本文選題：Semaphorin + 6D　； 參考：《承德醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：配體Semaphorin家族及其受體plexins蛋白最早被發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)軸突生長和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。近年來,研究發(fā)現(xiàn)其在心臟形態(tài)發(fā)生和腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也起著至關(guān)重要的作用。然而,其對腫瘤的調(diào)節(jié)機(jī)制還沒有得到明確的認(rèn)知。本研究發(fā)現(xiàn),Semaphorin 6d(Sema6D)及其受體plexin-A1在胃癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)異常增高,并且與血管內(nèi)皮生長因子受體2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor2,VEGFR2)的表達(dá)水平呈現(xiàn)正相關(guān)性。提示Sema6D和plexin-A1可能與胃癌組織中的腫瘤血管生成密切相關(guān)。進(jìn)一步結(jié)合對MGC803胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn),利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染敲低plexin-A1信號(hào)后,發(fā)現(xiàn)VEGFR2在m RNA和蛋白水平的表達(dá)情況也隨之變化。實(shí)驗(yàn)證實(shí)Sema6D可以識(shí)別并激活plexin-A1信號(hào),plexin-A1進(jìn)一步激活下游VEGFR2來調(diào)節(jié)影響腫瘤的血管生成。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Sema6D/plexin-A1/VEGFR2可能是一個(gè)涉及腫瘤血管生成的信號(hào)通路。因此,利用藥物靶向干擾該信號(hào)通路,進(jìn)而影響胃癌腫瘤血管生成,有望為胃癌治療提供一條新思路。目的:檢測Sema6D及其受體plexin-A1在胃癌組織中的表達(dá)情況和兩者對腫瘤血管生成的影響,并進(jìn)一步探究其調(diào)節(jié)腫瘤血管生成的分子機(jī)制。方法:1.利用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)技術(shù)檢測Sema6D及其受體plexin-A1在胃癌組織和癌旁正常胃粘膜組織中的mRNA表達(dá)情況。2.利用蛋白印跡(Western blot)技術(shù)檢測Sema6D及其受體plexin-A1在胃癌組織和癌旁正常胃粘膜組織中的蛋白表達(dá)情況。3.利用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)技術(shù)檢測三株胃癌細(xì)胞系和正常胃粘膜細(xì)胞系中plexin-A1、plexin-A2和plexin-A4的mRNA表達(dá)情況。4.利用免疫熒光(Immunofluorescence)技術(shù)檢測Sema6D及其受體plexin-a1在胃癌組織和癌旁正常胃粘膜組織中的表達(dá)和定位情況。5.利用免疫熒光染色檢測sema6d/plexin-a1分別和vegfr2在胃癌組織和癌旁正常胃粘膜中的共定位情況。6.用0、5、10μm濃度的異丙腎上腺素孵育胃癌細(xì)胞3個(gè)小時(shí)后,分別提取細(xì)胞的總rna和蛋白質(zhì);另外用5μm的異丙腎上腺素分別孵育胃癌細(xì)胞0、1、2、3、6小時(shí)后,收集細(xì)胞并提取總rna和蛋白質(zhì)。7.利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)干擾mgc803胃癌細(xì)胞中plexin-a1的表達(dá),檢測其對下游vegfr2表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1.實(shí)時(shí)定量pcr結(jié)果顯示,胃癌組織中sema6d的mrna表達(dá)水平明顯高于正常胃粘膜組織。蛋白印跡結(jié)果顯示,sema6d蛋白表達(dá)水平在癌組織明顯高于正常胃粘膜組織。2.在mgc803、hgc27和mnk45三株胃癌細(xì)胞系和ges-1正常胃粘膜細(xì)胞系中進(jìn)行rt-pcr,檢測幾個(gè)sema6d的受體plexin-a1、plexin-a2和plexin-a4的mrna表達(dá)情況。結(jié)果顯示,三株胃癌細(xì)胞系中plexin-a1表達(dá)水平比ges-1正常胃粘膜細(xì)胞系中明顯增高,而plexin-a2和plexin-a4在胃癌和正常胃粘膜細(xì)胞系中的表達(dá)水平無顯著差異。且在三株胃癌細(xì)胞系中plexin-a1的mrna表達(dá)水平均比plexin-a2和plexin-a4明顯增高。3.實(shí)時(shí)定量pcr結(jié)果顯示,胃癌組織中plexin-a1的mrna表達(dá)水平明顯高于正常胃粘膜組織。蛋白印跡結(jié)果顯示,plexin-a1蛋白表達(dá)水平在癌組織中也明顯增高。4.免疫熒光結(jié)果顯示,與正常胃粘膜組織比較,sema6d在胃癌組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)。相似的結(jié)果指出,plexin-a1也主要在胃癌組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)。5.免疫熒光染色檢測sema6d/plexin-a1分別與vegfr2在胃癌和癌旁正常胃粘膜組織的共同表達(dá)情況。結(jié)果顯示,在胃癌組織中sema6d與vegfr2在血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈現(xiàn)明顯的共定位現(xiàn)象,但在正常癌旁胃粘膜組中未發(fā)現(xiàn)上述現(xiàn)象。同樣的,plexin-a1和vegfr2的雙染現(xiàn)象在胃癌組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞中也十分明顯。6.異丙腎上腺素作用于胃癌mgc-803和hgc-27細(xì)胞后,實(shí)時(shí)定量pcr結(jié)果顯示,異丙腎上腺素可以刺激兩株胃癌細(xì)胞系中plexin-a1的mRNA表達(dá)。蛋白印跡結(jié)果顯示,異丙腎上腺素可以刺激兩株胃癌細(xì)胞系中plexin-A1蛋白水平的增加。異丙腎上腺素作用于MGC-803胃癌細(xì)胞系,實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡結(jié)果一致的發(fā)現(xiàn),plexin-A1的mRNA和蛋白水平的表達(dá)隨著異丙腎上腺素作用的時(shí)間增加而增加。7.隨著異丙腎上腺素處理MGC803和HGC27兩株胃癌細(xì)胞系時(shí)間的增加,實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡結(jié)果發(fā)現(xiàn)其也可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞VEGFR2的mRNA和蛋白水平的表達(dá)。8.利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)干擾MGC803胃癌細(xì)胞中plexin-A1的表達(dá)后,發(fā)現(xiàn)VEGFR2在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均明顯降低。重要的是,實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡結(jié)果一致性地指出,成功干擾plexin-A1的表達(dá)后,異丙腎上腺素不能再促進(jìn)VEGFR2在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)論:1.Sema6D及其受體plexin-A1在胃癌組織中高表達(dá),且主要定位在血管內(nèi)皮細(xì)胞中。2.Sema6D/plexin-A1可能通過調(diào)節(jié)VEGFR2信號(hào)進(jìn)而影響腫瘤血管生成。3.異丙腎上腺素促進(jìn)胃癌細(xì)胞plexin-A1和VEGFR2的表達(dá),且需要依賴于plexin-A1的表達(dá)來促進(jìn)VEGFR2的表達(dá)。
[Abstract]:The expression of Sema6D and its receptor plexin - A1 in gastric cancer tissues and normal gastric mucosa tissues was investigated .
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 魯艷杰;Semaphorin 6D及其受體plexin-A1在胃癌中的表達(dá)情況和其對腫瘤血管生成的影響[D];承德醫(yī)學(xué)院;2016年

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本文編號(hào)：1899749