本文選題：BRAP + 轉(zhuǎn)移��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：背景和目的:腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥患者死亡的主要原因,但其分子機(jī)制并未完全闡明。多項(xiàng)研究已經(jīng)表明與腫瘤發(fā)生相關(guān)的基因也可能影響腫瘤的轉(zhuǎn)移。因此本課題研究的目的是為了闡明實(shí)驗(yàn)室前期通過全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide association study,GWAS)發(fā)現(xiàn)的易感基因能否影響腫瘤的轉(zhuǎn)移。方法:首先我們運(yùn)用高通量siRNA文庫結(jié)合細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)對(duì)食管癌11個(gè)易感區(qū)段內(nèi)的47個(gè)基因進(jìn)行篩選及功能注釋。利用慢病毒載體在食管癌細(xì)胞(KYSE30和KYSE150)以及HeLa細(xì)胞中將遷移相關(guān)基因進(jìn)行敲降和過表達(dá),體外分析擾動(dòng)其表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。另外我們通過裸鼠尾靜脈注射癌細(xì)胞構(gòu)建裸鼠肺轉(zhuǎn)移瘤模型,體內(nèi)分析敲降其表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞在裸鼠肺部定植的影響。進(jìn)一步我們通過熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)、免疫熒光、免疫印跡以及免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn),分析易感基因影響腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。另外我們采用實(shí)時(shí)定量PCR、免疫印跡以及免疫組化的方法,從mRNA水平和蛋白水平上檢測易感基因在食管癌組織以及癌旁組織中的表達(dá)情況,并通過Log-rank生存分析的方法,分析其表達(dá)和患者生存的關(guān)系。結(jié)果:通過高通量篩選,我們發(fā)現(xiàn)BRAP(BRCA1結(jié)合蛋白)是一個(gè)腫瘤細(xì)胞遷移相關(guān)基因,敲降BRAP的表達(dá)能夠降低腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力以及腫瘤細(xì)胞在裸鼠肺部的定植。高表達(dá)BRAP能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力,其機(jī)制是通過促進(jìn)蛋白激酶PKCα和IKKβ的結(jié)合,使IKKβ發(fā)生磷酸化,進(jìn)而激活NF-κB信號(hào)通路,最終促進(jìn)NF-κB靶基因MMP9、VEGFC的表達(dá)。另外我們發(fā)現(xiàn)DNA水平拷貝數(shù)的增加影響B(tài)RAP在食管癌中高表達(dá),且高表達(dá)患者的生存時(shí)間顯著低于低表達(dá)患者的生存時(shí)間。結(jié)論:在食管癌細(xì)胞和組織中,BRAP的高表達(dá)能夠促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,降低患者的生存時(shí)間。高表達(dá)BRAP的細(xì)胞能夠通過激活NF-κB信號(hào)通路,上調(diào)MMP9和VEGFC的表達(dá),促進(jìn)裸鼠肺部轉(zhuǎn)移瘤的形成。因此,BRAP可能成為食管癌治療的靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background and objective: tumor metastasis is the main cause of death in cancer patients, but its molecular mechanism is not fully elucidated. Several studies have shown that genes associated with tumorigenesis may also affect tumor metastasis. Therefore, the purpose of this study is to elucidate whether the susceptibility genes discovered by Genome-wide association studyGWASin the early stage of the laboratory can affect the metastasis of tumor. Methods: first, 47 genes in 11 susceptible regions of esophageal cancer were screened and annotated by high throughput siRNA library and cell migration assay. Lentivirus vectors were used to knockdown and overexpression the genes associated with migration in esophageal carcinoma cell line KYSE30 and KYSE150) and to analyze the effect of perturbed expression on cell migration and invasion in vitro. In addition, the lung metastasis model of nude mice was established by injecting cancer cells into tail vein of nude mice, and the effect of knockout on tumor cell colonization in nude mice lung was analyzed in vivo. Furthermore, we analyzed the molecular mechanism of susceptibility genes affecting tumor cell metastasis by luciferase reporter gene system, immunofluorescence, immunoblotting and immunoprecipitation. In addition, we used real-time quantitative PCR, Western blot and immunohistochemical methods to detect the expression of susceptible genes in esophageal carcinoma and adjacent tissues from the level of mRNA and protein, and by means of Log-rank survival analysis. The relationship between its expression and patient survival was analyzed. Results: through high throughput screening, we found that BRAP(BRCA1 binding protein is a gene associated with tumor cell migration. The expression of knockdown B RAP can reduce the migration and invasion of tumor cells and the colonization of tumor cells in the lung of nude mice. Overexpression of BRAP can promote the migration and invasion ability of tumor cells. The mechanism is that IKK 尾 is phosphorylated by promoting the binding of protein kinase PKC 偽 and IKK 尾, thus activating NF- 魏 B signaling pathway, and finally promoting the expression of NF- 魏 B target gene MMP9 and VEGFC. In addition, we found that the increase of DNA horizontal copy number affected the high expression of BRAP in esophageal carcinoma, and the survival time of patients with high expression was significantly lower than that of patients with low expression. Conclusion: the high expression of BRAP in esophageal carcinoma cells and tissues can promote the invasion and metastasis ability of esophageal cancer cells and reduce the survival time of the patients. The cells with high expression of BRAP can up-regulate the expression of MMP9 and VEGFC by activating NF- 魏 B signaling pathway and promote the formation of lung metastases in nude mice. Therefore, BRAP may be a target for the treatment of esophageal cancer.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：1851738