背景肺癌是全球范圍內威脅人類生存的一大健康問題。在我國,男性患者中肺癌發(fā)病率居于所有癌癥的首位;女性患者中,僅次于乳腺癌居第2位[1]。同時,肺癌患者的死亡率居高不下,據(jù)世界衛(wèi)生組織預測,截至到2030年,全球每年將會有約250萬人死于肺癌。造成肺癌高死亡率的主要原因之一是一半以上的肺癌患者診斷時已是晚期(ⅢB期-Ⅳ期),此時,可供選擇的治療方案只有全身性化療和有限的靶向治療及免疫治療[2]。然而,在全身化療的情況下,肺癌患者的五年生存率仍低于15%。這種低存活率現(xiàn)象的原因之一是因為腫瘤患者對化療藥物的敏感性不同造成的。在化療前或化療中缺乏可靠的指標指導臨床醫(yī)師選擇最優(yōu)的化療藥物[3],仍是目前肺癌治療亟待解決的問題。因此,研究一個個體化、能充分體現(xiàn)患者個體特征進而指導臨床化療的手段成為一種必需。原代細胞培養(yǎng)是直接從機體獲取細胞、組織或器官進行體外培養(yǎng)。相對于一般研究所采用的成熟細胞系來說,原代培養(yǎng)的細胞可以更真實的反應機體的特征、更能代表患者的生物學和臨床特性[4-6]。傳統(tǒng)的肺癌原代培養(yǎng)是通過手術獲取組織標本,采用酶消化法或組織塊培養(yǎng)發(fā)進行原代培養(yǎng)[7-10]。然而多數(shù)肺癌患者診斷是已處于肺癌晚期,失去了手術治療的機會,因此原代培養(yǎng)的組織標本獲取受到限制。同時,組織來源的細胞進行原代培養(yǎng)時,細胞的生長環(huán)境發(fā)生較大變化,此時是否會在體外進行二次選擇有待探討。因此,組織來源的原代培養(yǎng)細胞用于檢測化療藥物敏感性的可行度尚待進一步研究確定。而本實驗嘗試對肺癌患者的腫瘤細胞進行體外培養(yǎng),考慮到多數(shù)患者診斷時已處于晚期,失去手術機會,因此選擇肺癌合并胸腔積液患者,獲取胸水中的腫瘤細胞,進行體外培養(yǎng)及鑒定,并檢測其在體外對化療藥物的敏感性,該方法簡單、安全,且更接近標本的生長環(huán)境,有望為下一步的個體化治療提供臨床依據(jù)。目的本實驗嘗試對肺癌患者的腫瘤細胞進行體外培養(yǎng),考慮到多數(shù)患者診斷時已處于晚期,失去手術機會,因此選擇肺癌合并胸腔積液患者,分離胸腔積液中的肺癌細胞進行體外培養(yǎng),通過免疫熒光和裸鼠皮下移植瘤模型的建立鑒定體外培養(yǎng)是否成功。采用MTS比色法檢測經(jīng)過鑒定的細胞系對臨床常用化療藥物的敏感性,通過與臨床資料對比,進一步判斷其是否具有預測腫瘤藥物敏感性、指導臨床治療的作用。方法與鄭州大學第一附屬醫(yī)院呼吸內科密切配合,無菌條件下收取最終診斷為“肺癌合并胸腔積液”的患者的胸水100mL于2個50mL離心管中,30分鐘內帶至實驗室。經(jīng)過處理后以含10%胎牛血清的DMEM/F12+GlutaMAX-l(1×)培養(yǎng)基在37℃,5%CO2,5%O2三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當細胞傳代至20代左右時,細胞具有相似的形態(tài)特征、可以穩(wěn)定的傳代。此時通過免疫熒光(Pan-CK、TTF-1、P53、Ki67)和裸鼠皮下移植瘤的方法檢測所培養(yǎng)的細胞是否確為腫瘤細胞。對經(jīng)鑒定確定為腫瘤細胞的細胞進行體外細胞增殖能力檢測。同時采用MTS比色發(fā)測定該細胞對臨床常用化療藥物順鉑、卡鉑、培美曲塞、吉西他濱、長春瑞濱、吉非替尼敏感性進行測定,對比其與臨床實際藥物敏感性是否一致。結果成功分離并培養(yǎng)肺腺癌細胞系1個,經(jīng)免疫熒光和裸鼠皮下移植瘤的方法鑒定為腫瘤細胞。化療藥物敏感性結果顯示該細胞系對培美曲塞、鉑類、吉非替尼均較敏感,對吉西他濱及長春瑞濱的敏感性則不及對照組。這與該患者的臨床治療效果基本一致。結論胸水可以作為原代細胞培養(yǎng)的標本來源,較易分離純化。該來源的肺癌細胞體外藥物敏感性實驗結果和臨床實際化療敏感性基本相符,有可能成為新的預測藥物敏感性、指導個體化用藥的工具。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 唐莉;人體外受精-胚胎移植中體外培養(yǎng)改良的研究進展[J];國外醫(yī)學(計劃生育分冊);2001年04期

2 劉琪,范永祥,張紹偉,葛正龍;人牙周膜成纖維細胞的體外培養(yǎng)[J];遵義醫(yī)學院學報;2003年04期

3 王皓;張靜生;;人臍靜脈內皮細胞的體外培養(yǎng)[J];中西醫(yī)結合心腦血管病雜志;2008年03期

4 趙雪;申麗潔;;不同時齡旋毛蟲新生幼蟲的體外培養(yǎng)和收集方法研究[J];中國病原生物學雜志;2008年09期

5 代杰文;胡冰;王昊;王松靈;;小鼠頜下腺器官體外培養(yǎng)研究[J];北京口腔醫(yī)學;2009年02期

6 龐富升;李松;胡江天;;體外培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞的方法及進展[J];昆明醫(yī)學院學報;2009年S2期

7 高紅;孫瑩璞;;竇前卵泡的分離與體外培養(yǎng)[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2010年02期

8 陳正仁;;體外培養(yǎng)瘧原蟲的討論總結[J];國外醫(yī)學參考資料.生物制品分冊;1978年01期

9 周喜榮;喻亮;;純自家血體外培養(yǎng)淋巴細胞轉化試驗報告[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年01期

10 蘇天成;;瘧原蟲體外培養(yǎng)的國外研究進展[J];湖北醫(yī)學院學報;1984年01期

相關博士學位論文 前10條

1 張倜然;低能量激光對體外培養(yǎng)干細胞及毛囊生長的促進作用及Wntl0b/β-catenin信號通路的實驗研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2017年

2 陳文娟;基于體外培養(yǎng)神經(jīng)元網(wǎng)絡的非線性動力學研究[D];華中科技大學;2012年

3 胡平平;腫瘤相關炎癥細胞的促腫瘤作用及機制研究[D];山東大學;2015年

4 聶小娟;表皮腫瘤中缺氧誘導因子-1α與血管生成相關蛋白表達關系的研究[D];山東大學;2016年

5 董玉良;鎘和五氯酚對原代培養(yǎng)鯽魚肝細胞毒性及聯(lián)合作用效應研究[D];武漢大學;2013年

6 張乃千;差異甲基化分析和抗癌藥物敏感性預測中的計算模型[D];上海師范大學;2016年

7 李巍;AF1q、CD44和circRNA在白血病中的作用及機制研究[D];山東大學;2017年

8 孫黎明;繁茂膜海綿原細胞的鑒別、分離純化和體外培養(yǎng)研究[D];中國科學院研究生院（大連化學物理研究所）;2006年

9 雷章;髓源抑制性細胞與肥大細胞向腫瘤趨化的分子機制與促瘤效應[D];華中科技大學;2010年

10 郭強;不同類型的巨噬細胞對腫瘤生長的影響及其機制[D];復旦大學;2007年

相關碩士學位論文 前10條

1 袁德祿;影響山羊精原干細胞分離純化和體外培養(yǎng)的因素研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

2 陳芳;神經(jīng)體外培養(yǎng)與軸突牽拉裝置的研制[D];華中科技大學;2015年

3 韓俊源;PCV2誘導體外培養(yǎng)PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10信號途徑的研究[D];南京農業(yè)大學;2014年

4 楊帆;EgM123抗血清對體外培養(yǎng)原頭蚴免疫殺傷研究[D];新疆農業(yè)大學;2015年

5 原敏;C型鈉肽對牛腔前卵泡體外生長發(fā)育作用的研究[D];西北農林科技大學;2016年

6 謝楊;豬臍靜脈血管內皮細胞體外培養(yǎng)研究[D];湖南農業(yè)大學;2015年

7 邢震宇;鎂離子對體外培養(yǎng)血管平滑肌細胞增殖和遷移的影響[D];河北醫(yī)科大學;2007年

8 張陽;體外培養(yǎng)人的骨髓間充質干細胞的生物安全性分析[D];廣西醫(yī)科大學;2011年

9 陳瑾;基質細胞衍生因子-1α對體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖的影響研究[D];福建醫(yī)科大學;2008年

10 劉石;酸性成纖維細胞生長因子對體外培養(yǎng)肌腱細胞增殖和量效關系的影響[D];中南大學;2007年

本文編號：1913613