本文選題：膜聯(lián)蛋白A3 + 乳腺癌��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年上升,在歐美國(guó)家乳腺癌占女性惡性腫瘤的25%~30%。在我國(guó),乳腺癌發(fā)病率已上升為女性惡性腫瘤第一位。了解乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)有效治療乳腺癌,從而提高患者生存率有重要意義。因此,找到與乳腺癌診斷、分期和治療相關(guān)的特異性生物學(xué)標(biāo)志是一項(xiàng)重要的工作。膜聯(lián)蛋白家族(Annexin,ANX)屬于Ca(2+)調(diào)節(jié)的磷脂和膜結(jié)合蛋白,在細(xì)胞中參與膜轉(zhuǎn)運(yùn)及膜表面一系列依賴(lài)于鈣調(diào)蛋白的活動(dòng),并調(diào)控炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化和細(xì)胞骨架蛋白間的相互作用。ANX表達(dá)失調(diào)與人類(lèi)疾病相關(guān),其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中可介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)通路、細(xì)胞運(yùn)動(dòng),與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移、血管生成、細(xì)胞凋亡及抗藥性有關(guān)。家族成員膜聯(lián)蛋白A3(Annexin A3,ANXA3)在腫瘤的形成、增殖、凋亡和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)形成過(guò)程中都扮演著重要角色,ANXA3表達(dá)水平的改變,對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移、耐藥性有重要影響。然而,ANXA3在不同腫瘤中的表達(dá)模式不同,提示ANXA3在不同腫瘤發(fā)生發(fā)展中可能起不同作用。如ANXA3表達(dá)上調(diào)與卵巢癌的耐藥性、結(jié)直腸癌和胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及肺腺癌、肝癌的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性;而ANXA3表達(dá)水平下調(diào)則表現(xiàn)為促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展。因此,ANXA3可能成為腫瘤治療的靶標(biāo),是一種潛在的與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及患者預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物。然而,ANXA3在乳腺癌中的表達(dá)、功能及作用機(jī)制仍不十分清楚。本研究分四部分對(duì)ANXA3在乳腺癌增殖及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制進(jìn)行研究:第一部分:通過(guò)免疫組化Max Vision TM一步法檢測(cè)原發(fā)性乳腺癌組織中ANXA3的表達(dá)情況,回顧性分析ANXA3與患者臨床生物學(xué)特性的相關(guān)性。第二部分:通過(guò)應(yīng)用熒光定量RT-PCR法、western-blot技術(shù)檢測(cè)乳腺癌組織及正常乳腺組織中ANXA3 mRNA及蛋白表達(dá)水平,分析其與臨床生物學(xué)特性的關(guān)系;采用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)乳腺癌組織及正常乳腺組織細(xì)胞周期,分析乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞增殖指數(shù)的相關(guān)性,旨在探討anxa3在乳腺癌發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。第三部分:采用rna干擾技術(shù)抑制乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞anxa3基因表達(dá),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞遷移能力;transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞侵襲能力,旨在探討anxa3對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖及侵襲的影響。第四部分:建立乳腺癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,通過(guò)繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線、應(yīng)用活體成像技術(shù)、he染色分析、流式細(xì)胞術(shù)及熒光定量rt-pcr等方法觀察抑制anxa3對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響。第一部分乳腺癌組織中膜聯(lián)蛋白a3表達(dá)與其臨床生物學(xué)特性關(guān)系的研究目的:本研究通過(guò)免疫組化maxvisiontm一步法檢測(cè)原發(fā)性乳腺癌組織中膜聯(lián)蛋白a3(annexina3,anxa3)的表達(dá)情況,分析anxa3與患者臨床生物學(xué)特性的相關(guān)性,探討anxa3在乳腺癌診治中的臨床價(jià)值。方法:收集2009年1月至2009年12月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心收治的、經(jīng)病理確診且有完整隨訪資料的309例原發(fā)性乳腺癌患者石蠟包埋組織標(biāo)本。入選病例均為女性,年齡22-76歲,中位年齡為47歲。通過(guò)免疫組化maxvisiontm一步法檢測(cè)原發(fā)性乳腺癌組織中anxa3的表達(dá)情況,分別將患者按照年齡(50歲145例、≥50歲164例)、月經(jīng)狀況(絕經(jīng)前158例、絕經(jīng)后151例)、腫瘤大小(≤2cm117例、2cm且≤5cm160例、5cm32例)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移129例、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)1~3枚108例、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)3枚72例)、臨床tnm分期(Ⅰ期54例、Ⅱ期221例、Ⅲ期34例)、組織學(xué)分級(jí)(Ⅰ級(jí)35例、Ⅱ級(jí)192例、Ⅲ級(jí)82例)、分子亞型(luminala型65例、luminalb型148例、her2過(guò)表達(dá)型37例、三陰性59例)進(jìn)行分組,分析anxa3與上述臨床生物學(xué)特性的相關(guān)性。所有病例均由乳腺中心進(jìn)行電話隨訪,隨訪時(shí)間截止至2015年6月,計(jì)算患者無(wú)病生存期(dfs)及總生存期(os)。采用cox回歸模型進(jìn)行多因素分析,觀察anxa3及各臨床生物學(xué)特性與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:1無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1~3枚組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3枚組anxa3陽(yáng)性表達(dá)率分別是51.94%,67.59%,73.61%,三組間陽(yáng)性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.123,p0.05)。2根據(jù)術(shù)后病理組織學(xué)分級(jí),分為Ⅰ級(jí)組、Ⅱ級(jí)組、Ⅲ級(jí)組anxa3陽(yáng)性表達(dá)率分別是31.42%,65.10%,69.51%,三組間anxa3陽(yáng)性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=16.686,p0.05)。3anxa3表達(dá)水平與年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小及臨床tnm分期無(wú)關(guān)(p0.05)。luminala型、luminalb型、her2過(guò)表達(dá)型、三陰性型anxa3陽(yáng)性表達(dá)率分別是58.46%,58.11%,59.46%,79.66%,anxa3在三陰性乳腺癌患者中陽(yáng)性表達(dá)率(79.66%)明顯高于其他類(lèi)型(χ2=9.226,p0.05)。4截止至2015年6月,309例患者隨訪時(shí)間為66~78個(gè)月,中位隨訪時(shí)間71個(gè)月。71個(gè)月dfs為68.93%(213/309),死亡58例,71個(gè)月os為81.23%(251/309),采用cox回歸模型進(jìn)行多因素分析,結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量和anxa3表達(dá)水平則被分別認(rèn)定為影響dfs和os的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,兩者對(duì)dfs的相關(guān)危險(xiǎn)度分別為2.181和1.569,對(duì)os的相關(guān)危險(xiǎn)度分別是2.052和1.698。結(jié)論:1anxa3表達(dá)水平與乳腺癌患者年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小及臨床tnm分期無(wú)關(guān)。2anxa3表達(dá)水平與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量、組織學(xué)分級(jí)及分子分型有關(guān),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3枚、組織分化Ⅲ級(jí)及三陰性乳腺癌患者中陽(yáng)性表達(dá)率提高。3anxa3陽(yáng)性表達(dá)者dfs低于陰性表達(dá)者,兩者間os的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但anxa3陽(yáng)性表達(dá)者os有降低趨勢(shì)。4淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量和anxa3表達(dá)水平則被分別認(rèn)定為影響乳腺癌患者dfs和os的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。5anxa3可作為潛在判斷乳腺癌生物學(xué)行為、指導(dǎo)判斷患者無(wú)病生存期及總生存期的生物學(xué)標(biāo)志物。第二部分膜聯(lián)蛋白a3mrna及蛋白在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的表達(dá)及意義目的:分析膜聯(lián)蛋白a3(annexina3,anxa3)mrna及蛋白在正常乳腺組織及不同分化程度乳腺癌組織中的表達(dá),探討anxa3在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用及意義。方法:選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心2015年4月至2015年10月資料完整的乳腺癌組織標(biāo)本81例,患者均為女性,年齡29~80歲,中位年齡50歲。依照第三版who制定的病理分類(lèi)方案,術(shù)后病理:浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌66例、浸潤(rùn)性小葉癌4例、浸潤(rùn)性導(dǎo)管-小葉混合癌2例,篩狀癌1例、分泌性癌1例,導(dǎo)管內(nèi)癌7例;依照2010年ajcc第7版tnm分期,Ⅰ期11例、Ⅱ期50例、Ⅲ期19例、iv期1例;于常規(guī)取材時(shí),在距癌灶7cm處隨機(jī)切取乳腺組織0.5cm×0.5cm大小,并經(jīng)病理診斷證實(shí)為正常腺體組織,作為對(duì)照組。采用熒光定量rt-pcr法檢測(cè)乳腺癌組織及正常乳腺組織中anxa3mrna水平;利用western-blot技術(shù)檢測(cè)乳腺癌組織及正常乳腺組織中anxa3蛋白表達(dá)水平;分析乳腺癌組織中anxa3mrna和蛋白表達(dá)水平與年齡、月經(jīng)狀況、臨床分期、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、分子分型等臨床生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系。采用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)乳腺癌組織及正常乳腺組織細(xì)胞周期,比較乳腺癌組織與正常乳腺組織細(xì)胞增殖指數(shù)及anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞增殖指數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果:1乳腺癌組織中anxa3mrna水平(0.0667±0.0314)顯著高于正常乳腺組織中anxa3mrna水平(0.0273±0.0268)(p0.01)。anxa3蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)水平(0.68±0.10)顯著高于在乳腺正常組織中的表達(dá)(0.25±0.07)(p0.01)。2乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量3個(gè)者anxa3mrna水平(0.0815±0.0306)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(0.0577±0.0363),亦高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量1~3個(gè)者(0.0733±0.0030)(p0.05)。有脈管瘤栓者anxa3mrna水平(0.0841±0.0321)高于無(wú)脈管瘤栓者(0.0607±0.0232)(p0.05)。乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平均與年齡、月經(jīng)狀況、臨床tnm分期、腫瘤大小及組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)(p0.05)。3三陰性乳腺癌患者anxa3mrna水平(0.0943±0.0281)高于luminala型者(0.0627±0.0185)、luminalb型者(0.0631±0.0301)、her2過(guò)表達(dá)者(0.0647±0.0434)(p0.05)。乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量3個(gè)者anxa3蛋白表達(dá)水平(0.76±0.09)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(0.65±0.08)、亦高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量1~3個(gè)者(0.68±0.12)(p0.05),有脈管瘤栓者anxa3蛋白表達(dá)水平(0.71±0.10)高于無(wú)脈管瘤栓者(0.65±0.09)(p0.05),三陰性乳腺癌患者anxa3蛋白表達(dá)水平(0.81±0.06)高于luminala型者(0.64±0.10)、luminalb型者(0.67±0.10)、her2過(guò)表達(dá)者(0.69±0.13)(p0.05)。4乳腺癌組織g0/1期細(xì)胞為(58.85±9.32)%,s期細(xì)胞為(20.09±13.16)%,g2/m期細(xì)胞為(21.06±13.69)%;正常乳腺組織g0/1期細(xì)胞為(82.52±3.86)%,s期細(xì)胞為(6.57±5.37)%,g2/m期細(xì)胞為(10.91±5.70)%。與正常乳腺組織相比,乳腺癌組織g0/1期細(xì)胞顯著降低(p0.01)。乳腺癌組織細(xì)胞增殖指數(shù)(41.15±9.32)%較正常乳腺組織細(xì)胞增殖指數(shù)(17.48±3.86)%顯著增高(p0.01)。5乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞增殖指數(shù)呈正相關(guān)性,(pearson相關(guān)系數(shù)=0.304,p=0.006;pearson相關(guān)系數(shù)=0.341,p=0.002)。結(jié)論:1乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平顯著高于正常乳腺組織。2乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量3個(gè)組表達(dá)最高;有脈管瘤栓者anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平高于無(wú)脈管瘤栓者;三陰性乳腺癌anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平高于其他分子分型。3乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞增殖指數(shù)呈正相關(guān)性。4乳腺癌組織中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平與患者年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小及臨床tnm分期、病理組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)。anxa3可能參與并促進(jìn)了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及增殖、轉(zhuǎn)移的過(guò)程。第三部分膜聯(lián)蛋白a3對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖及侵襲影響的研究目的:本部分以乳腺癌細(xì)胞株為研究對(duì)象進(jìn)一步觀察乳腺癌細(xì)胞株中膜聯(lián)蛋白a3(annexina3,anxa3)表達(dá)及抑制anxa3表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的改變,探討anxa3在乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲中的作用機(jī)制。方法:選取高侵襲性人乳腺癌細(xì)胞株mda-mb-231及低侵襲性人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7,熒光定量rt-pcr檢測(cè)mda-mb-231及mcf-7細(xì)胞中anxa3mrna水平;western-blot方法檢測(cè)mda-mb-231及mcf-7細(xì)胞中anxa3蛋白表達(dá)水平。選擇高表達(dá)anxa3的mda-mb-231細(xì)胞株進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。成功構(gòu)建了3個(gè)針對(duì)anxa3基因的shrna質(zhì)粒,經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染mda-mb-231細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)anxa3-sh2對(duì)mda-mb-231細(xì)胞中anxa3mrna抑制效率最高。篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞命名為mda-mb-231-sh,轉(zhuǎn)染nc質(zhì)粒的細(xì)胞命名為mda-mb-231-nc。實(shí)驗(yàn)分為三組觀察:轉(zhuǎn)染組為轉(zhuǎn)染anxa3-sh2質(zhì)粒的mda-mb-231-sh,空轉(zhuǎn)組為轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)粒的mda-mb-231-nc,對(duì)照組為未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的mda-mb-231。western-blot方法檢測(cè)三組anxa3蛋白表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞遷移能力;transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果:1mda-mb-231細(xì)胞anxa3mrna相對(duì)表達(dá)量(0.0696±0.0248)與mcf-7細(xì)胞anxa3mrna相對(duì)表達(dá)量(0.0236±0.0149)相比顯著增高(p0.01)。mda-mb-231細(xì)胞anxa3蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.76±0.02)顯著高于mcf-7細(xì)胞中anxa3蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.40±0.02)(p0.01)。2轉(zhuǎn)染組(mda-mb-231-sh)細(xì)胞中anxa3蛋白表達(dá)量顯著低于空轉(zhuǎn)組(mda-mb-231-nc)及對(duì)照組(mda-mb-231)細(xì)胞中的表達(dá)量(p0.01)。3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞增殖周期結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染組(mda-mb-231-sh)中g(shù)0/1期細(xì)胞為(59.27±0.87)%,s期細(xì)胞為(24.73±1.68)%,g2/m期細(xì)胞為(15.93±1.15)%;空轉(zhuǎn)組(mda-mb-231-nc)細(xì)胞中g(shù)0/1期細(xì)胞為(53.63±1.80)%,s期細(xì)胞為(31.60±2.17)%,g2/m期細(xì)胞為(14.08±0.35)%;對(duì)照組(mda-mb-231)細(xì)胞中g(shù)0/1期細(xì)胞為(52.40±2.91)%,s期細(xì)胞為(34.60±3.56)%,g2/m期細(xì)胞為(13.00±1.48)%。轉(zhuǎn)染組(mda-mb-231-sh)細(xì)胞g0/1期顯著高于空轉(zhuǎn)組(mda-mb-231-nc)及對(duì)照組(mda-mb-231)細(xì)胞g0/1期(p0.05)。mda-mb-231-sh細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferationindex,pi)(40.67±0.93)%顯著低于mda-mb-231-nc(46.40±1.85)%及mda-mb-231細(xì)胞pi值(47.60±2.91)%(p0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染組(mda-mb-231-sh)細(xì)胞凋亡率(6.73±0.33)%顯著高于空轉(zhuǎn)組(mda-mb-231-nc)(3.58±0.23)%及對(duì)照組(mda-mb-231)細(xì)胞(3.09±0.33)%(p0.01)。4細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染組(mda-mb-231-sh)細(xì)胞遷移能力低于空轉(zhuǎn)組(mda-mb-231-nc)及對(duì)照組(mda-mb-231)細(xì)胞。transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染組(mda-mb-231-sh)細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)少于空轉(zhuǎn)組(mda-mb-231-nc)及對(duì)照組(mda-mb-231)細(xì)胞。結(jié)論:1高侵襲性人乳腺癌細(xì)胞株mda-mb-231中anxa3mrna及蛋白表達(dá)水平均高于低侵襲性人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7。2成功構(gòu)建了3個(gè)針對(duì)anxa3基因的shrna質(zhì)粒,其中h_anxa3-sh2轉(zhuǎn)染效率最高,抑制anxa3效果最好。3通過(guò)抑制anxa3表達(dá)mda-mb-231細(xì)胞細(xì)胞凋亡率顯著升高而細(xì)胞增殖指數(shù)顯著降低,侵襲、遷移能力下降。anxa3亦有可能成為一個(gè)可用于乳腺癌診斷、治療和預(yù)后評(píng)估的潛在的生物學(xué)標(biāo)志物。第四部分膜聯(lián)蛋白a3對(duì)乳腺癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)影響的研究目的:建立乳腺癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,觀察抑制膜聯(lián)蛋白a3(annexina3,anxa3)表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響,進(jìn)而驗(yàn)證anxa3對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的調(diào)控作用。方法:使用第三部分實(shí)驗(yàn)中制備的乳腺癌細(xì)胞mda-mb-231、mda-mb-231-sh及mda-mb-231-nc,建立荷瘤裸鼠動(dòng)物模型。將18只裸鼠隨機(jī)分為3組,每組6只,接種mda-mb-231細(xì)胞者為對(duì)照組;接種mda-mb-231-nc細(xì)胞者為空轉(zhuǎn)組;接種mda-mb-231-sh細(xì)胞者為轉(zhuǎn)染組。自皮下移植瘤開(kāi)始生長(zhǎng)起持續(xù)觀察4周,記錄三組裸鼠的精神、飲食及排便情況,每周測(cè)量一次裸鼠的體重及皮下種植瘤的長(zhǎng)、短徑,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。應(yīng)用活體成像技術(shù)檢測(cè)皮下移植瘤活性程度。he染色分析三組移植瘤組織結(jié)構(gòu)。采用流式細(xì)胞術(shù)及熒光定量rt-pcr檢測(cè)裸鼠皮下移植瘤的細(xì)胞增殖周期及anxa3mrna水平,記錄并比較上述指標(biāo)在三組裸鼠間的差異。結(jié)果:1三組裸鼠分別接種MDA-MB-231、MDA-MB-231-NC及MDA-MB-231-Sh細(xì)胞后,10d左右開(kāi)始成瘤,成瘤率達(dá)100%。2生長(zhǎng)曲線顯示:轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤較對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組生長(zhǎng)緩慢�；铙w成像技術(shù)檢測(cè)顯示:轉(zhuǎn)染組移植瘤生長(zhǎng)活性低于對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組。轉(zhuǎn)染組皮下移植瘤質(zhì)量及體積[(58.55±31.92)mg及(90.62±74.44)mm3]與對(duì)照組[(222.40±133.40)mg及(239.30±110.90)mm3]及空轉(zhuǎn)組[(239.30±110.90)mg及(406.72±95.23)mm3]相比,皮下移植瘤質(zhì)量及體積顯著降低,P0.01。3 HE染色顯示:對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組皮下移植瘤組織細(xì)胞豐富,核分裂象多見(jiàn),瘤組織中有豐富的血管;轉(zhuǎn)染組皮下移植瘤細(xì)胞稀疏,有大量纖維結(jié)締組織增生,瘤組織間血管較少。4轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞中ANXA3 m RNA水平(0.0071±0.0021)顯著低于對(duì)照組(0.0671±0.0087)及空轉(zhuǎn)組(0.0698±0.0104),P0.01。轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞中ANXA3蛋白表達(dá)水平(0.26±0.02)顯著低于對(duì)照組(0.72±0.04)及空轉(zhuǎn)組(0.71±0.06),P0.01。5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染組G0/1期細(xì)胞為(73.84±3.92)%,S期細(xì)胞為(5.57±1.60)%,G2/M期細(xì)胞為(20.41±4.85)%;對(duì)照組G0/1期細(xì)胞為(57.43±2.60)%,S期細(xì)胞為(23.15±2.29)%,G2/M期細(xì)胞為(19.41±1.39)%;空轉(zhuǎn)組G0/1期細(xì)胞為(57.57±2.97)%,S期細(xì)胞為(23.63±3.79)%,G2/M期細(xì)胞為(18.81±1.94)%。轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞增殖指數(shù)(26.17±3.92)%顯著低于對(duì)照組(42.57±2.60)%及空轉(zhuǎn)組(42.43±2.97)%,P0.01,而轉(zhuǎn)染組G0/1期細(xì)胞顯著高于對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組,P0.01。結(jié)論:1抑制MDA-MB-231細(xì)胞ANXA3表達(dá)后,可使轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤較對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組生長(zhǎng)緩慢,且皮下移植瘤質(zhì)量及體積顯著降低,活性程度降低;HE染色下觀察轉(zhuǎn)染組皮下移植瘤細(xì)胞稀疏,有大量的纖維結(jié)締組織增生,瘤組織間血管較少。2轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞中ANXA3 m RNA及蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組。3轉(zhuǎn)染組裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞增殖指數(shù)較對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組顯著降低,而G0/1期細(xì)胞顯著升高。4沉默乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞中ANXA3表達(dá),可以調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖凋亡,抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。ANXA3可能成為乳腺癌基因治療新的潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1853522