in control group .
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：1937256