本文選題：寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1 + 阿霉素　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景:原發(fā)性肝癌,以肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)常見。我國是乙肝高發(fā)國,故肝癌發(fā)病率尤為高[1]。世界范圍平均每年有25-100萬人死于HCC,我國竟占45%之多[2],在男女常見惡性腫瘤居于第五和第七位[3]。早期肝癌最佳治療為肝切除術(shù)[4],由于該疾患隱匿,早期診斷困難,多數(shù)患者合并肝硬化,故臨床上可獲得手術(shù)機(jī)會的患者不多[5]。因此包括化療的綜合治療是肝癌的重要治療方式[6,7]。然而化療對腫瘤細(xì)胞不具有特異性,其也作用于正常細(xì)胞,從而產(chǎn)生嚴(yán)重毒副作用,患者獲益有限。靶向藥物載體系統(tǒng)具有很好的應(yīng)用前景[8]。其優(yōu)點(diǎn)在于能夠?qū)⑺幬锾禺愋缘倪\(yùn)送到靶區(qū),達(dá)到最高療效,又能降低對正常細(xì)胞及組織的毒副作用,提高化療總體有效性、安全性和患者依從性[9]。尋找安全有效的載體是目前的研究熱點(diǎn)。寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(proton-independent oligopeptide transporter 1,PEPT1)對許多藥物的吸收和分配起到重要作用[10]。研究報(bào)道PEPT1在正常細(xì)胞及組織中表達(dá)譜有限,而在很多惡性腫瘤中異常表達(dá)[11,12],提示PEPT1有可能在HCC中也特異性表達(dá)。因此,本研究目的為驗(yàn)證PEPT1在HCC中的表達(dá),同時(shí)基于PEPT1為載體,將阿霉素改構(gòu),使其能被PEPT1識別并靶向轉(zhuǎn)運(yùn)入肝癌細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)阿霉素靶向抗肝癌的減毒增效作用。本研究內(nèi)容分為三部分:第一部分PEPT1在HCC的表達(dá)及靶向轉(zhuǎn)運(yùn)藥物的功能研究目的:探討PEPT1在HCC中的表達(dá)及其藥物轉(zhuǎn)運(yùn)性能。方法:應(yīng)用Western blot、免疫組化及Real-time RT-PCR驗(yàn)證PEPT1在人肝癌中的表達(dá),同時(shí)檢測PEPT1在肝癌細(xì)胞中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的性能。結(jié)果:Western blot提示PEPT1在人肝癌細(xì)胞特異性表達(dá);Real-time RT-PCR提示人肝癌細(xì)胞系中有PEPT1 m RNA的表達(dá);PEPT1在正常組織、癌旁組織及HCC組織中表達(dá)陽性率分別為52.63%、53.85%、86.00%,差異具有顯著性(P0.05);PEPT1在高、中、低分化肝癌組織中的表達(dá)陽性率分別為92.31%、90.00%、25.00%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。人肝癌細(xì)胞系對PEPT1作用底物的攝取呈時(shí)間及濃度依賴性,存在競爭抑制現(xiàn)象。結(jié)論:PEPT1在HCC中高表達(dá),與腫瘤分化程度相關(guān)。人肝癌細(xì)胞對PEPT1作用底物的攝取呈時(shí)間及濃度依賴性及競爭抑制現(xiàn)象。第二部分PEPT1靶向轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素抗肝癌的減毒增效作用的體外實(shí)驗(yàn)研究目的:合成阿霉素小肽偶聯(lián)物,驗(yàn)證PEPT1轉(zhuǎn)運(yùn)該藥物的效能。方法:合成阿霉素小肽偶聯(lián)物并鑒定;應(yīng)用熒光顯微鏡觀察該藥物在肝癌細(xì)胞內(nèi)的分布,應(yīng)用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)檢測細(xì)胞中的藥物濃度。通過動力學(xué)等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PEPT1對該藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)性能。結(jié)果:阿霉素小肽偶聯(lián)物成功合成;與阿霉素比較,阿霉素小肽偶聯(lián)物更易進(jìn)入肝癌細(xì)胞,其在肝癌細(xì)胞中具有較高的濃度(P0.05)。肝癌細(xì)胞對該藥物的攝取亦呈時(shí)間濃度依賴性及競爭抑制現(xiàn)象。結(jié)論:阿霉素小肽偶聯(lián)物能夠被PEPT1特異性識別并靶向轉(zhuǎn)運(yùn)肝臟細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)藥物濃度穩(wěn)定。第三部分以PEPT1為載體的阿霉素靶向抗肝癌的減毒增效作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證目的:驗(yàn)證以PEPT1為載體的阿霉素靶向抗肝癌的減毒增效作用。方法:構(gòu)建Hep G2及Bel-7402肝癌模型,每一模型設(shè)對照組、阿霉素小肽偶聯(lián)物組及阿霉素組,前者低劑量給藥,后者高劑量給藥,對比分析不同藥物及同一藥物不同劑量的療效及安全性。結(jié)果:Hep G2實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):與對照組及阿霉素組比較,阿霉素小肽偶聯(lián)物組裸鼠一般情況良好,生存期較對照組延長8.57%(3.0 d),較阿霉素組延長24.28%(8.5d)。阿霉素小肽偶聯(lián)物組及阿霉素組腫瘤體積增長減慢,腫瘤重量減低,二者腫瘤抑瘤率分別為42.13%及25.28%,差異有顯著性(P0.05)。與阿霉素比較,阿霉素小肽偶聯(lián)物無明顯心臟及骨髓損傷(P0.05)。Bel-7402成像可見該藥物主要分布在皮下腫瘤及肝臟轉(zhuǎn)移瘤組織中;增加阿霉素小肽偶聯(lián)物劑量能提高其抗癌療效,并不增加骨髓及心臟毒性,但增加阿霉素給藥劑量雖可提高抑瘤率,同時(shí)毒副作用也增加。結(jié)論:PEPT1是阿霉素靶向抗肝癌的載體,阿霉素小肽偶聯(lián)物能夠?qū)崿F(xiàn)阿霉素靶向抗肝癌減毒增效的作用。
[Abstract]:Background : Primary liver cancer is common in hepatocellular carcinoma ( HCC ) . Our country is the high incidence of hepatitis B , so the incidence of liver cancer is especially high . The world ' s average annual rate of 25 - 1 million people died of HCC , accounting for 45 per cent of the world ' s most common malignant tumors in the fifth and seventh positions . Early diagnosis of liver cancer is the best treatment for liver resection . Since the disease is hidden , early diagnosis is difficult , most patients complicated with liver cirrhosis , so the number of patients who can get the opportunity of surgery is not more than 5 million . Therefore , the comprehensive treatment of chemotherapy is an important treatment method for liver cancer , namely , 6 , 7 , but the chemotherapy has no specificity for tumor cells , and also acts on normal cells , thereby generating serious toxic and side effects , and the patient has limited benefit . The targeted drug carrier system has good application prospect . The invention has the advantages that the medicament - specific delivery to the target area can be achieved , the highest curative effect can be achieved , the toxic and side effects on normal cells and tissues can be reduced , the overall effectiveness of chemotherapy , safety and patient compliance can be improved . The search for safe and effective vectors is the focus of current research , and the absorption and distribution of many drugs plays an important role in the absorption and distribution of many drugs . Objective : To investigate the expression of PET1 in human hepatocellular carcinoma ( HCC ) and to evaluate its drug transport properties . Results : Compared with the control group and the adriamycin group , there was no significant difference in the tumor size and the tumor weight . The results showed that the adriamycin small peptide conjugate had no obvious heart and bone marrow damage ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：1879120