本文選題：磷脂酰肌醇蛋白聚糖- + 嵌合抗原受體T細胞　； 參考：《中國腫瘤生物治療雜志》2017年07期

【摘要】：目的:構(gòu)建靶向GPC3陽性肝癌細胞的嵌合抗原受體修飾T細胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并評估其對GPC3陽性肝癌細胞的殺傷效能。方法:選擇偏愛密碼子技術(shù)改造基因序列,以增強CAR分子表達效率,設(shè)計靶向GPC3抗原的CAR分子基因并構(gòu)建攜帶GPC3-CAR基因的慢病毒表達載體p CDH-GPC3-CAR,感染T細胞;采用Western blotting、流式細胞術(shù)、實時細胞監(jiān)測和ELISA技術(shù)分別檢測GPC3-CAR分子在CAR-T細胞的表達、慢病毒感染T細胞效率、GPC3-CAR-T細胞對GPC3陽性肝癌細胞的殺傷活性和特異性。結(jié)果:雙酶切p CDH-GPC3-CAR重組慢病毒質(zhì)粒可見分子質(zhì)量和GPC3-CAR分子一致的基因片段,成功構(gòu)建p CDH-GPC3-CAR慢病毒質(zhì)粒。約54.38%的GPC3-T細胞表達GPC3-CAR分子,稱為GPC3-CAR-T細胞。GPC3-CAR-T細胞對GPC3陽性的肝癌細胞Huh-7比GPC3陰性的肝癌細胞SK-HEP-1具有更高效的殺傷能力[(78.96±4.76)%vs(6.87±3.15)%,P0.01]。與GPC3陽性Huh-7肝癌細胞共培養(yǎng)的肝癌GPC3-CAR-T細胞分泌IFN-γ水平比Mock組高效[(21 371.4±1 808.3)vs(152.8±12.5)pg/ml,P0.01],這可能是其高效殺傷肝癌細胞的機制之一。結(jié)論:靶向肝癌的GPC3-CAR-T細胞具有高效分泌IFN-γ細胞因子并特異高效殺傷GPC3陽性肝癌細胞的能力,為進一步推進GPC3-CAR-T臨床前和臨床研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct chimeric antigen receptor modified T cells (chimeric antigen receptor-modified T cell CAR-T cell) targeting GPC3 positive hepatoma cells and evaluate their cytotoxicity to GPC3 positive hepatoma cells. Methods: to select the codon preference technique to modify the gene sequence, to enhance the expression efficiency of CAR, to design the CAR molecular gene targeting the GPC3 antigen and to construct the lentivirus expression vector pCDH-GPC3-CARcarrying the GPC3-CAR gene to infect T cells, and to infect T cells by Western blotting and flow cytometry. The expression of GPC3-CAR molecules in CAR-T cells was detected by real-time cell monitoring and ELISA technique. The cytotoxicity and specificity of GPC3-CAR-T cells infected by lentivirus to GPC3 positive hepatoma cells were investigated. Results: the recombinant lentivirus plasmid of p CDH-GPC3-CAR was digested with double enzyme, and the molecular weight of the recombinant lentivirus plasmid was the same as that of GPC3-CAR molecule. The plasmid of p CDH-GPC3-CAR lentivirus was successfully constructed. About 54.38% of the GPC3-T cells expressed GPC3-CAR molecule, which was called GPC3-CAR-T cell. GPC3-CAR-T cell had a more effective killing effect on GPC3 positive hepatoma cell Huh-7 than GPC3 negative HCC cell line SK-HEP-1 [78.96 鹵4.76)%vs(6.87 鹵3.15P 0.01]. The level of IFN- 緯 secreted by GPC3-CAR-T cells co-cultured with GPC3 positive Huh-7 hepatoma cells was higher than that of Mock group [21 371.4 鹵1 808.3)vs(152.8 鹵12.5 808.3)vs(152.8 鹵12.5 mg / ml P0.01], which may be one of the mechanisms of its high killing effect on hepatoma cells. Conclusion: GPC3-CAR-T cells targeting HCC have the ability of secreting IFN- 緯 cytokines and killing GPC3 positive hepatoma cells specifically and efficiently, which will lay a foundation for further clinical and clinical study of GPC3-CAR-T.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室第一研究室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81502434) 第三軍醫(yī)大學校管課題資助項目(No.2014YQN06)~~
【分類號】：R735.7

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本文編號：1882029