本文選題：顆粒蛋白前體 + 上皮性卵巢癌　； 參考：《山東大學》2016年碩士論文

【摘要】：研究背景：最新癌癥調查報告顯示：2000-2011年之間,卵巢癌在國內癌癥相關死亡率中位于第二位,僅次于乳腺癌,居于生殖系統(tǒng)首位。其中,上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)占所有卵巢癌的90%。目前,上皮性卵巢癌主要的治療方法是腫瘤細胞減滅術,并輔以鉑類為主的化療,但是其五年生依舊為30%左右。主要是因為目前對于卵巢癌缺乏有效的篩查手段,以至于大部分卵巢患者初診時已發(fā)生遠處、多發(fā)轉移,處于臨床晚期�，F(xiàn)已證實惡性腫瘤發(fā)生遠處轉移與腫瘤細胞獲得侵襲、浸潤能力密切相關,因此,闡明上皮性卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中的分子改變,以及探討上皮性卵巢癌細胞獲得浸潤、轉移能力的機制對于上皮性卵巢癌的早期診斷、治療以及預后有著重要的意義。顆粒蛋白前體(PGRN)是上世紀90年代初發(fā)現(xiàn)的一種分泌性生長因子,又稱granulin/epithelin precursor(GEP)、proepithelin(PEPI)、PC cells-derived growth factor (PCDGF)或acrogranin,可在不同組織中提取,根據(jù)提取組織的不同給予不同命名。顆粒蛋白前體編碼大小為68.5 kDa的蛋白,高度糖基化的PGRN蛋白分子量為90-kDa。顆粒蛋白前體具有多種生物學功能,在炎癥反應、胚胎發(fā)育、損傷修復、神經(jīng)營養(yǎng)及胰島素抵抗等方面發(fā)揮重要作用。此外,在多種腫瘤中PGRN表達上調,與乳腺癌、肝癌、宮頸癌、腎上腺癌等腫瘤的增殖、耐藥、侵襲轉移及腫瘤干細胞特性密切相關,這些生物學過程中可有PI3K/AKT,ERK等信號通路分子的參與。此外,還有研究證實,顆粒蛋白前體可上調GSK3β及cyclinD1,進而參與一系列生物學過程。最近有研究報道顆粒蛋白前體的表達水平與腫瘤的預后密切相關,可以作為預測腫瘤患者預后的關鍵指標。上皮間充質轉化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)可以使上皮細胞獲得間質細胞的表型,賦予細胞侵襲、轉移的能力,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著舉足輕重的作用。目前,顆粒蛋白前體對上皮性腫瘤細胞發(fā)生上皮間充質轉化方面的影響尚未見報道,其影響及其作用機制需要進一步闡述。目的：1.研究顆粒蛋白前體在良性上皮性卵巢腫瘤、上皮性卵巢癌中的表達差異；2.研究顆粒蛋白前體對上皮性卵巢癌細胞增殖、遷移、侵襲能力的影響；3.研究顆粒蛋白前體在上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間充質轉化方面的影響,在蛋白水平檢測顆粒蛋白前體過表達前后,上皮間充質轉化相關分子的表達變化。4.探討顆粒蛋白前體促進上皮性卵巢癌發(fā)生上皮間充質轉化的分子機制。方法：1.利用免疫組織化學的方法檢測在良性上皮性卵巢腫瘤組織(34例)與上皮性卵巢癌組織(42例)中,顆粒蛋白前體是否存在表達差異：并且探討在上皮性卵巢癌中顆粒蛋白前體與Snail的表達是否具有相關性。2.應用慢病毒轉染的方法,構建穩(wěn)定過表達PGRN的上皮性卵巢癌細胞系(A2780、HO8910);應用CCK8試劑盒檢測顆粒蛋白前體對細胞增殖能力的影響；應用transwell、室的方法檢測顆粒蛋白前體對細胞遷移、侵襲能力的影響。3.利用Western Blot的方法,在蛋白水平檢測在上皮性卵巢細胞中過表達顆粒蛋白前體后上皮表型標志物(E-cadherin、ZO-1),間質表型標志物(N-cadherin、Vimentin、Slug、Snail)的表達變化。4.利用Western Blot的方法,在蛋白水平檢測在上皮性卵巢細胞中過表達顆粒蛋白前體后Wnt/β-catenin、AKT/mTOR信號通路的活化狀態(tài)。結果：1.免疫組化結果顯示：上皮性卵巢癌組的免疫組化染色評分為3.2941±1.0317,上皮性卵巢癌組的免疫組化評分為8.5500±0.7014,統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌中顆粒蛋白前體的表達顯著高于良性上皮性卵巢腫瘤p0.01)；并且在上皮性卵巢癌中,顆粒蛋白前體的表達與Snail的表達呈正相關p0.001)。2.在上皮性卵巢癌細胞(A2780、H08910)中過表達顆粒蛋白前體后,與對照組相比,細胞的增殖、遷移及侵襲能力顯著增高(p0.05),說明顆粒蛋白前體增強了上皮性卵巢癌細胞的增殖、遷移及侵襲能力。3.在上皮性卵巢癌細胞(A2780、H08910)中過表達顆粒蛋白前體后,與對照組相比,上皮表型標志物(E-cadherin、 ZO-1)的表達顯著下調,間質表型標志物(N-cadherin、Vimentin)及調節(jié)上皮間質轉化的轉錄因子(Snail及Slug)的表達明顯上調,說明PGRN促進上皮性卵巢癌細胞由上皮表型向間質表型轉化。4.在上皮性卵巢癌細胞(A2780、HO8910)中過表達顆粒蛋白前體后,與對照組相比,β-catenin表達上調；總GSK-3β表達無明顯變化,而GSK-3β的失活形式p-GSK-3β(ser9)表達顯著下調。這說明PGRN可能通過調節(jié)GSK-3β來激活Wnt/β-catenin通路,進而誘導上皮間質轉化的發(fā)生。5.在上皮性卵巢癌細胞(A2780、HO8910)中過表達顆粒蛋白前體后,與對照組相比,p-mTOR、p-AKT分子表達上調,而mTOR表達無明顯差異,這說明PGRN的增加能夠激活AKT/mTOR信號通路。結論：1.在上皮性卵巢癌中顆粒蛋白前體表達上調；并且顆粒蛋白前體的表達與Snail的表達呈正相關；2.顆粒蛋白前體能夠增強上皮性卵巢癌細胞的增殖、遷移以及侵襲能力：3.顆粒蛋白前體可以誘導上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間充質轉化；4.顆粒蛋白前體可能通過激活Wnt/β-catenin、AKT/mTOR信號通路誘導上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間充質轉化。
[Abstract]:The research background : The latest cancer investigation report shows that ovarian cancer is located in the second place in cancer - related mortality in China between 2000 and 2011 . It is secondary to breast cancer and occupies the first place in the reproductive system . In addition , it has been found that the expression level of granular protein precursors is closely related to the prognosis of the tumor , and it can be used as a key indicator for predicting the prognosis of tumor patients .
2 . To study the effect of granular protein precursor on proliferation , migration and invasion ability of epithelial ovarian cancer cells .
3 . To study the effect of granular protein precursor on epithelial ovarian cancer cells in epithelial ovarian cancer cells .
The expression of Wnt / 尾 - catenin in epithelial ovarian cells was detected by Western Blot . The expression of Wnt / 尾 - catenin in epithelial ovarian cells was 3.2941 鹵 1.0317 and 8.5500 鹵 0.7014 , respectively .
In epithelial ovarian cancer cells ( A2780 , H08910 ) , the expression of E - cadherin ( ZO - 1 ) significantly decreased , and the expression of E - cadherin ( ZO - 1 ) was significantly downregulated in epithelial ovarian cancer cells ( A2780 , H08910 ) .
It was suggested that PGRN could activate Wnt / 尾 - catenin pathway by modulating gsk - 3beta and then induce the occurrence of epithelial mesenchymal transition . 5 . In epithelial ovarian cancer cells ( A2780 , HO8910 ) , the expression of p - mtor and p - catenin was up - regulated , while the expression of mtor was not significantly different .
and the expression of the precursor of the granular protein is positively correlated with the expression of the snail ;
2 . Granular protein precursors can enhance the proliferation , migration and invasion ability of epithelial ovarian cancer cells : 3 . Granular protein precursors can induce mesenchymal transition of epithelial ovarian cancer cells ;
4 . Granular protein precursors may induce mesenchymal transition of epithelial ovarian cancer cells through activation of Wnt / 尾 - catenin , which induces epithelial ovarian cancer cells .

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

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