本文選題：食管鱗癌 + 腫瘤相關(guān)纖維細(xì)胞�。� 參考：《武漢大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的：食管癌(Esophagus Carcinoma, EC)是我國發(fā)病率居第八位,死亡率居第四位的常見惡性腫瘤,且以食管鱗癌為主,約占90%。食管癌早期癥狀不明顯,臨床確診時(shí)約70%-80%的患者已喪失手術(shù)機(jī)會(huì),化療及放療成為局部晚期食管癌的主要治療手段。目前,食管癌患者的五年生存率尚不足15%,究其主要原因?yàn)槭彻馨⿲?duì)其常用的化療藥物如順鉑、紫杉醇等均表現(xiàn)出極其有限的敏感性,且食管癌易對(duì)放療產(chǎn)生顯著的抵抗性,導(dǎo)致患者治療結(jié)束后易出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。迄今為止,國內(nèi)外針對(duì)食管癌耐治療抵抗的分子機(jī)制研究均著眼于癌細(xì)胞本身,而未關(guān)注腫瘤微環(huán)境的影響。事實(shí)上,腫瘤微環(huán)境的主要成員腫瘤相關(guān)纖維細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系,因而亟待闡明食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞對(duì)食管癌放化療敏感性的影響及其分子機(jī)制。方法：1.通過原代培養(yǎng)的方法從食管鱗癌患者手術(shù)切除的癌組織中及配對(duì)的正常食管上皮組織中分離培養(yǎng)食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)及配對(duì)的正常纖維細(xì)胞(normal fibroblasts, NFs),并且通過免疫組化染色實(shí)驗(yàn)、免疫印跡分析實(shí)驗(yàn)(Western Blotting, WB)對(duì)CAFs及其NFs進(jìn)行鑒定。2.通過MTT實(shí)驗(yàn)、qRT-PCR實(shí)驗(yàn)、WB實(shí)驗(yàn)、免疫組化染色實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙染色法、Elisa實(shí)驗(yàn)、固相抗體芯片篩選、克隆形成實(shí)驗(yàn)、建立裸鼠移植瘤模型、TUNEL等實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)外水平系統(tǒng)地研究CAFs、NFs對(duì)食管癌細(xì)胞放化療敏感性的影響及其分子機(jī)制。結(jié)果：1.鑒定發(fā)現(xiàn)CAFs及NFs中上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin染色呈陰性,纖維細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin染色呈陽性。而癌纖維細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物如a-SMA,FSP-1及FAP在CAFs中的表達(dá)量顯著高于在配對(duì)的NFs中的表達(dá)量,表明已成功地分離培養(yǎng)了CAFs及配對(duì)的NFs。2.檢測發(fā)現(xiàn)CAFs較NFs相比可介導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞KYSE-150、KYSE-180對(duì)順鉑、紫杉醇、5-Fu、CPT-11、長春新堿、表阿霉素、多烯紫杉醇、卡鉑產(chǎn)生顯著的抵抗性。進(jìn)一步的分子機(jī)制研究顯示CAFs較NFs及食管癌細(xì)胞相比可分泌大量的TGFβ1 (Transforming Growth Factorβ1)。且CAFs分泌的TGFβ1通過激活食管癌細(xì)胞內(nèi)的NF-κB抗凋亡信號(hào)通路,誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑介導(dǎo)食管癌細(xì)胞的化療抵抗性。此外,CAFs與食管癌細(xì)胞的相互作用可促進(jìn)TGFβ1自分泌/旁分泌信號(hào)通路激活,從而進(jìn)一步促進(jìn)了食管癌的化療抵抗性。生存分析顯示食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞中TGFβ1的表達(dá)量與食管癌患者術(shù)后經(jīng)過化療治療的總生存率顯著相關(guān)。3. CAFs較NFs及食管鱗癌細(xì)胞KYSE-150、KYSE-30相比可分泌大量的CXCL-1 (The chemokine (C-X-C motif) ligand-1)。進(jìn)一步的研究顯示CAFs分泌的CXCL-1通過調(diào)控食管癌細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)響應(yīng)介導(dǎo)食管癌細(xì)胞產(chǎn)生了顯著的放療抵抗性。結(jié)論：1.食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞通過分泌TGFβ1介導(dǎo)食管癌細(xì)胞產(chǎn)生顯著的化療抵抗性。2.食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞分泌的TGFβ1可激活食管癌細(xì)胞內(nèi)的NF-κB抗凋亡信號(hào)通路,誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。2.食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞中TGFβ1的表達(dá)量可作為食管癌患者術(shù)后接受化療治療的獨(dú)立預(yù)后因子。3.食管癌相關(guān)纖維細(xì)胞通過分泌CXCL-1調(diào)控食管癌細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)響應(yīng)從而介導(dǎo)食管癌細(xì)胞產(chǎn)生顯著的放療抵抗性。上述研究成果率先從腫瘤微環(huán)境的角度闡明了食管癌產(chǎn)生放化療抵抗性的分子機(jī)制,彌補(bǔ)了腫瘤微環(huán)境在食管癌放化療抵抗性研究領(lǐng)域中的諸多空白,并為臨床研究如何提高食管癌患者的放化療效果提供新的參考依據(jù)和理論指導(dǎo)。
[Abstract]:Objective : To study the effect and molecular mechanism of cancer - associated fibroblasts ( CAFs ) and paired normal fibroblasts ( NFs ) in esophageal cancer patients with esophageal squamous cell carcinoma . KYSE - 180 has significant resistance to cisplatin , paclitaxel , 5 - Fu , CPT - 11 , vincristine , epi - doxorubicin , docetaxel and carboplatin . Further molecular mechanism studies show that CAFs can secrete a large amount of TGF - 尾1 ( TGF - 尾1 ) compared with NFs and esophageal cancer cells . In addition , the interaction between CAFs and esophageal cancer cells can promote the activation of TGF - 尾1 self - secretion / parasecretory signal pathway , thus further promoting the chemotherapy resistance of esophageal cancer . The survival analysis shows that the expression level of TGF - 尾1 in esophageal cancer - related fibroblasts is significantly related to the overall survival rate of esophageal cancer patients after chemotherapy . Compared with NFs and KYSE - 150 and KYSE - 30 , CAFs can secrete a large amount of CXCL - 1 ( The C - X - C motif ) ligand - 1 ) . Conclusion : 1 . The expression of TGF - 尾1 in esophageal cancer - related fibroblasts can be used as an independent prognostic factor for esophageal cancer .

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：1879140