本文選題：USP7 + Ki-67��； 參考：《上海交通大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的USP7作為一個去泛素酶在腫瘤的發(fā)生發(fā)展進程中發(fā)揮著一定的作用;Ki-67作為一個細(xì)胞增殖的標(biāo)記分子,同時也參與促進腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。我們在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)現(xiàn)USP7能夠調(diào)控Ki-67促進癌癥的發(fā)展。研究方法1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測正常肺組織和NSCLC組織中USP7表達;應(yīng)用Western blot、Real-time PCR方法檢測人正常肺上皮細(xì)胞Beas2B和NSCLC細(xì)胞中USP7蛋白和m RNA;通過在NSCLC細(xì)胞中用USP7活性抑制劑P22077及轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒干預(yù)后,運用CCK8和AO-EB雙熒光染色法檢測細(xì)胞的增殖和存活狀態(tài)。2.在NSCLC細(xì)胞中用P22077及轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒干預(yù)后,通過Western blot檢測MCM2、PCNA蛋白表達,通過細(xì)胞免疫熒光(CIF)檢測Ki-67蛋白表達;運用CIF檢測人正常肺上皮細(xì)胞Beas2B和NSCLC細(xì)胞中Ki-67蛋白表達;運用免疫組織化學(xué)方法檢測正常肺組織和NSCLC組織中Ki-67表達;通過裸鼠皮下移植瘤實驗檢測轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒的A549細(xì)胞增殖成瘤體積。3.通過Real-time PCR檢測人正常肺上皮細(xì)胞Beas2B和NSCLC細(xì)胞中Ki-67m RNA表達和在NSCLC細(xì)胞中用P22077及轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒干預(yù)后,Ki-67m RNA的表達情況;應(yīng)用CIF,在NSCLC細(xì)胞中檢測USP7與Ki-67的定位情況;應(yīng)用MG132及轉(zhuǎn)染USP7 C223A突變質(zhì)粒后,進一步研究USP7對Ki-67的調(diào)控機制;通過CCK8實驗,檢測轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒后細(xì)胞對藥物敏感性影響。研究結(jié)果1.在NSCLC組織中USP7在核內(nèi)高表達,并且分化程度越低的組織表達越高;與Beas2B細(xì)胞相比NSCLC細(xì)胞中USP7的蛋白和m RNA均高表達;應(yīng)用P22077及轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒檢測NSCLC細(xì)胞的增殖效率降低,細(xì)胞保持存活狀態(tài)。2.在NSCLC細(xì)胞中應(yīng)用P22077和轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒后MCM2、PCNA的蛋白表達不變,Ki-67蛋白表達減少;與Beas2B細(xì)胞相比NSCLC細(xì)胞中Ki-67的蛋白高表達;在NSCLC組織中Ki-67也在核內(nèi)高表達,并且分化程度越低的組織表達越高;在A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒后,細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤與對照組和NC組比瘤體體積減少顯著。3.在Beas2B和NSCLC細(xì)胞Ki-67的m RNA基本一致,在NSCLC細(xì)胞中應(yīng)用P22077、轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒后,Ki-67 m RNA保持不變;在NSCLC細(xì)胞中USP7和Ki-67有共定位現(xiàn)象;MG132拮抗P22077所誘導(dǎo)對Ki-67蛋白表達下調(diào)作用,應(yīng)用MG132后在轉(zhuǎn)染USP7 si RNA細(xì)胞中Ki-67蛋白表達恢復(fù);過表達USP7 C223A后,Ki-67蛋白表達減少;轉(zhuǎn)染USP7 si RNA質(zhì)粒的細(xì)胞對藥物敏感性無變化,甚至還有所提高。研究結(jié)論1.USP7在NSCLC組織和細(xì)胞中過表達,并且抑制USP7活性或者下調(diào)USP7后均可以減慢細(xì)胞增殖,但細(xì)胞仍存活。2.USP7可以調(diào)控Ki-67的蛋白表達,并且Ki-67在NSCLC組織和細(xì)胞中過表達,下調(diào)USP7后,裸鼠皮下移植瘤與對照組和NC組比瘤體體積減少顯著,同時Ki-67表達也下調(diào)。3.在NSCLC細(xì)胞中,USP7通過去泛素作用調(diào)節(jié)Ki-67的蛋白穩(wěn)定性。
[Abstract]:Background and objective USP7, as a diubiquitin enzyme, plays a role in tumorigenesis and progression. Ki-67 is a marker of cell proliferation, and it is also involved in promoting tumor development and metastasis. We have found that USP7 regulates the development of non-small cell lung cancer by Ki-67. Method 1. Immunohistochemical method was used to detect the expression of USP7 in normal lung tissues and NSCLC tissues. USP7 protein and mRNAs in Beas2B and NSCLC cells of normal human lung epithelial cells were detected by Western blotreal-time PCR method, and then treated with USP7 activity inhibitor P22077 and USP7 si RNA plasmid transfection in NSCLC cells. CCK8 and AO-EB double fluorescence staining were used to detect the proliferation and survival state of the cells. After the intervention of P22077 and transfected USP7 si RNA plasmid in NSCLC cells, the expression of MCM2PCNA protein was detected by Western blot, the expression of Ki-67 protein was detected by cellular immunofluorescence assay, and the expression of Ki-67 protein was detected by CIF in Beas2B and NSCLC cells of normal human lung epithelial cells. Immunohistochemical method was used to detect the expression of Ki-67 in normal lung tissues and NSCLC tissues, and the tumor volume of A549 cells transfected with USP7 si RNA plasmid was detected by subcutaneous tumor transplantation in nude mice. Real-time PCR was used to detect the expression of Ki-67m RNA in Beas2B and NSCLC cells, and the expression of Ki-67m RNA in NSCLC cells treated with P22077 and USP7 si RNA plasmid, and the localization of USP7 and Ki-67 in NSCLC cells. The regulation mechanism of USP7 on Ki-67 was further studied by MG132 and USP7 C223A mutant plasmid, and the effect of USP7 si RNA plasmid transfection on drug sensitivity was detected by CCK8 experiment. Results 1. The higher the expression of USP7 in the nucleus and the lower the degree of differentiation, the higher the expression of USP7 protein and m RNA in NSCLC cells compared with Beas2B cells. The proliferation efficiency of NSCLC cells was detected by P22077 and USP7 si RNA plasmid transfection. Cells remain alive. In NSCLC cells, the expression of Ki-67 in NSCLC cells was significantly higher than that in Beas2B cells, and the expression of Ki-67 in the nucleus was also higher in NSCLC cells than in NSCLC cells, and the expression of Ki-67 protein in NSCLC cells was decreased after pP22077 and USP7 si RNA plasmids were transfected into Beas2B cells, and the expression of Ki-67 in the nucleus of NSCLC cells was also higher than that of Beas2B cells. After transfection of USP7 si RNA plasmid in A549 cells, the tumor volume in nude mice decreased significantly compared with control group and NC group. The m RNA of Ki-67 in Beas2B and NSCLC cells was basically the same, and P22077 was used in NSCLC cells. After transfection of USP7 si RNA plasmid, Ki-67 m RNA remained unchanged, and USP7 and Ki-67 co-located in NSCLC cells. MG132 antagonized the down-regulation of Ki-67 protein expression induced by P22077. The expression of Ki-67 protein recovered after transfection of MG132 in USP7 si RNA cells and decreased after overexpression of USP7 C223A. The sensitivity of the cells transfected with USP7 si RNA plasmid was not changed or even increased. Conclusion 1.USP7 overexpression in NSCLC tissues and cells, and inhibition of USP7 activity or down-regulation of USP7 can slow down cell proliferation, but cell survival. 2. USP7 can regulate the expression of Ki-67 protein, and Ki-67 overexpression in NSCLC tissues and cells. After down-regulation of USP7, the volume of subcutaneous transplanted tumor in nude mice was significantly lower than that in control group and NC group, and the expression of Ki-67 was also down-regulated. In NSCLC cells, Ki-67 protein stability is regulated by deubiquitin.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張明輝,安廣宇,董寧征,白霞,阮長耿;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子165對K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];中華血液學(xué)雜志;2005年09期

2 成海燕;彭應(yīng)梅;于建春;韓景獻;;腦細(xì)胞增殖研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2008年02期

3 ;對人類生老病死奧秘的最新闡釋——細(xì)胞增殖、分化與凋亡[J];山東中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1993年04期

4 劉勇,路名芝;細(xì)胞增殖調(diào)控與腫瘤發(fā)生[J];九江醫(yī)學(xué);1997年04期

5 劉勇;腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控的研究進展[J];實用癌癥雜志;1997年02期

6 周劍濤,徐久元;P21 CIP1/WAF1/SDI1與細(xì)胞增殖調(diào)控[J];九江醫(yī)學(xué);1999年04期

7 鄭瑞玉,陳澤紅;胰母細(xì)胞增殖癥手術(shù)治療護理要點[J];護士進修雜志;2001年03期

8 Kase S.;SaitoW.;YokoiM. ;王文軍;;人類特發(fā)性視網(wǎng)膜前膜細(xì)胞增殖及谷氨酰胺合成酶的表達[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘.眼科學(xué)分冊;2006年04期

9 陳潔;李瑞明;方娟;盧志勇;阮緒芝;;siRNA-FAM92A1-289對HeLa細(xì)胞增殖的影響[J];湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報;2011年02期

10 石淙;萬臘根;;細(xì)胞增殖的檢測方法[J];實驗與檢驗醫(yī)學(xué);2012年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王瀟;高瑞蘭;錢煦岱;林筱潔;陳小紅;尹利明;;大黃素對K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 王瀟;錢煦岱;陳曉紅;林筱潔;尹利明;高瑞蘭;;大黃素對K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];2009年浙江省中醫(yī)藥學(xué)會血液病學(xué)術(shù)年會、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會血液病學(xué)術(shù)年會暨國家級中西醫(yī)結(jié)合血液病新進展繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

3 鄧錦波;牛艷麗;范文娟;劉彬;;死亡受體5與神經(jīng)細(xì)胞增殖[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

4 鄧錦波;牛艷麗;范文娟;劉彬;;死亡受體5與神經(jīng)細(xì)胞增殖[A];河南省細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第二屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2009年

5 鄭志宏;胡建達;陳英玉;鄭靜;林敏輝;;大黃素對K562細(xì)胞增殖、凋亡的影響[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

6 楊林;陶天遵;吳瑩;李曉蕊;劉楓晨;劉偉;張淑云;聞穎;陶樹清;吳麗萍;;地塞米松對成人骨細(xì)胞增殖和分化影響的實驗研究(摘要)[A];第五次全國創(chuàng)傷康復(fù)暨第七次全國運動療法學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 李墨;韓艷玲;劉俊;吳非;韓昱晨;;RACK1直接與MCM7結(jié)合,促進細(xì)胞增殖、運動[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

8 徐楓;趙玫;杜菲;林梁;周啟兵;余權(quán);黃常志;;Hsp 70與T細(xì)胞增殖的相關(guān)研究[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

9 陳勇;呂合作;胡建國;李柏青;;可刺激人γδT細(xì)胞增殖的結(jié)核桿菌多肽抗原的生物學(xué)特性分析[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

10 黃文榮;王立生;高春記;魯茁壯;王華;段海峰;達萬明;;rhG-CSF動員對T細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒的影響[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 四川省廣元市元壩中學(xué) 葉靜;《細(xì)胞增殖》第1課時[N];學(xué)知報;2011年

2 ;自身細(xì)胞可制再生血管[N];中國環(huán)境報;2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李因濤;促微管聚合蛋白TPPP3在肥胖及肺癌中的功能及調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 鄭碧云;HBx與COXIII共定位上調(diào)HepG2細(xì)胞線粒體功能促進細(xì)胞增殖[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉霞;REG3A促進AD-HIES支氣管上皮細(xì)胞增殖修復(fù)的作用機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

4 段亮;結(jié)直腸癌中炎性分子S100A9的表達與疾病進展的關(guān)系及其對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖與遷移的作用及分子機制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王齊;Sam68對T-ALL細(xì)胞增殖和凋亡的作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

6 黃正洋;表皮生長因子參與鵝卵泡顆粒細(xì)胞增殖調(diào)控機理的研究[D];揚州大學(xué);2016年

7 桂琳;多細(xì)胞因子調(diào)控hsBAFF通過Erk1/2和S6K1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)促進B細(xì)胞增殖機理研究[D];南京師范大學(xué);2015年

8 李繼偉;氧化固醇結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白4L(ORP4L)通過維持細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)平衡促進細(xì)胞增殖[D];暨南大學(xué);2016年

9 來凱然;環(huán)氧合酶-2在TNF-α誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)分化中的作用及其機制研究[D];浙江大學(xué);2016年

10 王洪領(lǐng);抗腫瘤新藥羧胺三唑抑制細(xì)胞增殖機制的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫思;TGF-β調(diào)節(jié)仔豬睪丸支持細(xì)胞增殖的機制[D];西南大學(xué);2015年

2 王愿;ATO通過下調(diào)CD44對K562細(xì)胞增殖的影響及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉夢涵;靶向抑制miRNA-21對K562細(xì)胞增殖及PTEN-PI3K/AKT通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 高曉晗;尼洛替尼聯(lián)合三氧化二砷對K562細(xì)胞增殖及凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 姚晶晶;地西他濱聯(lián)合三氧化二砷對HL-60細(xì)胞增殖、凋亡的作用以及對DAPK基因影響的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 王西華;NNK對V79和NCTC 1469細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];鄭州輕工業(yè)學(xué)院;2015年

7 常遵輝;Mfn2對高糖誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞A7r5增殖及糖代謝相關(guān)基因表達的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

8 闕菡雅;NOX1對A549細(xì)胞增殖及凋亡的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 徐銀麗;中華眼鏡蛇毒及其組分神經(jīng)毒素對皮膚移植排斥反應(yīng)的抑制作用及其機制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

10 張紅麗;沉默Piwil2表達對子宮頸癌細(xì)胞增殖和衰老的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1885789