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兩種培養(yǎng)基的培養(yǎng)體系對(duì)CIK細(xì)胞增殖和功能的影響

發(fā)布時(shí)間:2018-05-17 00:17

  本文選題:白血病 + 幼紅細(xì)胞。 參考:《重慶醫(yī)學(xué)》2017年02期


【摘要】:目的觀(guān)察細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)增殖情況,檢測(cè)CIK細(xì)胞的表面分子表型和體外對(duì)白血病細(xì)胞K562的殺傷作用。方法通過(guò)用H3培養(yǎng)基培養(yǎng)的分別來(lái)源于臍帶血和患者自體外周血分離的單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),添加重組人γ干擾素(IFN-γ)與CD3單抗,體外誘導(dǎo)CIK細(xì)胞,在培養(yǎng)的第7天分別加入H3培養(yǎng)基和T551培養(yǎng)基繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)至14d。計(jì)數(shù)觀(guān)察CIK細(xì)胞增殖能力,流式檢測(cè)細(xì)胞表面CD3、CD56的表達(dá)情況,CCK8法檢測(cè)兩組培養(yǎng)基條件下對(duì)白血病細(xì)胞K562的殺傷效果。結(jié)果動(dòng)態(tài)計(jì)數(shù)及表型分析結(jié)果表明,H3及H3~+T551培養(yǎng)的CIK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)(包括臍帶血CIK總細(xì)胞數(shù)和自體CIK總細(xì)胞數(shù))在第14天均分別達(dá)到76.9倍、62.3倍;兩種培養(yǎng)條件下臍帶血CIK細(xì)胞中CD3~+CD56~+雙陽(yáng)性細(xì)胞含量分別是(16.70±2.72)%和(10.80±2.59)%,自體CIK細(xì)胞中CD3~+CD56~+雙陽(yáng)性細(xì)胞含量分別是(11.23±6.64)%和(10.70±6.42)%;體外殺瘤實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)效靶比為5∶1時(shí),H3培養(yǎng)的臍帶血CIK細(xì)胞殺傷率達(dá)到(33.50±9.99)%,顯著高于H3~+T551培養(yǎng)臍帶血CIK細(xì)胞的(20.3±6.76)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011),而H3和H3~+T551培養(yǎng)的自體CIK細(xì)胞殺傷率分別是(59.67±27.59)%和(42.13±19.47)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.080)。結(jié)論 H3培養(yǎng)的臍帶血和自體CIK細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外抗白血病癌細(xì)胞活性,可應(yīng)用于臨床上白血病的過(guò)繼性免疫治療。
[Abstract]:Aim to observe the proliferation of CIK cells induced by cytokines, and to detect the surface molecular phenotype of CIK cells and the cytotoxicity of K562 cells to K562 cells in vitro. Methods the mononuclear cells isolated from umbilical cord blood and autologous peripheral blood were cultured in H3 medium, and CIK cells were induced by adding recombinant human interferon- 緯 (IFN- 緯) and CD3 monoclonal antibody in vitro. On the 7th day, H3 and T551 were added to culture medium for 14 days. The proliferation ability of CIK cells was observed and the expression of CD3 + CD56 on the cell surface was detected by flow cytometry. The killing effect of two groups of culture medium on leukemia cell K562 was detected by CCK8 method. Results the dynamic counting and phenotypic analysis showed that the amplification times of CIK cells cultured in H3 and H3 ~ T551 (including total CIK cells in cord blood and total CIK cells in autologous CIK) reached 76.9 times and 62.3 times respectively on the 14th day. The contents of CD3 ~ CD56 ~ double positive cells in CIK cells of umbilical cord blood were 16.70 鹵2.72% and 10.80 鹵2.59%, respectively. The contents of CD3 ~ CD56 ~ double positive cells in autologous CIK cells were 11.23 鹵6.64% and 10.70 鹵6.42%, respectively. The killing rate of cord blood CIK cells cultured with H3 was 33.50 鹵9.99g / L at 5:1, which was significantly higher than that of CIK cells cultured with H3T551 (20.3 鹵6.76C). The difference was statistically significant (P < 0.05). The cytotoxicity of autologous CIK cells cultured with H3 and H3T551 was 59.67 鹵27.59%, respectively. The difference was not statistically significant (P 0.080). Conclusion H3 cultured umbilical cord blood and autologous CIK cells have strong anti-leukemia cancer cell activity in vitro and can be used in clinical adoptive immunotherapy of leukemia.
【作者單位】: 湖北省武漢市黃陂區(qū)人民醫(yī)院暨江漢大學(xué)附屬第三醫(yī)院腫瘤三科;武漢漢密頓生物科技股份有限公司研發(fā)部;武漢大學(xué)第一臨床學(xué)院腫瘤中心;武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【分類(lèi)號(hào)】:R730.51

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本文編號(hào):1899043

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