本文選題：電離輻射 + 放射性肺纖維化��； 參考：《石河子大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過實驗探究DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白DNA-PKcs介導輻射誘導的EMT發(fā)生。進一步闡明DNA損傷修復(fù)蛋白DNA-PKcs介導輻射誘導的EMT作用及機制。從而為DNA-PKcs在輻射誘導的肺纖維化方面的生物學功能提供基礎(chǔ)依據(jù)。方法:采用6°Coγ射線照射A549細胞,利用Western blot、免疫熒光、流式細胞術(shù)在不同劑量不同時間下檢測上皮標志物與間質(zhì)標志物的變化,建立輻射誘導的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型。采用Western blot、免疫熒光、流式細胞術(shù)檢測敲低DNA-PKcs蛋白后對輻射誘導的EMT的作用,探究DNA-PKcs是否介導了電離輻射誘導的EMT的發(fā)生。采用Western blot實驗檢測敲低DNA-PKcs蛋白后對輻射誘導的EMT的上游轉(zhuǎn)錄因子的變化,推測DNA-PKcs介導輻射誘導的的EMT的具體作用機制。同時檢測在DNA-PKcs敲低細胞系中敲低twi st是否能逆轉(zhuǎn)DNA-PKcs敲低對輻射誘導的EMT的影響,以判斷DNA-PKcs是否通過twist來影響EMT。以及檢測DNA-PKcs敲低后twist表達的變化及twist蛋白降解速率,探究DNA-PKcs對twist穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)。采用免疫共沉淀實驗檢測DNA-PKcs與twist之間是否存在相互作用。從而推測DNA-PKcs介導輻射誘導的EMT的可能機制。結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示60Coγ射線照射A549細胞后,隨著照射時間和照射劑量的增加,上皮標志物含量逐漸減少,間質(zhì)標志物逐漸增多,在6Gy,48h最為明顯,此結(jié)果和免疫熒光、流式細胞術(shù)結(jié)果共同說明了輻射能夠誘導肺上皮細胞發(fā)生EMT。2.Western blot、免疫熒光、流式細胞術(shù).結(jié)果顯示,DNA-PKcs敲低后相對于對照組,進一步促進了輻射誘導的EMT。3.采用Western blot結(jié)果顯示,在DNA-PKcs敲低細胞系中敲低twist后能夠逆轉(zhuǎn)因DNA-PKcs敲低而促進的輻射誘導的EMT,說明DNA-PKcs是通過twist作用來影響EMT。4.免疫共沉淀結(jié)果顯示DNA-PKcs與twist具有的相互作用。5.Western blot結(jié)果顯示,DNA-PKcs敲低后,twist蛋白表達上調(diào)并且降解速率變慢,說明DNA-PKcs可調(diào)節(jié)twist的穩(wěn)定性。結(jié)論:1.電離輻射能夠誘導肺上皮細胞發(fā)生EMT。2.DNA-PKcs介導了輻射誘導的EMT的發(fā)生。。3.DNA-PKcs可能是通過調(diào)控twist的降解來調(diào)節(jié)輻射誘導的EMT。
[Abstract]:Objective: To explore the effect of DNA damage repair related protein DNA-PKcs mediated radiation induced EMT. Further elucidate the effect and mechanism of DNA damage repair protein DNA-PKcs mediated EMT induced radiation, thus providing basic basis for the biological function of DNA-PKcs in radiation induced pulmonary fibrosis. Method: 6 degree Co gamma ray irradiation of A5 49 cells, using Western blot, immunofluorescence and flow cytometry to detect the changes of epithelial markers and interstitial markers at different doses at different doses and establish a radiation-induced epithelial mesenchymal transition model. The effects of Western blot, immunofluorescence and flow cytometry on the radiation induced EMT after detection of low DNA-PKcs protein were detected, and DNA-P was explored. Whether Kcs mediates the occurrence of EMT induced by ionizing radiation. Using the Western blot test to detect the changes in the upstream transcriptional factor of radiation induced EMT after the knockout of the low DNA-PKcs protein, we speculate on the specific mechanism of the DNA-PKcs mediated radiation induced EMT. At the same time, whether the low twi st in the DNA-PKcs knockout cell line can reverse the DNA-PKcs knockout. The effect of low on radiation induced EMT is to determine whether DNA-PKcs affects EMT. through twist and the change of twist expression after DNA-PKcs knockout and the degradation rate of twist protein. The regulation of DNA-PKcs to twist stability is explored. The interaction between DNA-PKcs and twist is detected by the immunoprecipitation experiment. The possible mechanism of mediating radiation induced EMT. Results: the results of 1.Western blot showed that after 60Co gamma rays irradiated A549 cells, the content of epithelial markers decreased gradually with the increase of irradiation time and irradiation dose, and the interstitial markers increased gradually, in 6Gy, the most obvious in 48h. The results of this fruit and immunofluorescence and flow cytometry demonstrated the convergence. Radiation induced EMT.2.Western blot, immunofluorescence and flow cytometry in the lung epithelial cells. The results showed that after the DNA-PKcs knockout, the radiation induced EMT.3. was further promoted by Western blot results, and the radiation induced by the low twist knockout in the DNA-PKcs knockout cell line could reverse the radiation induced by the DNA-PKcs knockout. The EMT, indicating that DNA-PKcs affects the EMT.4. immunoprecipitation results through the twist effect, shows the interaction of DNA-PKcs and twist with the interaction.5.Western blot, which shows that the expression of twist protein is up and the degradation rate slows after DNA-PKcs knock down, indicating that DNA-PKcs can regulate the stability of twist. Conclusion: 1. ionizing radiation can induce lung epithelium. EMT.2.DNA-PKcs mediated the generation of radiation-induced EMT...3.DNA-PKcs may regulate radiation-induced EMT. by regulating the degradation of twist.

【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R730.55

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本文編號：1872067